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HCBP6蛋白与HCVcore蛋白相互作用的研究

杨琼  
【摘要】: 目的: 在前期工作的基础上,进一步应用免疫共沉淀方法验证HCVcore蛋白与HCBP6蛋白之间的相互作用。并应用激光共聚焦技术了解HCVcore蛋白与HCBP6蛋白的亚细胞定位。为进一步明确HCBP6蛋白功能奠定基础。 方法: 1、用实时荧光PCR方法检测HCBP6在7种癌细胞系的表达,选择较高表达的细胞系用于随后的蛋白之间相互作用的真核水平的研究。 2、将真核表达质粒pcDNA3.1-hcvcore、pcDNA3.1/myc-his(-)-hcbp6、pcDNA3.1及pcDNA3.1/myc-his(-)瞬时转染HepG2细胞,应用免疫共沉淀方法验证HCVcore蛋白与HCBP6蛋白之间的相互作用。 3、构建HCBP6的绿色荧光表达载体和HCVcore的红色荧光表达载体,转染HepG2细胞,模拟该蛋白在细胞中的表达,在激光共聚焦显微镜下观察HCBP6及HCVcore蛋白的亚细胞定位。 结果: 1、HCBP6在Capan2细胞中表达最高,依次为HepG2、Hela、Huh7、7721、7701与7402。 2、pcDNA3.1-hcvcore及pcDNA3.1/myc-his(-)-hcbp6在HepG2细胞中单独转染和共转染都获得成功。 3、HCBP6的绿色荧光表达载体和HCVcore的红色荧光表达载体在HepG2细胞中均得到表达。激光共聚焦显微镜观察到HCBP6蛋白和HCVcore蛋白均主要定位于细胞浆中。 结论: 1、HCVcore为丙型肝炎病毒核心蛋白,研究它与HCBP6之间的作用应该选择一种肝癌细胞系。HCBP6在HepG2细胞系中表达水平较高,又因为HepG2是肝癌细胞系所以选择HepG2为后续实验的细胞系。 2、HCBP6蛋白和HCVcore蛋白之间确实存在相互作用。 3、HCBP6蛋白和HCVcore蛋白在细胞内均分布于细胞浆中,分布的部位相同,再次证明这两种蛋白之间存在相互作用。并初步表明HCBP6蛋白在细胞浆中发挥生物学活性。


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