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《大连医科大学》 2010年
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肺癌患者外周血血浆p16,Rassfla, E-cadherin, MGMT基因异常甲基化检测

邓轶方  
【摘要】: 目的:肺癌是常见的恶性肿瘤之一,在世界范围内其发病率和死亡率均占肿瘤性疾病中的第一位,主要原因是肺癌早期诊断率低且预后差。目前影象学上发现的肺癌至少有109个癌细胞,相当于1cm大小。传统的脱落细胞学和支气管镜病理活检阳性率并不令人满意。提高肺癌的早期临床诊断率和延长肺癌患者的存活率是目前急需解决的间题。用一种新的有效的检测方法来提高肺癌的早期检出率是新近研究的热点。近年来,随着对肺癌发生、发展的细胞分子生物学机理的了解,将一些特异性的细胞分子生物学标志用于肺癌患者的早期诊断有着令人乐观的前景。其中抑癌基因的异常甲基化与肺癌的发生有着密切的联系。目前,基因异常甲基化的检测方法一般参考Herman的经典方法甲基化特异性PCR (methylation-specific PCR,MSP)。血浆检测是无创性检测,可进行大范围普查,临床应用具有很大的可行性,对于肿瘤的早发现、早治疗具有重要意义。本研究利用MSP法检测血浆中p16、Rassfla、E-cadherin、MGMT基因甲基化情况,分析这四个基因甲基化率的相关性。若单独使用这些基因其甲基化检出率较低[3-51,临床运用局限性大;探讨联合检测血浆中四个基因甲基化对NSCLC早期诊断的意义,四项指标联合检测诊断NSCLC特异性得到提高;并分析四个基因的相关性。 方法:通过对采集到的肺癌患者血浆标本提取DNA,利用亚硫酸氢盐对其DNA进行碱基转化,甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶,而非甲基化的胞嘧啶不发生改变。通过经典的甲基化特异性PCR对DNA进行扩增反应,产物进行琼脂糖凝胶电泳,检测基因甲基化率,对四个基因间的相关性进行分析。 结果:用该方法分析了47例NSCLC病人,以及10例的肺部炎性患者和10例健康体检者血浆,结果在血浆中p16、Rassfla、E-cadherin、MGMT四个基因启动子区域的异常甲基化检出率分别为46.8%(22/47)、42.6%(20/47)、31.9(15/47)和40.4%(19/47)。20例肺部炎性患者和健康体检者血浆标本四个基因均未检测出甲基化。四个基因两两之间甲基化率无差异。p16、Rassfla基因甲基化率与有无淋巴转移有关,与患者性别、年龄、组织类型、临床分期均无关。E-cadherin基因甲基化率与患者性别、年龄、临床分期有无淋巴转移有关,与组织类型与均无关。MGMT基因甲基化率与临床分期,有无淋巴转移有关,与患者性别、年龄、组织类型均无关。Rassfla基因甲基化率分别于p16、E-cadherin、MGMT基因存在相关性。p16、E-cadherin、MGMT基因甲基化率两两之间无相关性。 结论:p16、Rassfla、E-cadherin、MGMT四个基因异常甲基化多发生在肺癌早期,但本研究中单个基因甲基化检出率较低,若采用四个基因联合共同检测的方法,甲基化检出率达85.1%,有明显提高。循环血采集方便,相对创伤小,患者易于接受,联合检测患者血浆中多个基因的甲基化率,所以该方法可以作为一项辅助NSCLC早期诊断的措施。
【学位授予单位】:大连医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R734.2

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