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《辽宁中医药大学》 2011年
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芪附汤及其拆方干预阿霉素心脏毒性的药效学与作用机制研究

于彩娜  
【摘要】:目的: 通过考察芪附汤及其拆方对阿霉素心脏毒性模型大鼠的一般状态、体质量与心脏质量及其心脏指数、心电图、心肌组织形态的变化,了解芪附汤及其拆方干预阿霉素心脏毒性的效应;通过检测心肌SOD与GSH-Px活性与含量、MDA含量以及心肌细胞凋亡率和Bax、Bcl-2、P53、Caspaes-3的mRNA表达水平的变化,探讨芪附汤及其拆方干预阿霉素心脏毒性的抗氧化应激和抑制细胞凋亡的作用机制。 材料与方法: 本实验采用阿霉素(2mg/kg,每周1次)腹腔注射的方法复制阿霉素心脏毒性损伤大鼠模型,同时予以芪附汤及其拆方进行干预。除正常组、模型组外,正常大鼠给予附子水煎液灌胃为附子1组,中药对照组以生脉饮作为中药阳性对照药灌胃给药,以芪附汤及其拆方——黄芪组、附子2组、芪附汤组作为药物治疗组。造模与给药均共4周,同时观察大鼠的一般状态。4周后检测心电图;处死动物并摘取心脏进行指标检测。称取心脏质量,计算心脏指数(心脏质量/体质量),留取一部分心肌标本,通过光镜与电镜观察心肌组织形态变化及心肌细胞超微结构改变,采用化学比色法检测SOD、GSH-Px活性和MDA含量,采用ELISA法检测SOD和GSH-Px的含量,以流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,实时定量PCR检测Bax与Bcl-2的mRNA表达水平,并计算其比值,实时定量PCR检测P53、Caspaes-3的mRNA表达水平。 结果: 1.大鼠一般状态:与正常组相比,模型组大鼠出现不同程度的精神萎靡,活动减少,喜蜷卧,抓取时反抗力减弱;毛发干枯、无光泽,伴有脱毛现象,有些大鼠口鼻可见明显血渍,腹水,个别出现腹泻等症状;与模型组大鼠相比,中药对照组、黄芪组、芪附汤组大鼠上述症状均较轻,其中黄芪组大鼠一般状态相对最好。附子2组大鼠一般状态不及模型组。附子1组大鼠一般状态与正常组基本一致。 2.大鼠体质量,心脏质量和心脏指数:与正常组比较,模型组大鼠体质量显著下降,有统计学意义(P﹤0.05);与模型组相比,中药对照组、黄芪组、芪附汤组大鼠体质量显著增长,有统计学意义(P﹤0.05)。与正常组比较,模型组心脏质量下降,有统计学意义(P﹤0.05);与模型组比较,中药对照组、附子2组、黄芪组、芪附汤组心脏质量均有不同程度增长(P﹥0.05)。与正常组比较,其他各组心脏指数均有所下降(P﹥0.05);与模型组相比,各给药组心脏指数无明显变化(P﹥0.05)。附子1组大鼠体质量、心脏质量和心脏指数与正常组基本一致。 3.大鼠心电图变化:与正常组相比,模型组大鼠心率显著减慢(P﹤0.05),QRS波群电压和明显降低(P﹤0.05),与用药前心电图相比减低30%以上,Q-T间期明显延长(P﹤0.05),个别出现心律失常;与模型组相比,芪附汤组、黄芪组、中药对照组和附子2组大鼠心率增加显著,芪附汤组、黄芪组和附子2组大鼠QRS波群电压和明显增高,芪附汤组、黄芪组和中药对照组大鼠Q-T间期显著缩短,均有统计学意义(P﹤0.05)。附子1组大鼠心率、QRS波群电压和与Q-T间期和正常组基本一致。 4.光镜下和电镜下心肌组织形态学变化:光镜下观察模型组大鼠心肌细胞呈颗粒变性,肌间隙增宽,部分心肌纤维断裂,少数淋巴细胞侵润;电镜下观察模型组大鼠心肌细胞超微结构明显损伤,肌丝断裂溶解,Z线排列宽窄不一、部分溶解,线粒体肿胀,部分嵴断裂模糊不清,个别形成大小不等空泡。附子2组大鼠心肌病理改变较模型组更为严重,中药对照组、黄芪组与芪附汤组大鼠心肌组织形态有不同程度改善。附子1组大鼠心肌有轻微病理改变,接近正常心肌组织。 5.大鼠心肌细胞SOD活性和含量的变化:与正常组比较,模型组大鼠心肌细胞SOD活性减弱,含量降低,有统计学意义(P﹤0.05)。与模型组比较,中药对照组、黄芪组、芪附汤组大鼠心肌细胞SOD活性升高,均有统计学意义(P﹤0.05)。 6.大鼠心肌细胞GSH-Px活性和含量的变化:与正常组比较,模型组大鼠心肌细胞GSH-Px活性降低,含量减少,有统计学意义(P﹤0.05);与模型组比较,中药对照组、黄芪组、芪附汤组大鼠心肌细胞GSH-Px活性升高,各用药组大鼠心肌细胞GSH-Px含量升高,均有统计学意义(P﹤0.05)。 7.大鼠心肌细胞MDA含量测检的变化:与正常组比较,模型组大鼠心肌细胞MDA含量升高,有统计学意义(P﹤0.05);与模型组比较,中药对照组,黄芪组,芪附汤组大鼠心肌细胞MDA含量降低,有统计学意义(P﹤0.05)。 8.心肌细胞凋亡率显示:与正常组比较,模型组大鼠心肌细胞凋亡率显著上升,有统计学意义(P﹤0.05);与模型组比较,中药对照组、附子2组、黄芪组、芪附汤组大鼠心肌细胞凋亡率均有显著下降,有统计学意义(P﹤0.05)。 9.大鼠心肌Bax与Bcl-2的mRNA表达结果:与正常组比较,模型组大鼠心肌Bax的mRNA表达水平上调,Bcl-2的mRNA表达水平下调,Bcl-2/Bax降低,均有统计学意义(P﹤0.05)。与模型组比较,附子2组、黄芪组、芪附汤组大鼠心肌Bax的mRNA表达水平下调;中药对照组,黄芪组,芪附汤组大鼠心肌Bcl-2的mRNA表达水平上调,有统计学意义(P﹤0.05);中药对照组、黄芪组、芪附汤组Bcl-2/Bax升高,有统计学意义(P﹤0.05)。 10.大鼠心肌P53的mRNA表达结果:与正常组比较,模型组P53的mRNA表达水平上调,有统计学意义(P﹤0.05);与模型组比较,中药对照组、黄芪组、芪附汤组P53的mRNA表达水平下调,有统计学意义(P﹤0.05)。 11.大鼠心肌Caspase-3的mRNA表达显示:与正常组比较,模型组Caspase-3的mRNA表达水平上调,有统计学意义(P﹤0.05);与模型组比较,中药对照组、附子2组、黄芪组、芪附汤组Caspase-3的mRNA表达水平下调,均有统计学意义(P﹤0.05)。 结论: 在本实验条件下, 1.附子与阿霉素合用具有心脏毒性叠加作用。 2.芪附汤和黄芪对阿霉素心脏毒性具有防护作用。 3.芪附汤和黄芪防护阿霉素心脏毒性损伤的机制与抗氧化应激、抑制凋亡相关。
【学位授予单位】:辽宁中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R285.5

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