CSG脾虚与湿热模型大鼠胃粘膜组织微观变化的对比研究

【摘要】：慢性浅表性胃炎(chronic superficial gastritis,CSG)是由多种原因引起的慢性胃粘膜浅表性炎症,此病是目前发病率较高的消化系统疾病之一。其临床症状主要有:慢性不规则的上腹隐痛、腹胀、嗳气等,尤以饮食不当时明显,部分患者可有反酸,偶有呕吐等表现,其病因有:细菌、病毒及毒素、吸烟、某些药物、刺激性食物、循环及代谢功能障碍、胆汁及十二指肠液反流、幽门螺旋杆菌(HP)感染、心身因素等。 该病在祖国医学中属“胃脘痛”、“痞满”、“嘈杂”、“吞酸”等范畴,病因有外邪犯胃、饮食不节、情志失调、脾胃虚弱等,病位在胃,与肝、脾关系最为密切,临床主要可分为:脾胃虚弱型、肝胃不和型、脾胃湿热型、胃阴不足型、胃络血瘀型等不同证型。 本研究采用证病结合动物模型,复制西医的病(慢性浅表性胃炎)和中医的证(脾虚证和湿热证),探索同一疾病不同证型在能量代谢和细胞凋亡方面相关指标的差异,探讨中医证的本质。 目的:建立慢性浅表性胃炎证病结合模型大鼠,研究慢性浅表性胃炎证病结合模型大鼠在能量代谢和细胞凋亡方面的差异,根据相关指标的差异,分析同一疾病不同证型在能量代谢与细胞凋亡之间的相关性,以期为中医的辨证论治提供微观层面上的依据。 材料与方法: 1.采取病证模型同时复制的方法,将大鼠随机选取10只作为正常对照组,每天灌胃2ml生理盐水,其余30只按体重每天灌5%水杨酸钠溶液10ml/kg·d,第一阶段造模时间为三周。三周后,将这30只大鼠随机分为三组,分别为单纯CSG组、湿热CSG组、脾虚CSG组。每组大鼠在每天灌胃5%水杨酸钠溶液10ml/kg·d的同时,单纯CSG组不给其它处理因素,湿热CSG组用200g/L的蜂蜜水自由饮用,隔日灌服10ml/kg·d白酒,与白酒隔日灌服10ml/kg·d油脂。脾虚CSG组用破气苦降与饥饱失常法造脾虚模型,用小承气汤(大黄12g、厚朴15g、枳实9g)换算成动物剂量浓缩后10ml/kg·d日一次灌胃,隔日半量饮食,自由饮水,第二阶段造模时间为二周。模成后取材。 2.观察各组大鼠胃粘膜病理变化。 3.进行实验指标的检测:以比色法测各组大鼠胃组织琥珀酸脱氢酶(SDH)含量;以ELISA法测各组大鼠胃组织细胞色素C(Cyt-C)含量;以TUNEL法对各组大鼠胃粘膜上皮细胞凋亡情况进行检测;以RT-PCR法检测各组大鼠胃组织UCP2mRNA表达及凋亡调控基因Bcl-2mRNA表达情况。 结果: 1.造模后大鼠一般状态改变:湿热CSG组大鼠:前期体重增长较快,后期逐渐变缓,嗜睡懒动,纳呆少饮,大便或干或软,毛发疏松粗糙,甚至毛发竖立,晦暗无光泽,肛温较前比较有升高;脾虚CSG组大鼠:大便稀溏,肛周有污物,纳呆,食量减少,毛发枯槁、萎靡、咪眼、拱背、体重增长较缓,肛温较前比较有降低。造模后各组大鼠体重增加数值比较:正常组单纯CSG组湿热CSG组脾虚CSG组。其中,脾虚CSG组与其它三组比较均有统计学意义。其中与正常组及单纯CSG组比较,P0.01,与湿热CSG组比较,P0.05。湿热CSG组与正常组比较,P0.05。肛温增加数值比较:湿热CSG组单纯CSG组正常组脾虚CSG组,其中脾虚CSG组与其它三组比较均有统计学意义,与单纯CSG组及湿热CSG组比较,P0.01,与正常组比较,P0.05。造模后各组胃粘膜上皮细胞病理情况:正常组:胃粘膜正常,结构层次清楚,上皮结构完整,无损伤,粘膜腺体排列整齐,腺腔整洁,粘膜层无炎细胞浸润;单纯CSG组:胃粘膜固有层可见轻度的炎细胞浸润,粘膜下层可见血管扩张、充血;脾虚CSG组:粘膜缺损、脱落、坏死,粘膜固有层可见炎细胞浸润;湿热CSG组:粘膜缺损、脱落、坏死,粘膜固有层可见较多炎细胞浸润。四组大鼠胃粘膜炎症组织病理学积分比较:正常组单纯CSG组脾虚CSG组湿热CSG组,正常组与其它三组比较,有统计学意义,P0.01。湿热CSG组与脾虚CSG组比较,P0.05,与单纯CSG组比较,P0.01。 2.各组大鼠的SDH含量变化由多至少为:湿热CSG组正常组单纯CSG组脾虚CSG组。其中,湿热CSG组与其它三组比较,均有统计学意义,与正常组比较,P0.05,与单纯CSG组及脾虚CSG组比较,P0.01;脾虚CSG组与其它三组比较,有统计学意义,均P0.01。而正常组与单纯CSG组比较未有统计学意义,P0.05。 3.各组大鼠胃组织细胞胞浆中Cyt-C含量由多至少为:脾虚CSG组湿热CSG组单纯CSG组正常组。其中,脾虚组CSG组与其它三组比较,各组均P0.01;正常组与单纯CSG组比较, P0.05,正常组与湿热CSG组比较,P0.01;单纯CSG组与湿热CSG组比较,P0.05。 4.各组大鼠胃组织UCP2mRNA表达由强至弱为:脾虚CSG组单纯CSG组正常组湿热CSG组。脾虚CSG组与其它三组比较,均有统计学意义,其中,与单纯CSG组及正常组比较,P0.05,与湿热CSG组比较,P0.01。 5.各组大鼠胃粘膜上皮细胞凋亡指数排列顺序为脾虚CSG组湿热CSG组单纯CSG组正常组。其中,正常组与其它三组比较有统计学意义,P0.01;脾虚CSG组与湿热CSG组比较,P0.05,与单纯CSG组比较,P0.01。三个模型组较正常组Bcl-2mRNA表达均降低,脾虚CSG组Bcl-2mRNA表达最低,与其它三组比较有统计学意义,与单纯CSG组比较,P0.05,与正常组及湿热CSG组比较,P0.01。 结论: 1.根据大鼠的一般状态观察,包括大鼠外观、饮食、体重、大小便、皮毛、精神状态、活动情况、肛温等,具备脾虚证及湿热证的证候特点。根据胃粘膜病理情况,模型三组符合慢性浅表性胃炎特征。用此种方法可以复制出慢性浅表性胃炎证病结合模型。 2.SDH活性在湿热CSG组中及脾虚CSG组中含量的不同,体现了湿热证与脾虚证在同一疾病状态下(慢性浅表性胃炎)能量代谢方面的差异。 3.脾虚CSG组大鼠胃细胞胞浆内Cyt-C含量明显高于其它三组,体现了脾虚时,可能出现细胞膜通透性增高,Cyt-C可由线粒体进入胞浆内,导致胞浆内Cyt-C含量增高。此亦反映了脾虚时将会导致线粒体呼吸链功能异常,ATP缺乏,能量产生不足。 4.脾虚CSG组胃组织UCP2mRNA表达明显高于其它三组,推测脾虚CSG组ATP生成下降,而湿热组胃组织UCP2mRNA表达下降,从而产生更多ATP,起到调节能量代谢的作用,这与先前的实验二及实验三体现的脾虚CSG组能量代谢障碍、湿热组CSG组能量代谢亢进相一致;但在本实验中UCP2调控机制尚待进一步研究探讨。 5.各组大鼠胃粘膜上皮细胞凋亡指数排列顺序为脾虚CSG组湿热CSG组单纯CSG组正常组。湿热CSG组胃粘膜炎症反应明显,细胞凋亡增多,而脾虚CSG组为虚证,胃粘膜功能减退,细胞凋亡增加。根据凋亡调控基因Bcl-2mRNA表达情况可以发现,Bcl-2mRNA的表达与凋亡过程的发生有密切的关系,其与各组大鼠的凋亡指数呈负相关。 6.慢性浅表性胃炎不同证型大鼠在能量代谢与细胞凋亡方面具有相关性,能量代谢障碍与细胞凋亡指数较高呈现一致性,而细胞色素C在能量代谢及凋亡方面均起到重要作用。

【关键词】：慢性浅表性胃炎 证病结合 能量代谢 细胞凋亡 实验研究
【学位授予单位】：辽宁中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R259
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