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《辽宁中医药大学》 2013年
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三黄糖肾康对早期DN大鼠微炎症状态影响的实验研究及临床疗效观察

奚悦  
【摘要】:目的: 1.三黄糖肾康颗粒对早期糖尿病肾病大鼠的药效学研究。 2.研究三黄糖肾康颗粒对早期糖尿病肾病的药物作用机制。 3.观察三黄糖肾康颗粒对早期糖尿病肾病患者的临床疗效。 材料与方法: 1.实验研究 1.1造模方法 采用高糖高脂饲料喂养结合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的造模方法,复制出糖尿病模型,引起胰岛素抵抗、高血糖,导致微量白蛋白尿的出现。 1.2分组和给药方法 SPF级Wistar大鼠90只,体重280±20g。将90只大鼠按体重编为1-90号,采用随机数字法将90只大鼠随机分为正常组和造模组,糖尿病模型成功后又按照血糖水平将造模组大鼠重新随机分组,最后共为6组,分别为A:正常组;B:模型组;C:中药预防组;D1:中药低剂量组;D2:中药高剂量组;E:西药组。除正常组外,其余各组采用高脂高糖饲料联合小剂量STZ(42mg/Kg.bw)的方法复制糖尿病肾病(DN)大鼠模型,模型复制成功2周后,除正常组和中药预防组外,分别给与相应药物经口灌胃干预,连续给药8周;中药预防组大鼠自模型复制之日起即开始给药,连续给药10周。中药预防组和中药低剂量组按照正常成人剂量(g/kg)的6.3倍给药;中药高剂量组按照低剂量的3倍给药。西药组给予贝那普利灌胃,给药量按照正常成人给药量等效换算成成年大鼠给药量,即0.9mg/kg.d。 1.3观察指标与测定方法 主要观察三黄糖肾康颗粒的药效学指标及对糖尿病肾病大鼠微炎症状态的影响,包括实验结束后,分别对各组大鼠糖化血红蛋白、肌酐、尿素氮、血β2-微球蛋白、血糖及尿中尿微量白蛋白含量进行检测。各组大鼠处死后摘取肾脏,以4%多聚甲醛溶液固定,采用HE染色和PAS染色的方法,观察各组大鼠肾脏病理变化情况。采用荧光定量PCR方法对各组大鼠肾脏组织中NF-κB、MCP-1和CCR2mRNA表达水平进行检测。采用western-blot方法对各组大鼠肾脏组织中NF-κB、MCP-1和CCR2蛋白表达水平进行检测。通过对以上效应指标的检测,进一步探讨了三黄糖肾康颗粒对糖尿病肾病大鼠的疗效及其部分作用机制。 2.临床研究 选择气虚血瘀型早期糖尿病肾病患者40例,采用随机对照的方法,将患者随机分为中药治疗组及西药对照组各20例。中药治疗组患者在基础治疗基础上,加用三黄糖肾康颗粒,每日一付,分两次口服;西药对照组患者在基础治疗基础上,给予口服洛汀新治疗,每次10mg,每日一次,疗程8周。完成治疗周期后,对两组患者进行一般体格检查、谷丙转氨酶(ALT)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、空腹及餐后2小时血糖、糖化血红蛋白、24h尿微量白蛋白(U-mAlb)、中医症状疗效指数等检查,以观察三黄糖肾康颗粒对早期糖尿病肾病患者的临床疗效。 结果: 1.动物实验结果 1.1对大鼠一般情况的影响 实验过程中,正常组大鼠精神状态良好,未出现死亡;造模组大鼠食量减少,饮水量明显增多,共死亡6只。西药组大鼠死亡1只;中药高剂量组死亡1只;中药低剂量组死亡1只;模型组共死亡3只。 1.2对大鼠尿微量白蛋白的影响 与正常组比较,其余各组大鼠尿中微量白蛋白含量显著升高(p0.01),有统计学差异;模型组尿微量白蛋白含量最高,与该组比较,各治疗组及预防组显著降低(p0.05),有统计学意义;各治疗预防组组间比较,预防组低于各治疗组且其差异有统计学意义(p0.01);与西药组比较,预防组低于西药组且其差异有统计学意义(p0.01),低剂量组高于西药组且其差异有统计学意义(p0.05),高剂量组与西药组比较差异无统计学意义(p>0.05)。 1.3对大鼠血糖的影响 除正常组,其余各组大鼠血糖均高于16.7mmol/L,与正常组比较,其余各组大鼠血糖显著增高(p0.01),有统计学意义;与模型组比较,西药组、预防组、高剂量组、低剂量组血糖值均低于模型组,且其差异有统计学意义(p0.01);预防组血糖值最低,与其余各组比较差异有统计学意义(p0.05);与中药低剂量组比较,预防组及高剂量组均低于低剂量组,且其差异有统计学意义(p0.01,p0.05);高剂量组与西药组组间比较差异无统计学意义(p>0.05)。 1.4对大鼠糖化血红蛋白的影响 各组大鼠血清糖化血红蛋白含量测定结果显示,模型组及各治疗预防组均显著高于正常组(p<0.01)有统计学意义;与模型组比较,预防组及各治疗组均显著降低(p<0.01)有统计学意义;西药组、预防组、中药高剂量组及中药低剂量组组间比较差异无统计学意义(p>0.05)。 1.5对血β2-微球蛋白的影响 与正常对照组比较,其余各组大鼠血清β2-微球蛋白含量升高,其差异有统计学意义(p0.01);模型对照组血清β2-微球蛋白含量最高,与该组比较,各治疗组及预防组显著降低(p0.01),有统计学意义。 1.6对血肌酐、尿素氮的影响 各组间大鼠血清中肌酐含量比较无显著性差异(p>0.05),没有统计学意义。模型组大鼠血清尿素氮含量显著升高,与模型组比较,其余各组大鼠血清尿素氮含量显著降低(p<0.01),有统计学意义;与正常对照组比较,仅中药低剂量组有统计学差异(p<0.05)。西药组、预防组、中药高剂量组、中药低剂量组组间比较差异无统计学意义(p>0.05)。 1.7各组大鼠肾脏组织病理变化 HE染色:高倍镜下可见,模型组肾小球硬化,系膜细胞及系膜基质增生,肾小管上皮细胞空泡变形;各治疗组及中药预防组大鼠肾脏病理变化程度明显轻于模型对照组,中药预防组大鼠肾脏的肾小球及肾小管比正常组大鼠稍微增大;中药高剂量与西药组大鼠肾脏肾小球体积大小相当,但均大于正常组。 PAS染色:模型组大鼠肾脏组织可见广泛的PAS染色阳性物质,主要位于小叶中央部,肾小球基底膜增厚,系膜基质明显增多,肾小球弥漫性病变,小动脉玻璃样变,肾小球内部偶见圆形、椭圆形或锥形的结节,个别肾小球荒废;而各治疗组及中药预防组大鼠肾脏PAS染色呈弱阳性,西药组可见弥漫肾小球硬化,系膜基质和细胞外基质明显增多,肾小管萎缩;中药预防组可见肾小球系膜基质轻度增多,肾小球基底膜及肾小管无病变;中药高剂量组可见肾小球系膜基质及系膜细胞增多,肾小球基底膜无变化,肾小管无病变;中药低剂量组大鼠可见节断性肾小球硬化,肾小球系膜基质增多,基底膜增厚。 1.8对C反应蛋白含量的影响 各组大鼠血清及肾脏组织中C反应蛋白变化趋势相同,与正常组比较,模型组大鼠血清及肾脏组织中C反应蛋白含量显著升高(p<0.01),有统计学意义;与模型组比较,中药预防及各治疗组大鼠血清及肾脏组织中C反应蛋白含量显著降低(p<0.01),有统计学意义;与西药组比较,中药预防组、中药高、低剂量组大鼠血清中CRP含量显著下降(p<0.01),有统计学意义。 1.9对肾脏组织中核转录因子NF-κB蛋白及基因的表达水平的影响 模型组大鼠肾脏组织中NF-κB mRNA及蛋白表达水平均较正常组显著上调(p<0.01),有统计学意义;与模型组比较,中药预防组和各治疗组大鼠肾脏组织中NF-κBmRNA及蛋白表达水平均显著下调(p<0.01),有统计学意义。与中药预防组比较,正常组、中药高剂量组、中药低剂量组大鼠肾脏组织中NF-κB蛋白及基因的表达水平均显著增高(p<0.01),有统计学意义。西药组与中药低剂量、中药预防组比较,差异显著(p<0.01),有统计学意义。中药高剂量组与西药组无显著性差异(p>0.05)。 1.10对肾脏组织中MCP-1及CCR2蛋白及基因的表达水平的影响 各组大鼠肾脏组织中MCP-1mRNA及蛋白、CCR2mRNA及蛋白的表达水平测定结果,与正常对照组比较,模型组大鼠肾脏组织中MCP-1mRNA及蛋白、CCR2mRNA及蛋白的表达水平均显著上调(p<0.01),有统计学意义;与模型组比较,中药预防组和各治疗组大鼠MCP-1和CCR2基因及蛋白表达水平均显著下调(p<0.01);中药预防组大鼠肾脏组织中MCP-1及CCR2蛋白及基因的表达水平显著低于西药组及中药高、低剂量组(p<0.01或0.05);西药组MCP-1及CCR2蛋白及基因的表达水平较中药高、低剂量组低(p<0.05);中药高剂量与低剂量组大鼠的CCR2蛋白及基因表达水平无显著性差异,但MCP-1mRNA及蛋白表达水平差异显著(p<0.05)。 2.临床观察结果 2.1对疗效性指标的影响 中药治疗组与西药对照组患者24小时尿微量蛋白各时间点的组间比较,无显著性差异;与治疗前(0周比较),中药治疗组和西药对照组尿微量白蛋白显著降低(p<0.01),有统计学意义;中药治疗组和西药对照组患者尿微量白蛋白随着治疗时间的延长而逐渐减少。 治疗前,中药治疗组与西药对照组患者症候积分组间比较,无显著性差异(p>0.05);治疗第6周及第8周,中药治疗组证候积分显著低于西药对照组(p<0.05),两组间比较有统计学意义;与第0周比较,两组患者第4、6、8周的症候积分均显著降低(p<0.05或p<0.01),有统计学意义。 中药治疗组患者显效4例,有效8例,无效8例,总有效率60%;西药对照组患者显效4例,有效9例,无效7例,总有效率65%。 2.2对血糖和糖化血红蛋白的影响 两组患者FBG、2hPG和HbA1c水平无显著性差异(p>0.05);治疗前后比较,中药治疗组和西药对照组患者的FBG、2hPG和HbA1c水平无显著性差异(p>0.05)。 2.3对安全性指标的影响 两组患者治疗前、后血清肌酐、尿素氮、谷丙转氨酶水平无显著性差异(p>0.05);每组的治疗前后比较,中药治疗组和西药对照组患者的血清肌酐、尿素氮、谷丙转氨酶水平无显著性差异(p>0.05)。 结论: 1.三黄糖肾康颗粒可有效降低DN模型大鼠血糖、糖化血红蛋白、尿微量白蛋白、血β2-微球蛋白、尿素氮水平。 2.三黄糖肾康颗粒可有效降低DN模型大鼠血清及肾组织中C反应蛋白含量。 3.三黄糖肾康颗粒可有效降低DN模型大鼠肾脏皮质中NF-κB、MCP-1和CCR2mRNA及蛋白的表达水平。 4.三黄糖肾康颗粒对DN模型大鼠的防治作用可能是通过抑制NF-κB信号通路,从而抑制MCP-1与其受体CCR2结合而实现的。 5.三黄糖肾康颗粒可有效降低早期糖尿病肾病患者24小时尿微量蛋白、症候积分水平。 6.三黄糖肾康颗粒对早期糖尿病肾病患者血清肌酐、尿素氮、谷丙转氨酶、FBG、2hPG和HbA1c水平无显著影响。 7.三黄糖肾康颗粒在治疗第6周就能达到最佳中医疗效,对早期糖尿病肾病患者有较理想的防治作用。
【学位授予单位】:辽宁中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2013
【分类号】:R259;R277.5

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中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 奚悦;三黄糖肾康对早期DN大鼠微炎症状态影响的实验研究及临床疗效观察[D];辽宁中医药大学;2013年
2 王建枫;锌对大鼠肝脏硬脂酰辅酶A去饱和酶-1(SCD-1)的影响及其调控机理研究[D];浙江大学;2008年
3 周春雷;五肽化合物PLNPK对大鼠抗GBM肾炎的治疗作用及其作用机制的研究[D];天津医科大学;2008年
4 云宇;缺血后处理抗大鼠肾缺血—再灌注损伤的作用机制研究[D];昆明医学院;2010年
5 刘明;梓醇对脑缺血损伤大鼠恢复早期神经功能的影响及其机制研究[D];北京中医药大学;2011年
6 沙莹;粒细胞集落刺激因子对脑缺血再灌注大鼠的治疗及其作用机制的研究[D];吉林大学;2010年
7 李国;白介素-6中和抗体及索拉菲尼对野百合碱诱导大鼠肺动脉高压的作用及其机制[D];中国协和医科大学;2009年
8 莫雪安;同种异体骨髓间充质干细胞移植治疗血管性痴呆大鼠模型的实验研究[D];广西医科大学;2011年
9 邹彬;电刺激干预对废用性肌萎缩大鼠线粒体生物合成和呼吸功能的影响[D];北京体育大学;2011年
10 孙凤平;参芪复方对GK大鼠肾脏NF-κB及PPARγ的影响[D];成都中医药大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 孙斯凡;柴黄益肾颗粒对STZ诱导DN大鼠的保护作用机制及大鼠Uqcrfsl基因重组质粒构建的研究[D];南京中医药大学;2012年
2 于明明;硫酸化壳聚糖衍生物对实验性大鼠脂肪肝的防治作用研究[D];中国海洋大学;2010年
3 王冠栋;大强度间歇游泳运动对膳食诱导肥胖大鼠肥胖及炎症因子的影响[D];河南大学;2010年
4 刘舰杭;创伤性休克对大鼠血脂、TNF-α的影响[D];石河子大学;2009年
5 汪涛;胆碱能抗炎通路对大鼠呼吸机所致肺损伤的影响[D];桂林医学院;2010年
6 宋标;大鼠脑基底动脉EDHF反应及外源性EDHF对脑缺血再灌注损伤的保护作用[D];安徽医科大学;2010年
7 许黎忠;螺内酯对百草枯中毒大鼠肺纤维化的干预作用及其作用机制的实验研究[D];福建医科大学;2010年
8 詹增土;慢性全脑低灌注大鼠侧脑室旁白质改变及MMP-2,3和7的表达[D];福建医科大学;2010年
9 向永红;慢性间断性低氧大鼠氧化应激状态与RAS相关性研究及NAC干预作用[D];中南大学;2010年
10 袁浩;红霉素对慢性阻塞性肺疾病大鼠TGFβ_1、SLPI表达水平的影响[D];中南大学;2010年
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