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《辽宁中医药大学》 2015年
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六味地黄丸对H_2O_2诱导PC12细胞氧化损伤保护机制研究

杨小静  
【摘要】:目的:采用血清药理学、分子生物学等实验方法,观察六味地黄丸含药血清对H2O2诱导嗜铬细胞瘤细胞株(PC12细胞)的增殖与凋亡、总抗氧化能力、及SOD1、SOD2 m RNA及蛋白表达的影响,从分子水平探讨六味地黄丸对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤保护作用及机制,为六味地黄丸防治阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的临床应用提供实验依据。材料与方法:常规培养细胞,无血清DMEM同步化24h,终浓度200μmol/LH2O2建立氧化损伤细胞模型。细胞贴壁后,分为对照组、模型组、六味地黄丸组和VE组。同步化处理后,除六味地黄丸组,余三组均换用终浓度10%大鼠血清,六味地黄丸组换用终浓度10%的含药血清,VE组同时加入终浓度20μg/ml的VE,分别预保护,24h后除对照组外其余各组均加入终浓度为200μmol/L的H2O2;倒置相差显微镜观察各组细胞形态;MTT法检测各组细胞增殖率;流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;ABTS法检测各组细胞总抗氧化能力;RT-PCR测定各组细胞SOD1、SOD2 m RNA的表达;Western blot法测定各组细胞SOD1、SOD2蛋白的表达。结果:1.六味地黄丸对H2O2诱导下PC12细胞形态的影响与对照组相比,模型组细胞密度降低,细胞脱落、皱缩,细胞之间连接疏松,间隔增大,数量减少,呈现明显损伤形态;与模型组相比,六味地黄丸组与VE组细胞形态有所,细胞密度增大;六味地黄丸组与VE组镜下未见明显形态差异。2.六味地黄丸对H2O2诱导下PC12细胞增殖率影响MTT结果显示,与对照组相比,模型组细胞增殖率显著降低(P0.05);与模型组相比,六味地黄丸组及VE组细胞增殖率明显升高(P0.05);六味地黄丸组与VE相比无显著性差异(P0.05)。3.六味地黄丸对H2O2诱导下PC12细胞凋亡率的影响流式细胞仪检测结果显示,与对照组相比,模型组细胞凋亡率明显增加(P0.05);与模型组相比,六味地黄丸组及VE组细胞凋亡率明显降低(P0.05);六味地黄丸组与VE相比无显著性差异(P0.05)。4.六味地黄丸对H2O2诱导下PC12细胞总抗氧化能力(ABTS法)的影响细胞总抗氧化能力检测结果表明,与对照组相比,模型组细胞抗氧化能力明显降低(P0.05);与模型组相比,六味地黄丸组及VE组细胞总抗氧化能力明显升高(P0.05);六味地黄丸组与VE相比无显著性差异(P0.05)。5.六味地黄丸对H2O2诱导下PC12细胞SOD1、SOD2 m RNA表达的影响RT-PCR结果显示,与对照组相比,模型组细胞SOD1、SOD2m RNA表达明显减少(P0.05);六味地黄丸组与VE组细胞SOD1、SOD2 m RNA表达显著提高(P0.05);六味地黄丸组与VE组细胞SOD1、SOD2 m RNA表达无显著差异(P0.05)。6.六味地黄丸对H2O2诱导下PC12细胞SOD1、SOD2蛋白表达的影响Western blot结果显示,与对照组相比,模型组细胞SOD1、SOD2蛋白表达明显减少(P0.05);六味地黄丸组与VE组细胞SOD1、SOD2蛋白表达显著提高(P0.05);六味地黄丸组与VE组细胞SOD1、SOD2蛋白表达无显著差异(P0.05)。结论:1.六味地黄丸可促进细胞增殖,减少细胞凋亡。2.六味地黄丸可提高细胞总抗氧化能力,上调SOD1、SOD2的表达,发挥抗氧化作用。
【学位授予单位】:辽宁中医药大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:R285.5

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