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《辽宁中医药大学》 2017年
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Sephadex LH-20×RPLC二维液相色谱体系的构建及其在大黄化学成分分析中的应用

王啸岩  
【摘要】:目的:构建基于葡聚糖凝胶色谱与反相液相色谱联用(Sephadex LH-20×RPLC)的新型二维色谱方法体系,并以大黄为模式研究对象,探讨其在中药成分分析中的应用;将Sephadex LH-20×RPLC联用模式拓展到在线制备层面,探讨其在中药化学成分分离制备中的应用;基于应用Sephadex LH-20×RPLC联用模式在线制备得到的化学成分,分离鉴定新的有效成分,并以之作为含量测定指标,建立新的含量测定方法。材料与方法:1.选取兼具分子筛作用、分配作用和氢键作用的Sephadex LH-20作为第一维,构建Sephadex LH-20×RPLC新型联用模式的在线分析系统,并考察柱长、流速、洗脱溶剂等因素对Sephadex LH-20柱分离效果的影响,确定第一维的分离参数;进而对二维液相色谱的接口技术进行考察,主要对定量环和富集柱这两种常用接口进行分析,选择合适的接口;将构建的Sephadex LH-20×RPLC联用模式与常规的RPLC×RPLC联用模式进行对比,比较两种分离模式分离效果;最后将构建的Sephadex LH-20×RPLC联用模式分别应用到药用大黄和河套大黄化学成分在线分析中,并比较两种大黄化学成分差异。2.对构建的Sephadex LH-20×RPLC联用模式进行分离规模的放大,选择内径20 mm,柱长170 cm的葡聚糖凝胶柱对上样量g级别的药用大黄和河套大黄化学成分进行在线制备,采用高效液相色谱法(HPLC)对化合物进行纯度分析并结合核磁共振、质谱等手段进行化合物结构鉴定与解析。3.利用高效液相色谱法,构建2-桂皮酰葡萄糖酯互变异构体的含量测定方法。并利用构建的方法对三种不同批次的药用大黄进行该互变异构体的含量测定。结果:1.确定了第一维葡聚糖凝胶色谱条件,选用柱长100 cm,流速0.03 m L/min,选择富集柱接口并采用梯度流速稀释;Sephadex LH-20×RPLC和RPLC×RPLC两种联用模式比较,前者分离效果优于后者。Sephadex LH-20×RPLC其正交性为90.6%,而RPLC×RPLC的正交性只有30.8%。2.Sephadex LH-20×RPLC在线制备药用大黄得到9个化合物,分别为桂皮酸(1)、pleuropyrone A(2)、没食子酸(3)、2-桂皮酰葡萄糖酯互变异构体(4)、芦荟大黄素-3-(羟甲基)-O-β-D-吡喃葡萄糖(5)、2,5-二甲基-7-羟基色原酮(6)、芦荟大黄素(7)、大黄酚(8)、大黄素(9);河套大黄得到12个化合物,分别为大黄酚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖(1)、大黄素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(2)、大黄素(3)、1,3-二羟基-6,7-二甲基-山酮-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)、土大黄苷(5)、白黎芦醇(6)、芦荟大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖(7)、白皮杉醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(8)、大黄酚-8-O-β-D-(6’-O没食子酰)-吡喃葡萄糖(9)、土大黄苷-1"-O-没食子酸酯(10)、土大黄苷元(11)、土大黄苷-6"-O-没食子酸酯(12)。3.构建的2-桂皮酰葡萄糖酯互变异构体含量测定方法,用甲醇超声提取20 min,精密度(RSD=0.8%),10小时内稳定性良好(RSD=2.9%),重复性良好(RSD=1.2%),回收率均在95%-105.0%之间,RSD值亦符合相关规定。测得三个批次药用大黄中该互变异构含量分别为0.3816%、0.3745%、0.3862%。结论:1.成功构建了在线Sephadex LH-20×RPLC新型联用模式系统,且其正交性远高于RPLC×RPLC联用模式。2.在线Sephadex LH-20×RPLC二维制备液相色谱对复杂化合物分离效果好,节省时间和精力,且节省溶剂。3.本文首次构建了药用大黄2-桂皮酰葡萄糖酯互变异构体含量测定方法。
【学位授予单位】:辽宁中医药大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:O657.7;R284.1

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