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《辽宁中医学院》 2002年
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补益脾胃法对脾虚老龄大鼠海马神经元PKC活性与bc1-2和bax蛋白表达及超微结构的影响

王淑娟  
【摘要】: 衰老是一种复杂的生物学过程,是机体随着年龄的增长,各脏腑器官功能全面地逐渐降低的过程。人口老龄化是当今世界各国面临的社会问题,也是我国面临的社会问题之一。科学要为健康老龄化服务,防止早衰,延缓衰老,延长人类寿命,提高人们的生命质量,已成为当代世界性的重大研究课题。 抗衰老研究在我国具有悠久的历史,属于中医药学的优势领域。本项研究,根据中医学关于衰老的脏腑衰竭说,从人以水谷为本,脾胃为水谷之海,气血生化之源,后天之本,故脾胃为养生之本立论,在李德新教授领导的课题组既往研究成果的基础上,观察了补益脾胃法(包括健脾益气法、温运脾阳法、滋补脾阴法)对脾虚老龄大鼠海马神经元PKC活性与bcl-2和bax蛋白表达及超微结构的影响。 根据中医学的病因发病学理论,本项研究采用饮食不节、疲劳过度和药物损伤等综合因素,成功地建立了脾气虚、脾阳虚和脾阴虚三种证候老龄大鼠模型,分别应用导师李德新教授拟定的健脾益气、温运脾阳和滋补脾阴方药灌胃治疗两个月,以改良的Takai法检测其海马组织的PKC活性,以免疫印迹法(Western—blotting)检测其海马组织中PKCα、β_1、γ亚型的表达,以免疫组织化学SABC法检测了脾阳虚证大鼠海马组织bcl-2和bax蛋白的表达,并用透射电镜观察了脾阴虚证大鼠海马超微结构。 结果表明: 1.补益脾胃方药具有调控脾虚老龄大鼠海马神经元蛋白激酶C活性的作用。 脾虚老龄大鼠海马神经元PKC活性的变化: 海马神经元细胞膜PKC活性:与青年正常对照组相比,老龄大鼠及青年各模型组大鼠海马神经元细胞膜PKC活性不同程度升高,但老龄各模型组之间无显著性差异,青年各模型组间有显著性差异,以脾阳虚证组升高最为明显。老龄各模型组海马神经元细胞膜PKC活性升高幅度较青年组小。 海马神经元细胞浆PKC活性:与正常对照组相比,各模型组海马神经元细胞浆PKC活性明显降低,脾气虚证与脾阳虚证、脾阴虚证模型组之间有显著性差异,老龄组大鼠海马神经元细胞浆PKC活性明显高于青年组;老龄各模型组海马神经元细胞浆PKC活性下降幅度较青年组大。 补益脾胃方药可以降低各脾虚治疗组大鼠海马神经元细胞膜PKC的活性,其中对脾气虚证大鼠治疗效果最为明显。老龄组与青年组之间有显著性差异,老龄组海马神经元细胞膜PKC活性明显高于青年组:但年龄因素对治疗效果无影响。 补益脾胃方药可以提高各脾虚治疗组大鼠海马神经元细胞浆PKC活性,老龄组与青年组之间有显著性差异,老龄组海马神经元细胞浆PKC活性明显高于青年组,但年龄因素对治疗效果无影响。说明在调控海马神经元PKC活性方面,补益脾胃方药对老龄大鼠的疗效与青年组一致。 2.补益脾胃方药具有调控脾虚老龄大鼠海马神经元蛋白激酶C亚型表达的作用 在所检测的PKCα、β_1、γ三个亚型中,大鼠海马神经元细胞膜与细胞浆均以α亚型表达最明显,但各证候模型大鼠、治疗大鼠与正常大鼠之间无明显差异。 各组PKCβ_1、γ亚型的变化与PKC活性的变化基本一致,老龄及青年各证候脾虚模型大鼠海马神经元细胞膜PKCβ_1、γ亚型表达均增强,老龄及青年补益脾胃方药治疗大鼠β_1、 博 士 学 位 论 文 Y亚型表达减弱。 老龄及青年各证候脾虚模型大鼠海马神经元细胞浆PKC e;、Y亚型表达减弱,而补益脾 胃方药治疗大鼠p;亚型表达增强;Y亚型除脾阴虚治疗老龄大鼠与模型大鼠比较无显著性差 异外,脾气虚、脾阳虚治疗老龄大鼠Y亚型表达增强。但青年各模型大鼠与治疗大鼠之间无 明显差异。 3.温补脾阳方药具有调节脾阳虚大鼠海马神经元bclZ及bax基因蛋白表达的作用 与青年正常组大鼠比较,老龄大鼠海马神经元be12蛋白表达减弱,bax蛋白的表达明 显增强;老龄脾阳虚模型组大鼠表现更为明显,几乎未检测到bC12蛋白的阳性表达。 青年脾阳虚模型大鼠海马神经元仇 12蛋白表达减弱,而 bax蛋白表达明显增强,与青 年正常对照组比较有明显差异。 青年脾阳虚治疗组大鼠海马神经元bclZ蛋白表达增强,bax蛋白表达明显减弱;与正 常对照组比较,无明显性差异。老龄脾阳虚治疗组大鼠海马神经元仇-2蛋白表达有所增强, bax蛋白表达减弱,但无统计学意义。 4.滋补脾阴方药具有改善脾阴虚证大鼠海马超微结构的作用 老龄脾阴虚证大鼠海马神经细胞有典型的细胞凋亡特征,一些细胞核浓缩呈斑点状荧光, 有些在核周边呈环状或颗粒状荧光浓聚,细胞膜呈泡状改变。老龄脾阴虚治疗组大鼠变化不 明显。 青年脾阴虚证大鼠海马神经元胞体内细胞器形态不规则,线粒体出现肿胀变形,峭断裂 和空泡样改变;细胞核出现核膜内稻断裂:个别细胞还可见到内含条纹状结构的溶酶体。青 年脾阴虚治疗组大鼠虽可见到核膜内招及线粒体肿胀现象,但程度较模型组明显减轻。
【学位授予单位】:辽宁中医学院
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:R256.3

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【参考文献】
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