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《辽宁中医药大学》 2008年
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培土生金化瘀中药对肺间质纤维化大鼠干预作用的实验研究

尹玲慧  
【摘要】: 肺间质纤维化是一组以肺间质弥漫性渗出、浸润和纤维化为主要病变的疾病,它是许多肺间质疾病的共同结局,病程一般呈进行性发展。其病理特点为慢性炎症反应导致肺泡上皮持续损伤、成纤维细胞过度增殖和细胞外基质过度沉积。由于其发病机制目前尚未完全明确,因此临床尚缺乏特异的治疗药物[1]。传统治疗以糖皮质激素和免疫抑制剂为主,主要是通过减轻炎症反应来延缓肺纤维化的进程[2],但临床诊断的肺纤维化患者,绝大多数纤维化已经形成,并不断进展[3],加之激素疗效尚不理想,长期使用会产生明显不良反应[2],因此开发疗效好、安全性高的药物已成为当务之急。 中医理论多将肺纤维化归为“咳嗽”“喘证”、“肺痹”等范畴,认为肺纤维化的病位在肺,而与多脏器有关,病机多为正虚邪实。本实验结合古今文献的研究,根据五行相生等的中医基础理论及长期的临床观察,认为该病病位虽然在肺,但与脾密切相关,病机以虚、瘀为关键,提出了肺纤维化“脾虚血瘀”的中医病机假说,由此针对肺纤维化主要病理变化,采用培土生金,活血化瘀的基本治法,拟定培土生金化瘀中药复方加减变化治疗该病,在临床实践中取得了较为满意的效果。为了进一步探讨该复方治疗肺纤维化的作用机理,我们采用该药复方治疗肺间质纤维化大鼠,选择相关分子生物学指标,通过现代先进的实验技术,从不同层面、不同水平动态观察中药复方对实验性肺纤维化的影响,进而探讨其治疗肺纤维化的机理,为肺纤维化的临床治疗提供理论依据。 本实验采用博莱霉素复制大鼠肺纤维化模型,分别在7天、14天、28天三个时间点,研究培土生金化瘀中药复方对肺纤维化大鼠的干预作用,从分子生物学、免疫学、病理学等不同层面来探讨该中药复方的作用机制。实验研究共分为四部分: 1培土生金化瘀中药对博莱霉素所致大鼠肺纤维化的肺组织形态及肺系数的影响 通过对模型动物一般状况的观察(如体重、活动、饮食、及呼吸等)及对肺重、肺系数、病理形态学的研究(HE染色、MASSON染色),通过进行数据统计来比较培土生金化瘀中药的作用效果,以观察培土生金化瘀中药复方对肺间质纤维化大鼠的影响,。 结果显示:除了正常组外,其余各组大鼠均有不同程度的活动减少、体重下降、饮食减少以及肺系数的增加;肺组织HE染色和MASSON染色均可见程度不同的肺泡炎和细胞外基质沉积。经培土生金化瘀中药复方治疗后大鼠一般状态有所好转;肺系数有所减少;病理形态学显示肺泡炎及肺纤维化均有不同程度的改善。 结论:(1)博莱霉素诱导大鼠肺纤维化模型成功。 (2)培土生金化瘀中药复方能在一定程度上改善肺间质纤维化大鼠的肺泡炎及肺纤维化。 2培土生金化瘀中药对博莱霉素所致大鼠肺纤维化羟脯氨酸含量影响的机制研究 通过对肺纤维化模型大鼠羟脯氨酸含量影响的实验研究,探讨在肺间质纤维化形成过程中羟脯氨酸含量的变化情况。羟脯氨酸是机体胶原蛋白的主要成分之一,在弹性蛋白中含量极少,而在其它蛋白则不存在[4]。因此,羟脯氨酸为胶原纤维所特有,以此作为肺纤维化的指标,可以判断肺纤维化的程度。 结果显示:除正常组外其余各组大鼠肺组织胶原沉积明显,数据显示羟脯氨酸含量有不同程度的增加,且纤维化程度随时间的推移而持续加重。经培土生金化瘀中药复方治疗后羟脯氨酸含量有所下降,从而间接地降低肺组织中胶原的含量,起到了减轻肺纤维化的作用。 结论:培土生金化瘀中药复方可减少肺间质纤维化大鼠的羟脯氨酸含量,从而使纤维化大鼠的纤维化程度有所改善。 3培土生金化瘀中药对肺间质纤维化大鼠肺组织中TGF-β1及MCP-1蛋白表达影响的机制研究 通过免疫组织化学染色的方法,结合图像半定量分析技术,研究TGF-β1及MCP-1不同时期的蛋白表达,从免疫组化方面进一步探讨了培土生金化瘀中药对肺纤维化的作用机制。 结果显示:在肺纤维化发展的各个时间点,TGF-β1及MCP-1蛋白在肺组织中的表达均较正常组明显升高。经培土生金化瘀中药复方治疗后,TGF-β1及MCP-1蛋白表达有不同程度的降低,提示培土生金化瘀中药复方可能通过抑制TGF-β1及MCP-1在肺组织中的异常高表达,从而使肺纤维化程度有所减轻。 结论:培土生金化瘀中药复方可调节TGF-β1及MCP-1蛋白的表达,从免疫组化方面使肺纤维化的程度有所减轻。 4培土生金化瘀中药对肺间质纤维化肺组织TGF-β1mRNA基因表达影响的机制研究 本实验采用RT-PCR的方法,结合图像分析技术,比较各组肺组织在不同时间点上TGF-β1mRNA的基因表达,从分子生物学方面进一步探讨了培土生金化瘀中药的作用机制。 结果显示:在肺纤维化发展的各个时间点,TGF-β1mRNA在肺组织中均有表达,且强度与正常组比较有显著性差异。经培土生金化瘀中药复方治疗后,TGF-β1mRNA在肺组织中的表达有不同程度的下调,提示培土生金化瘀中药复方可抑制纤维化大鼠的TGF-β1mRNA基因表达,从而改善纤维化,达到预防与治疗的目的。 结论:培土生金化瘀中药复方可下调TGF-β1mRNA在肺组织中的基因表达,从而表明该中药复方可在分子生物学水平减轻肺纤维化的程度。 综上所述,本课题采用博莱霉素复制肺纤维化动物模型,应用培土生金化瘀中药复方对肺纤维化大鼠进行干预治疗,从不同层面、不同水平研究培土生金化瘀中药复方对肺纤维化大鼠的作用机制。结果表明,该中药复方能有效的改善肺纤维化的病理状态、降低羟脯氨酸含量、抑制了TGF-β1mRNA、TGF-β1及MCP-1蛋白在肺内的高表达,从而减轻了肺纤维化大鼠的肺泡炎及肺纤维化程度,阻断了纤维化的病理进程,为今后肺纤维化的临床治疗提供了更为坚实的理论依据。
【学位授予单位】:辽宁中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:R285.5

【引证文献】
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【同被引文献】
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