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《辽宁中医药大学》 2010年
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中药不同组方对胃癌前病变模型大鼠胃粘膜组织细胞凋亡的影响

李岩  
【摘要】: 慢性萎缩性胃炎是由多种因素所致的消化系统常见病,尤其是胃窦萎缩性胃炎与胃癌关系密切[1,2],所以又称为胃癌前状态性疾病。胃癌前病变系一病理学概念,是指胃粘膜上皮不典型增生(异型增生、上皮内瘤变)。不典型增生分为轻度(低级别)、重度(高级别)二级,异型增生(上皮内瘤变)是重要的胃癌癌前病变。2006年中国慢性胃炎共识意见中指出“小肠型和完全性肠化亚型无明显癌前病变的意义,临床实践显示单从肠化亚型的病理形态学难以作出胃癌危险性的预测,而且十多年来,从大肠型肠化发展成胃癌的报道较为少见。所以,胃癌前病变的真正病理学特征性变化是异型增生(或称上皮内瘤)。”所以,针对慢性萎缩性胃炎伴不典型增生的研究,对于胃癌的二级预防具有更加重要的意义。 目的:中药治疗慢性萎缩性胃炎伴不典型增生有着较为理想的疗效,而且大量研究表明慢性萎缩性胃炎伴不典型增生以脾虚、血瘀为主要中医临床证型。我们采用热盐水合并化学药物刺激的方法复制了慢性萎缩性胃炎伴不典型增生的大鼠模型,应用益气化瘀、健脾益气、活血化瘀中药及西药维霉素预防和治疗给药,探讨不同组方中药对慢性萎缩性胃炎伴不典型增生大鼠胃粘膜形态、组织学改变的影响,以其探讨不同组方中药的作用机制,及它们之间的相互关系。 材料与方法: 1.采用化学药物刺激的方法复制了复制了慢性萎缩性胃炎癌前病变动物模型及分组治疗。普通级,健康Wister大鼠120只,雌雄各半,体重160±5 g,将大鼠随机分为11组,分别为正常组、造模组、健脾益气方药预防组、活血化瘀方药预防组、健脾化瘀方药预防组、西药预防组、造模空白组、健脾益气方药治疗组、活血化瘀方药治疗组、健脾化瘀方药治疗组、西药治疗组。除正常组10只外,其余各组均11只。150g/L、55℃热盐水,10ml·Kg~(-1)·d~(-1) ,灌胃;2%水杨酸溶液10ml·Kg~(-1)·d~(-1) ,灌胃;均为1次/d;20mmol/L脱氧胆酸钠溶液,自由饮用;配以饥饱失常处理,即2d饱食,1d禁食。按上述方法造模12周。健脾益气方药预防组、活血化瘀方药预防组、健脾化瘀方药预防组均同时灌服中药制剂6g/kg、4g/kg、8g/kg,西药预防组同时灌服灌服西药维酶素1g/kg,连续给药12周,12周后模型组、健脾益气方药预防组、活血化瘀方药预防组、健脾化瘀方药预防组、西药预防组处死大鼠取材处理。造模空白组、健脾益气方药治疗组、活血化瘀方药治疗组、健脾化瘀方药治疗组、西药治疗组开始分别给予双蒸水(3ml/只)、中药制剂、西药维霉素,剂量同上,满24周后,处死全部大鼠,取材处理。 2.观察了大鼠模型胃粘膜病理形态变化。 3.用免疫组化的方法检测胃粘膜组织bcl-2的表达的变化,用流式细胞仪检测胃组织中活性氧(ROS)、Ca~(2+)含量的变化,用酶标仪检测胃组织中Caspase-3表达的变化。 结果: 1.造模对照组异型增生发病率100%,要高于健脾益气预防组、活血化淤预防组、健脾化淤预防组、西药预防组不典型增生发生率(71.4%、66.6%、12.5%、62.5%),且中药及西药预防组不典型增生病例多发生在轻度不典型增生,健脾益气预防组、活血化淤预防组、健脾化淤预防组、西药组轻度不典型增生发生率分别为分别为80%、50%、100%、60%,而病理对照组全部为中、重度不典型增生。健脾益气预防组、活血化瘀预防组、健脾化瘀预防组与西药预防组之间比较无显著性差异(P0.05)。健脾化瘀中药组中有87.5%都未发病,要好于其他几组,但是统计学处理时与其他几组无显著差异,考虑系例数较少造成的。在治疗给药过程中,造模空白组大鼠胃粘膜不典型增生经12周的正常饲养,病理损伤无改善,经中药及维酶素连续12周的灌胃治疗,胃粘膜不典型增生发生率明显低于造模对照组(P0.05),且治疗组病变程度均较轻,各组多为轻度不典型增生(62.5%、55.6%、100%、50%),而造模对照组中、重度不典型增生发病率为100%,中药治疗各组及维酶素组间无显著性差异(P0.05)。健脾化淤治疗组中有75%都已经正常,要高于其他各组,但在统计学处理时与其他几组比较无显著性差异,考虑系样本数量较小造成的。 2. BCL-2基因在正常胃粘膜、轻、中、重度不典型增生中,其表达率随病变加重逐级增高。在正常胃粘膜中,Bcl-2阳性率为12.5%,在造模组及造模空白组中,中、重度不典型增生的发生率均为100%,Bcl-2的阳性率分别为90%、87.5%,经各组方中药和西药预防、治疗给药后,随着不典型增生程度的下降,Bcl-2表达的阳性率亦在下降,在预防给药组,健脾、化瘀、健脾化瘀、西药组的不典型增生率分别为71.4%、66.6%、12.5%、62.5%,且多集中在轻度不典型增生(80%、50%、100%、60%),与之相伴的Bcl-2表达阳性率也下降(57.1%、55.5%、12.5%、50%)。在治疗给药组,健脾、化瘀、健脾化瘀、西药组的不典型增生发生率分别为(88.8%、90%、25%、75%),轻度不典型增生的发生率为62.5%、55.6%、100%、50%,与之相应的Bcl-2表达阳性率分别为55.5%、60%、25%、50%。而且无论是预防给药还是治疗给药,中药各组及维酶素组,BCL-2基因的表达均较造模组及造模空白组减少。而且无论是预防给药还是治疗给药,健脾化瘀组领的疗效要好于益气健脾和活血化瘀。 3.造模组及造模空白组大鼠胃粘膜细胞中的Caspase– 3明显减少,与正常组比较有显著差异(P﹤0.05),在预防组中,健脾化瘀组、健脾益气组、活血化瘀组及西药组均可以使Caspase– 3的表达增加,与造模组比较有显著差异(P﹤0.05),健脾化瘀组要好于其他组,而健脾益气组、活血化瘀组、西药组之间没有显著差异(P﹥0.05)。在治疗组中,健脾化瘀组、健脾益气组、活血化瘀组及西药组也均可以使Caspase– 3的表达增加,与造模空白组比较有显著差异(P﹤0.05),健脾化瘀组要好于其他组,而健脾益气组、活血化瘀组、西药组之间没有显著差异(P﹥0.05)。 4.模型组大鼠ROS及Ca~(2+)含量明显下降,与空白对照组之间有显著差异(P﹤0.05),而无论是预防给药,还是治疗给药,中药组和西药组均可以提高ROS及Ca~(2+)含量,与造模组大鼠之间有显著性差异(P﹤0.05),无论是预防给药还是治疗给药,健脾化瘀组、西药组之间的疗效无差别(P﹥0.05),两组与正常组之间亦无显著性差异(P﹥0.05),而两组与健脾组、化瘀组比较有显著性差异(P﹤0.05),前者的疗效要好于后者,健脾组与化瘀组比较无显著性差异(P﹥0.05)。通过结果,我们不难发现,随着不典型增生程度的下降,ROS及Ca~(2+)含量均出现相应的减少。在正常胃粘膜中ROS及Ca~(2+)的含量最多,在造模组及造模空白组中,中、重度不典型增生的发生率为100%,而相应的ROS及Ca~(2+)的含量也降至最低。在预防给药和治疗给药过程中,健脾化瘀组的作用要好于健脾益气组和活血化瘀组(P﹤0.05),而健脾益气组和活血化瘀组无论是预防给药还是治疗给药之间没有显著性差异(P﹥0.05)。 结论: 无论是预防给药还是治疗给药,健脾化瘀、健脾益气、活血化瘀中药均具有较显著的预防和治疗胃粘膜上皮不典型增生作用。其疗效机理主要是通过调低胃组织中的Bcl-2的基因表达、增加胃组织中活性氧(ROS)、Ca~(2+)的含量,增加胃组织中Caspase-3的表达,在整个细胞凋亡的各个环节产生作用,从而使细胞凋亡增加,减轻细胞增殖状态,达到治疗萎缩性胃炎癌前病变,防止癌变的作用。在这个过程中,在检测的三个环节中,健脾化瘀、健脾、化瘀中药均可以发挥作用,说明在中药治疗萎缩性胃炎癌前病变的过程中具有相同的作用节点。健脾化瘀中药的治疗萎缩性胃炎癌前病变的作用要明显好于其它两种治则的中药,而健脾、化瘀中药之间的治疗作用没有显著差异。
【学位授予单位】:辽宁中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R273

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