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《沈阳药科大学》 2003年
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合成鱼腥草素的免疫调节及佐剂作用研究

王大勇  
【摘要】: 本研究的目的是为了深入探讨合成鱼腥草素的免疫调节作用。在广泛查阅有关合成鱼腥草素免疫调节作用资料的基础上,本研究首先考察合成鱼腥草素对巨噬细胞功能及活化状态的影响。在获得了一些研究发现的基础上,进一步考察了合成鱼腥草素在巨噬细胞内的细胞信号传导途径,并且增加了与合成鱼腥草素的免疫佐剂作用有关的研究内容。 为了达到最初的实验目的,第一章研究合成鱼腥草素对巨噬细胞功能和活化状态的影响。在这一章中,首先,采用溶菌法考察合成鱼腥草素对巨噬细胞分泌溶菌酶水平的影响;其次,采用游离酚法研究合成鱼腥草素对巨噬细胞产生的耐酒石酸酸性磷酸酶水平的影响;第三,采用显微镜观察法考察合成鱼腥草素对巨噬细胞吞噬功能的影响;第四,采用溶血法测定合成鱼腥草素对巨噬细胞产生的补体C4水平的影响;第五,采用酵母花环法检测合成鱼腥草素对巨噬细胞表面C3b受体水平的影响;第六,采用流式细胞术法观察合成鱼腥草素对巨噬细胞呼吸爆发的影响;第七,采用ELISA法探讨合成鱼腥草素对巨噬细胞产生IL-1α及IL-1β水平的影响。 在第一章已经取得的研究结果的基础上,第二章进一步考察了合成鱼腥草素在巨噬细胞内的信号传导途径。首先,采用荧光分光光度法研究合成鱼腥草素对巨噬细胞内游离钙离子浓度的影响;其次,采用Western-blotting法分析合成鱼腥草素对巨噬细胞内CaMKⅡ、CREB和ERK 1/2磷酸化程度以及Fos蛋白表达水平的影响。 在第一章实验中发现合成鱼腥草素能够促进巨噬细胞产生IL-1β。对于T淋巴细胞激活和增殖具有重要作用的细胞因子,一种是巨噬细胞产生的T细胞协同激活因子IL-1,另一种是T淋巴细胞产生的IL-2。为了进一步探讨并验证合成鱼腥草素的免疫调节作用,在第三章实验中,首先,采用MTT法测定合成鱼腥草素对脾细胞增殖的影响;其次,采用胸腺细胞增殖法检测合成鱼腥草素对脾细胞产生的IL-2水平的影响;第三,采用ELISA法测定合成鱼腥草素对纯化外周血T淋巴细胞产生IL-2水平的影响。 第四章是合成鱼腥草素免疫佐剂作用研究。在这一章中,首先,采用溶血法测定合成鱼腥草素连续给药后对绵羊红细胞抗体IgG和IgM产生的影响;其次,采用ELISA法分析和评价合成鱼腥草素的典型免疫佐剂作用。 在第一章有关巨噬细胞功能和活化状态的研究中发现,合成鱼腥草素能够提高巨 噬细胞产生的溶菌酶、酸性磷酸酶、补体 C4以及 IL刁 p水平,增强巨噬细胞的吞噬功 能,促进巨噬细胞呼吸爆发,但对巨噬细胞表面C3b受体以及巨噬细胞产生的IL-la 水平没有明显影响。溶菌酶、酸性磷酸酶、IL一 水平上升以及呼吸爆发现象都是巨 噬细胞活化标志。巨噬细胞的呼吸爆发可以由吞噬过程引起,但吞噬过程并不一定伴 有呼吸爆发,例如由C3b受体介导的吞噬过程即不伴有呼吸爆发。根据已有报道,巨 噬细胞的呼吸爆发需要细胞内钙离于信号参与。在第二章的合成鱼腥草素在巨噬细胞 内信号传导途径研究中发现,合成鱼腥草素能够提高巨噬细胞内游离钙离子浓度,促 进蛋白激酶 CaMK 11以及细胞核活化转录因子 CREB磷酸化,从而使它们进人活化状 态。合成鱼腥草素还能够提高巨噬细胞内即早基因C-fOS表达产物F。S蛋白水平。根据 合成鱼腥草素在巨噬细胞内信号传导途径的研究结果,可以认为合成鱼腥草素首先提 高巨噬细胞内游离钙离子浓度,钙离子浓度升高以后会引起 CaMK 11的自身磷酸化, 磷酸化 CaMK 11进一步使转录因子 CREB磷酸化,磷酸化 CREB进入细胞核诱导 C-fos 基因以及其它基因的表达,c-fos基因表达产物F。S是激活因子蛋白(AP-1)的可变组 分,可以进一步调节其它基因表达。 在第三章的研究中发现,合成鱼腥草素能够促进脾细胞增殖,提高体外培养脾细 胞分泌的IL-2水平,以及提高纯化外用血T淋巴细胞产生的IL-2水平。 第四章发现,合成鱼腥草素能够促进绵羊红细胞抗体IgG和 IgM的产生。另外还 发现,合成鱼腥草素具有典型的兔疫性剂作用。 以上研究结果提示,合成鱼腥草素具有免疫调节作用和免疫佐剂作用。合成鱼腥 草素促进巨噬细胞活化,增强巨噬细胞功能,提高巨噬细胞产生的 IL上 及 T淋巴细 胞产生的fi一二水平等免疫调节作用可能是其免疫佐剂作用的药理学作用机理的一部 分。
【学位授予单位】:沈阳药科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R285

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