收藏本站
《沈阳药科大学》 2004年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

冬凌草甲素诱导肿瘤细胞死亡的机制研究

张春玲  
【摘要】: 本文对冬凌草甲素体外抗肿瘤活性进行了较为系统的研究,主要阐述了冬凌草甲素在三种肿瘤细胞:人黑色素瘤A375-82细胞,人宫颈癌HeLa细胞,小鼠纤维瘤L929细胞中诱导细胞死亡的不同机制。 在测定了三种来源血液的肿瘤细胞(人红白血病细胞系,K562;人组织淋巴瘤细胞,U937;人早幼粒白血病细胞,HL-60)和人黑色素瘤细胞,A375-S2;人宫颈癌细胞,HeLa;人乳腺癌细胞,MCF-7;小鼠纤维肉瘤细胞,L929细胞毒时发现三种血液系统的瘤株均对冬凌草甲素敏感,半数抑制浓度分别为:IC50(K562):16.2±1.2μmol/L,IC50(U937):27.1±2.3/μmol/L,IC50(HL-60):20.4±3.6μmol/L,另外三种人源细胞中以A375-S2细胞最敏感,IC50:15.1±1.2μmol/L,对其中鼠源细胞L929较敏感,IC50:35.6±4.2/μmol/L。冬凌草甲素在对敏感细胞株有效浓度下作用于人外周血单核细胞(PBMC)12 h,没有细胞毒作用,但随着浓度的增加,对PBMCs具有较弱的细胞毒作用。 在A375-S2细胞实验中,Hoechst 33258荧光染色后证明34.3 μmol/L冬凌草甲素作用细胞12 h时出现明显的凋亡小体,DNA电泳则表明大剂量的冬凌草甲素(137.4μmol/L)作用细胞12 h时出现坏死特有的弥散泳带。采用流式细胞术及LDH活力测定进一步证明冬凌草甲素诱导A375-S2细胞死亡是平衡于凋亡与坏死之间。合适剂量的冬凌草甲素诱导细胞凋亡。且冬凌草甲素作用细胞12 h时,caspase-3的活力是对照组6.5倍,caspase-9的活力也显著升高。caspase家族抑制剂与caspase-3抑制剂明显抑制冬凌草甲素诱导的细胞死亡率,同时免疫印迹法结果提示caspase-3的底物之一——无活性的PARP蛋白逐渐被消化。以上结果提示caspase-3,-9被激活。在线粒体途径中,用免疫印迹法发现冬凌草甲素改变了促凋亡蛋白Bax与凋亡抑制性蛋白Bcl-xL的表达比率,但对凋亡抑制性蛋白Bcl-2蛋白表达没有影响,同时促进cytochrome c释放到胞浆中。实验结果进一步显示:在冬凌草甲素作用细胞12 h时使肿瘤抑制因子p53蛋白及细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)发生磷酸化,却抑制p38激酶的激活,对c-Jun N-末端蛋白激酶——JNK的表达没有影响。继续采用了p53蛋白的上游P13K家族抑制剂——wortmannin与MEK/ERK抑制剂PD98059,考察其对冬凌草甲素 诱导A375一52细胞死亡的影响,结果发现:这两种抑制剂均能有效抑制细胞死 亡,免疫印迹法发现:PD98059可抑制Bax/Bcl一xL的表达比率的增加及 cytochrome。释放,wortnlanin既可抑制p53蛋白磷酸化又可抑制Bax的表达, 但对cytochrome。释放没有显著影响。以上结果说明:冬凌草甲素通过改变 Bax旧cl一xL的表达比率,进而引起cytochrome。释放,继续启动了下游的 casPase一9,一3引起细胞凋亡,这一过程依赖于p53及ERK激活。 在L929细胞实验中,冬凌草甲素没有启动经典的凋亡途径,LDH活力测定 表明,诱导细胞坏死的能力强于凋亡,尽管caspaspe家族抑制剂及casPasPe一3抑 制剂均增强了L929细胞对冬凌草甲素的敏感性,说明casPases在此信号途径中 起保护细胞的作用,通常认为PARp蛋白为casPase一3的底物之一,但在冬凌草 甲素的作用12 h pARp一前体被消化激活,且casPaspe家族抑制剂及casPaspe一3抑 制剂均不能阻止其降解,反而加强。此实验结果提示:在冬凌草甲素作用于L929 细胞后激活了其他的不同于casPas。家族的蛋白作用于PARp。此外,冬凌草甲 素通过增加Bax忍cl一2的表达比率,上调ERK蛋白磷酸化,抑制p38蛋白磷酸 化而促使细胞死亡。 在HeLa细胞实验中,形态学变化及DNA电泳都证明冬凌草甲素诱导HeLa 细胞凋亡,且启动了经典的信号途径,实验表明casPase一3抑制剂能阻止冬凌草 甲素诱导的细胞死亡率,抑制caPase一3的活力升高,且减弱DNA片断化的形成。 进一步的实验结果提示:冬凌草甲素通过改变Bax忍。1一xL与Bax/B。1一2的表达比 率激活casPase一3,使其底物ICAD被降解,释放出激活casPase一3的核酶(cAD) 引起细胞凋亡。另外,在冬凌草甲素的作用下,MAPK家族成员ERK与泪呵K被 激活,不影响p38激酶的活化。通常,I‘Ba与核内因子哪一‘B结合,抑制其进 入核内。实验中发现:IKBa的表达减少,磷酸化IKBa的表达增加,提示NF一KB 被激活。有趣的是冬凌草甲素促使COX一2的表达,这一实验结果暗示:在HeLa 细胞中COX一2的表达与癌症的发生无关。 本文在证明冬凌草甲素选择性杀伤癌细胞,对人外周血单核细胞具有很弱的 细胞毒作用,并首次探讨冬凌草甲素在A375一s2细胞,L929细胞和HeLa细胞 中诱导细胞死亡的机制。
【学位授予单位】:沈阳药科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R73-36

【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 张晓;重楼皂苷Ⅰ对肝癌细胞Bel-7402生长抑制作用的实验研究[D];福建中医药大学;2010年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前9条
1 吴振;张冲;薛识;张亚莉;方美娟;丘鹰昆;;3-芳基-α,β-不饱和酮介导的细胞凋亡机理研究(英文)[J];黑龙江大学自然科学学报;2011年05期
2 王方宇;李丹;韩志超;高慧媛;吴立军;;蔷薇红景天的化学成分及对紫外线诱导的A375-S2细胞死亡的抑制作用[J];沈阳药科大学学报;2007年05期
3 张亚莉;程宏明;许鹏翔;吴振;;脱氢姜酮对人肺癌细胞A549细胞毒活性的研究[J];厦门大学学报(自然科学版);2010年04期
4 乔爱敏;池岛乔;张为革;吴英良;;激活AKT和ERK可拮抗N-去甲基克拉霉素对HeLa细胞的凋亡诱导作用[J];中国药理学通报;2007年03期
5 周蓓;吴立军;田代真一;小野寺敏;内海文彰;池岛乔;;水飞蓟宾对异丙肾上腺素引起的大鼠乳鼠心肌细胞损伤的保护作用及其机制[J];药学学报;2007年03期
6 李林昊;吴立军;田代真一;小野寺敏;内海文彰;池岛乔;;水飞蓟素在紫外线照射诱导A375-S2细胞凋亡中发挥抑制作用[J];中国病理生理杂志;2005年10期
7 Shin-ichi TASHIRO,Satoshi ONODERA,Takashi IKEJIMA;Oridonin induces apoptosis of HeLa cells via altering expression of Bcl-2/Bax and activating caspase-3/ICAD pathway[J];Acta Pharmacologica Sinica;2004年05期
8 Shin-ichi TASHIRO;Satoshi ONODERA;Fumiaki UCHIUMI;Takashi IKEJIMA;;Activation of extracellular signal-regulated kinase during silibinin-protected,isoproterenol-induced apoptosis in rat cardiac myocytes is tyrosine kinase pathway-mediated and protein kinase C-dependent[J];Acta Pharmacologica Sinica;2007年06期
9 Shin-ichi TASHIRO;Satoshi ONODERA;Mutsuhiko MINAMI;Takashi IKEJIMA;;P53-mediated cell cycle arrest and apoptosis through a caspase-3-independent,but caspase-9-dependent pathway in oridonin-treated MCF-7 human breast cancer cells[J];Acta Pharmacologica Sinica;2007年07期
中国博士学位论文全文数据库 前7条
1 郑璐;合欢皮化学成分及其构效关系和抗肿瘤活性机制研究[D];沈阳药科大学;2004年
2 吴振;紫草素诱导肿瘤细胞凋亡作用机制的研究[D];沈阳药科大学;2004年
3 安巍巍;去甲斑蝥素诱导肿瘤细胞凋亡的机制研究[D];沈阳药科大学;2004年
4 李书慧;祖师麻化学成分及其原植物黄瑞香细胞培养的研究[D];沈阳药科大学;2005年
5 李林昊;水飞蓟宾抗紫外线照射诱导的细胞凋亡作用机制研究[D];沈阳药科大学;2006年
6 马恩龙;β-Eudesmol抗血管形成及抗肿瘤作用的研究[D];沈阳药科大学;2005年
7 王晓波;复方黄黛片药动学和诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究[D];沈阳药科大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 蔡敏;注射用艾迪(冻干)抗肿瘤药效和安全性研究[D];沈阳药科大学;2006年
2 王方宇;蔷薇红景天化学成分研究[D];沈阳药科大学;2007年
3 焦润芝;Surfactin的结构鉴定及其诱导乳腺癌细胞MCF-7凋亡的研究[D];天津科技大学;2009年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 杜娟;中药抗肿瘤免疫的研究进展[J];中医药临床杂志;2004年05期
2 杨岚,杨平地,梁蓉,袁跃传,田琼;川芎嗪联合环胞霉素A逆转白血病多药耐药的研究[J];癌症;2000年04期
3 唐小卿,曹建国,廖端芳;甲基莲心碱对人乳腺癌细胞阿霉素多药耐药性的逆转[J];癌症;2001年08期
4 杜彩文,李德锐,林英城,吴名耀;三氧化二砷诱导人鼻咽低分化鳞癌裸鼠移植瘤细胞分化的研究[J];癌症;2003年01期
5 陈伟忠,林勇,谢渭芬,张俊平,张新,程志红;苦参碱对肝癌细胞端粒酶活性调控及细胞周期的影响[J];第二军医大学学报;2002年05期
6 杨传标,徐克成;中药的抗肿瘤作用[J];国际医药卫生导报;2004年18期
7 廖美德,梁世中;中药抗肿瘤机理的研究进展[J];贵阳中医学院学报;2001年04期
8 姚金凤,吴春丽,陈慧霞,张瑞锋;黄芪多糖对HL-60细胞端粒酶活性的作用[J];河南肿瘤学杂志;2005年04期
9 吴雪卿;补益中药抗癌作用研究进展[J];湖南中医药导报;1999年09期
10 邹益友,谭桂山,谢兆霞;猕猴桃根抑制肿瘤细胞的实验研究[J];湖南中医药导报;1999年04期
中国硕士学位论文全文数据库 前6条
1 王敏;Bcl-2、Bax和Caspase-3在骨肉瘤中的表达及其意义[D];山西医科大学;2005年
2 张燕;大蒜素抗肝癌作用及其机制的实验研究[D];重庆医科大学;2006年
3 吴宁波;重楼皂甙Ⅰ抗人白血病细胞机制的研究[D];浙江大学;2007年
4 管璐晗;中药重楼的化学成分及其活性研究[D];重庆大学;2007年
5 蔡晶;开口箭皂苷的抗肿瘤作用与其抗肿瘤机制的研究[D];第一军医大学;2007年
6 曹志恒;大蒜素诱导体外培养的小鼠淋巴瘤EL4细胞凋亡的研究[D];兰州大学;2008年
【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 刘斐;商倩;张士俊;;中药活性成分抗肝癌的研究进展[J];现代药物与临床;2012年06期
2 夏亚飞;阎姝;;重楼抗肿瘤作用机制研究进展[J];中国实验方剂学杂志;2012年09期
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 王洁银;楼黄胶囊的药学研究[D];天津大学;2012年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 吴孔明,张覃沐,王庆端,华海婴,齐建英,张予;冬凌草甲素对肿瘤细胞钠泵活性的影响[J];肿瘤防治研究;1994年04期
2 闫剑婷,杨胜利,宫亚欧,丁兰平,宋爱云;冬凌草甲素对哺乳动物细胞DNA损伤作用的影响[J];河南肿瘤学杂志;2005年02期
3 刘加军,潘祥林,伍新尧,王江峰,陆惠玲,林东军,黄仁魏;冬凌草甲素对Raji细胞的增殖抑制作用及其机制[J];中草药;2004年07期
4 刘加军,黄仁魏,潘祥林,彭军;冬凌草甲素对HL-60细胞的诱导凋亡作用及其作用机制(英)[J];中成药;2004年12期
5 曹生海,王德喜,管顺朝,仪明光,林晨,张覃沐;氚标记冬凌草甲素的制备[J];核技术;1983年06期
6 申家英,杨波;冬凌草甲素对HL-60细胞的生长抑制作用及其对细胞端粒酶活性的调节[J];白血病.淋巴瘤;2003年04期
7 李瑞芳,王庆端;冬凌草甲素对K562细胞端粒酶活性调控及细胞周期的影响[J];药学学报;2004年11期
8 刘加军,潘祥林,伍新尧,蔡贵庆;冬凌草甲素诱导白血病K562细胞凋亡的机制[J];肿瘤研究与临床;2003年04期
9 李瑞芳,王庆端;冬凌草甲素对K562细胞端粒酶活性调控和细胞周期的影响[J];河南肿瘤学杂志;2004年05期
10 杨胜利,韩绍印,张巧,宋爱云,丁兰萍,宫亚欧,张覃沐;冬凌草甲素抗突变性研究[J];癌变畸变突变;2001年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 刘孟奇;杨世勇;;冬凌草腺毛的形态学及组织化学研究[A];第十届全国药用植物及植物药学术研讨会论文摘要集[C];2011年
2 董诚明;徐鹏;史应强;冯莉;;微量元素锌对冬凌草产量及冬凌草有效成分的影响[A];第九届全国药用植物及植物药学术研讨会论文集[C];2010年
3 董诚明;李汉伟;;营养元素对冬凌草产量及有效成分的影响[A];第八届全国药用植物及植物药学术研讨会论文集[C];2009年
4 孙汉董;韩全斌;;冬凌草的植物资源、化学和抗癌活性成分的研究[A];中国植物学会七十周年年会论文摘要汇编(1933—2003)[C];2003年
5 李汉伟;董诚明;;不同产地冬凌草种子蛋白电泳研究[A];第八届全国药用植物及植物药学术研讨会论文集[C];2009年
6 赵高贤;徐培元;常连胜;车现平;张卫星;;冬凌草液腔内热灌注治疗腺性膀胱炎76例临床研究[A];中国中西医结合泌尿外科专业委员会第四次学术会议、浙江省中西医结合泌尿外科男科专业委员会第三次学术会议暨泌尿外科男科疾病中西医研究新进展学习班资料汇编[C];2003年
7 林娜;刘春芳;贾红伟;肖诚;吴皓;;雷公藤甲素对小鼠胶原性关节炎的抑制作用[A];第四次全国雷公藤学术会议论文汇编[C];2004年
8 董诚明;陈随清;;冬凌草生产技术操作规程(SOP)初探[A];第八届全国中药和天然药物学术研讨会与第五届全国药用植物和植物药学学术研讨会论文集[C];2005年
9 崔璨;陈随清;;不同产地冬凌草中迷迭香酸的含量比较[A];第十届全国中药和天然药物学术研讨会论文集[C];2009年
10 白悦心;;冬凌草局部热化疗预防膀胱癌术后复发[A];中国中西医结合学会泌尿外科专业委员会第三届全国学术会议论文汇编[C];2001年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 张海;神奇的冬凌草[N];中国特产报;2004年
2 潘祥林;刘加军;伍新尧等;冬凌草甲素有体外抗白血病作用[N];中国医药报;2004年
3 经济视点报记者 古筝;做强冬凌草产业 济源的现实命题[N];经济视点报;2009年
4 本报记者 王平 实习生 时晓韵;冬凌草:河南贡献给人类的“绿色抗生素”[N];河南日报;2009年
5 郭根立 牛付彦;河南济世药业大力挖掘冬凌草产业“富矿”[N];中国中医药报;2009年
6 记者 肖寒 张哲峰;济源做强冬凌草产业[N];中国特产报;2010年
7 卢明先;冬凌草[N];中国特产报;2003年
8 本报记者 王少华 实习记者 张金磊;愚公精神的时代传承[N];中国企业报;2009年
9 王丹 孙书博;张海:“押宝”冬凌草[N];医药经济报;2004年
10 成利军 王娟;济源建成我国最大冬凌草种植基地[N];农民日报;2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张春玲;冬凌草甲素诱导肿瘤细胞死亡的机制研究[D];沈阳药科大学;2004年
2 闫学斌;贝壳杉烷型二萜类化合物的结构、衍生物设计合成及生物活性的研究[D];郑州大学;2002年
3 燕树勋;雷公藤甲素对IFN-γ刺激后人眼球后成纤维细胞的影响[D];湖北中医学院;2004年
4 李永生;汉防己甲素对膀胱肿瘤细胞BIU-87及BIU-87/ADM作用的实验研究[D];中南大学;2003年
5 宁黎丽;雷公藤甲素和雷公藤内酯酮的生物转化研究[D];沈阳药科大学;2003年
6 翁伟宇;草乌甲素经皮渗透特性及其透皮给药系统的研究[D];复旦大学;2003年
7 张海艳;淫羊藿和冬凌草应用基础研究[D];郑州大学;2006年
8 李可强;北豆根等五味中药材的质量与评价研究[D];辽宁中医药大学;2008年
9 罗都强;雷公藤有效成分和杀虫活性及应用研究[D];西北农林科技大学;2002年
10 陈立慧;力达霉素对不同p53基因型人结肠癌细胞的作用机制[D];中国协和医科大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘明月;冬凌草甲素对人结肠癌HCT-8细胞株的抑制生长及诱导凋亡的作用[D];郑州大学;2004年
2 金珠;冬凌草的超临界CO_2萃取工艺研究[D];沈阳药科大学;2002年
3 雷萌;冬凌草活性成分的提取及其相关研究[D];郑州大学;2004年
4 李瑞芳;冬凌草甲素对K562细胞端粒酶活性调控和细胞周期的影响[D];郑州大学;2004年
5 姚会枝;冬凌草提取物肝脏保护作用[D];河南大学;2010年
6 王媛媛;冬凌草醇提物对荷H_(22)瘤小鼠抑瘤的实验研究[D];山东中医药大学;2004年
7 李登宝;冬凌草液热疗对膀胱癌患者免疫功能的影响[D];郑州大学;2002年
8 杨新蕾;汉防已甲素对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响[D];第四军医大学;2002年
9 高重阳;汉防已甲素对大鼠肺纤维化的逆转作用及其对Ca~(2+)、CaM活性的影响[D];山西医科大学;2003年
10 邢海杰;雷公藤甲素对变应性鼻炎豚鼠模型基因转录的影响及机制研究[D];郑州大学;2003年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026