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《沈阳药科大学》 2003年
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六味地黄丸的质量控制方法研究

赵新峰  
【摘要】: 六味地黄丸是滋阴补肾的经典名方,在中成药中具有极其重要的地位。中国药典一直缺乏其君药“熟地黄”的质量控制方法,2000版药典只具有六味地黄丸中的臣药“山茱萸”和佐药“牡丹皮”的质量控制方法,分别采用双波长薄层扫描法测定山茱萸中熊果酸的含量和水蒸气蒸馏-紫外分光光度法测定牡丹皮中丹皮酚的含量。采用两种方法检测了臣药和佐药中的两个成分,方法略显繁琐。本研究的目的:一是探寻六味地黄丸中君药“熟地黄”的指标成分及质量控制方法,填补药典空白。二是改进药典中山茱萸和牡丹皮的质量控制方法。我们采用液相色谱-质谱联用和毛细管电泳-质谱联用技术定性分析了六味地黄丸及其单味药材中的丹皮酚、熊果酸等37种主要化学成分。毛细管电泳法定量分析了6种化学成分,液相色谱法定量分析了5种化学成分。 论文第二章首先对六味地黄丸及其单味药材中常见化学成分进行毛细管电泳分析。首次建立了六味地黄丸中丹皮酚、熊果酸、没食子酸、芍药苷、莫罗苷、番木鳖苷的毛细管电泳定量分析方法,其中4种成分可以同时定量。为了探寻君药“熟地黄”的质量指标,首次采用毛细管电泳法研究了生地在不同炮制时间梓醇的含量变化,发现梓醇含量在炮制过程中明显下降(熟地中含量约相当于生地含量的1/10)。结合梓醇“利尿、缓泻、降血糖”的药理作用,我们认为目前以梓醇作为熟地质量指标是不妥的,因此必须选新指标成分。实验发现生地和熟地的毛细管电泳图中迁移时间为9.8 min处均有一含量相对稳定的未知大峰(UV 210 nm),且其在20~80 mmol·L~(-1)硼砂缓冲盐条件下,与相邻组分分离良好。 论文的第三章采用薄层色谱法制备了地黄中的未知大峰,经MS、IR及NMR结构鉴定为二氢蜜力特苷,并首次建立了熟地及六味地黄丸中二氢蜜力特苷的毛细管电泳定量分析方法。为了探寻二氢蜜力特苷是否在药理活性方面与熟地黄、六味地黄丸具有相关性,我们首次对二氢蜜力特苷单体进行了药理活性研究。以脂质过氧化产物(LPO)多少和超氧化物歧化酶(SOD)活力为指标,在不同层次上(组织级、亚细胞级)对二 沈阳药科大学博士学位论文 摘要 氢蜜力特昔、熟地黄、六味地黄丸进行平行的药理实验。实验结果初步表明,二氢蜜力 特营具有一定的清除自由基和提高SOD活力的作用,与六味地黄丸的滋阴补肾作用相 吻合,因此可以作为六味地黄丸中君药“熟地黄”的指标成分。 中药对照品常不易获得,而用紫外检测分析中药成分定性较难,以质谱作为液相色 谱或毛细管电泳的检测器能给出色谱峰丰富的碎片信息。论文的第四章首次采用液相色 谱一电喷雾电离一质谱一质谱法分析了六味地‘黄丸及其单味药材熟地黄、山茱英、牡丹皮、 泽泻。在六味地黄丸质谱正离子检出模式下,识别了其中的6种常见化学成分,其中5 种化学成分尿囊素、没食子酸、番木鳖昔、芍药普及丹皮酚可在紫外检测下同时定量; 在六味地黄丸质谱负离子检出模式下,识别了其中的8种常见化学成分,并对2级质谱 中出现的主要碎片进行了结构解析。在负离子检出模式下共识别了7种熟地中的化学成 分。采用负离子检出模式分析了牡丹皮样品,识别了常见的6种化学成分,另有3种化 学成分未见有报导,我们利用2级质谱中的主要碎片对其结构进行了推测。采用正离子 质谱检出模式分析了泽泻药材,识别了其中的6种常见化学成分,并对其质谱碎片进行 了结构解析。同时采用正负离子检出模式分析了山茱英,对主要化学成分的质谱碎片进 行了结构分析。 毛细管电泳与质谱联用理论上是一种最佳组合,但实践中尚有不少难于解决的问 题。论文的第五章首次采用毛细管电泳一电喷雾电离一质谱一质谱分析了六味地黄丸及其单 味药材熟地黄、山茱英、牡丹皮、泽泻。对缓冲盐种类、浓度、pH值,有机改性剂的种 类、比例,鞘液的组成等进行了优化。获得的质谱数据与第四章液相色谱一质谱联用中 数据基本吻合。因质谱对非挥发性缓冲盐的限制,毛细管电泳分离体系尚需进一步优化, 质谱的萃取离子流功能部分弥补了分离上的不足。
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