收藏本站
《沈阳药科大学》 2007年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

重组人肝再生增强因子的表达和活性研究

陈俊杰  
【摘要】: 人肝再生增强因子(human augmenter of liver regeneration,hALR)是从人胎肝组织中克隆到的一种新型的促肝细胞增殖因子,除促进肝细胞增殖外,还能保护肝脏,预防肝纤维化。本实验采用毕赤酵母表达系统,以分泌方式高效表达重组hALR(rhALR),通过色谱法分离纯化获得高纯度rhALR,并对rhALR的生物学活性进行了研究。 设计引物从pBV220-hALR上扩增hALR基因片断,构建重组酵母表达质粒pPICZαA-hALR;经验证正确后,表达质粒pPICZαA-hALR线形化浓缩,转化P.pastoris GS115形成重组转化子;重组酵母菌经PCR鉴定、高浓度Zeocin抗性筛选得多拷贝子,经0.5%甲醇诱导培养后,在培养上清中发现rhALR;Western-blot分析表明,在酵母培养上清中rhALR以二聚体形式存在,分子量为30kD;扫描分析结果表明,酵母培养上清中rhALR占总蛋白的66%,总量约为100mg/L。 酵母培养上清经70%饱和硫酸铵沉淀、Sephadex G25柱脱盐和低盐透析两种方法处理,用Sepharose DEAE Fast Flow柱和Sephadex G75柱两步纯化,可得纯度约为90%的rhALR,回收率约为26%。体外细胞活性实验表明,rhALR能明显促进HepG2、SMMC-7721和NIH-3T3细胞增殖;在大鼠1/3肝切模型中,rhALR明显促进肝细胞再生,使有丝分裂指数(MI)、细胞增殖核抗原(PCNA)增多;在大鼠D-氨基半乳糖急性肝损伤模型中,100μg/L rhALR能提高D-氨基半乳糖所致肝损伤大鼠的存活率。 通过上述实验,成功构建了人肝再生增强因子重组毕赤酵母表达菌,并获得高纯度有活性的rhALR。
【学位授予单位】:沈阳药科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R977

手机知网App
【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 陈罡;人肝再生增强因子生物活性的研究[D];沈阳药科大学;2009年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 杨晓明,谢玲,邱兆华,胡志远,吴祖泽,贺福初;新型人肝再生增强因子的分子克隆及其性能研究[J];中国科学C辑:生命科学;1997年05期
2 杨晓明,王爱民,周平,王清明,吴祖泽,贺福初;人肝再生增强因子促肝增殖及其抗肝损伤作用[J];科学通报;1998年06期
3 杨晓明,胡志远,谢玲,吴祖泽,贺福初;重组人肝再生增强因子在体外能刺激HTC肝癌细胞DNA合成[J];生理学报;1997年05期
4 杨晓明,谢玲,吴祖泽,贺福初;肝部分切除后肝再生增强因子信使核糖核酸(mRNA)表达增强[J];生理学报;1997年05期
5 刘刚,王清明,陈吉中,范国才,陈惠鹏;HPO结构与受体结合功能关系的初步研究[J];生物技术通讯;2003年06期
6 邵凤娟;成军;马英骥;洪源;郭江;王巧侠;杨倩;纪冬;王琳;;人肝再生增强因子下调钙结合蛋白S100A11基因表达的研究[J];胃肠病学和肝病学杂志;2006年01期
7 ;Growth induction of hepatic stimulator substance in hepatocytes through its regulation on EGF receptors[J];Cell Research;1999年01期
8 夏小兵;成军;王刚;杨继珍;刘妍;董菁;王琳;李克;;人肝再生增强因子在毕赤酵母中的表达[J];世界华人消化杂志;2001年07期
9 邵凤娟;成军;马英骥;郭江;刘妍;王巧侠;;人肝再生增强因子上调细胞周期素B2基因的表达[J];中国地方病学杂志;2006年06期
10 邵凤娟;成军;马英骥;杨倩;纪冬;王琳;;人肝再生增强因子抑制层黏连蛋白B1链基因转录活性的研究[J];中华肝脏病杂志;2006年01期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 谢永芳,舒坤贤,梁亦龙,袁帅,张继承;小鼠胚胎发育中期肠细胞增殖与凋亡的研究[J];癌变.畸变.突变;2005年01期
2 王子良,许丽艳,李恩民;质粒制备和反应温度对嵌套缺失技术的影响[J];癌变.畸变.突变;2005年02期
3 康振桥;季艳霞;杨志勇;苏光;崔彦芝;;血管内皮生长因子亚型在人乳腺癌细胞中的表达差异[J];癌变.畸变.突变;2006年03期
4 安刚;黄天华;谢庆东;王德刚;;pCXN2-mIZUMO对C57BL/6小鼠生育能力的影响[J];癌变.畸变.突变;2007年04期
5 朱斌;杨罗艳;赵晓昆;;膀胱癌多药耐药基因MDR-1与金属硫蛋白-3表达的关系[J];癌变.畸变.突变;2007年05期
6 毕玉平,廖俊杰,单雷,王兴军,徐平丽;番茄双抗TMV和CMV基因工程的研究[J];山东农业科学;1997年06期
7 单雷,毕玉平,王兴军,徐平丽,李广存;双抗TMV和CMV转基因番茄后代的遗传分析[J];山东农业科学;1998年04期
8 葛宏华,孙莉宁,张其瑞;家蚕血淋巴蛋白的发育变化和BmLSP的纯化[J];安徽大学学报(自然科学版);2001年03期
9 王北艳;曹宁;汤晖;;苜蓿中华根瘤菌电转条件的优化[J];安徽农学通报;2008年11期
10 刘可杰,吕淑霞,沈世华;FaDREB1基因RNAi的植物表达载体的构建[J];安徽农业科学;2005年07期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王春花;成军;郎振为;吴煜;杨艳杰;张黎颖;刘妍;;基因表达谱芯片技术筛选XTP3蛋白反式调节基因[A];第一届全国人工肝及血液净化学术年会暨全国人工肝及血液净化攻关协作组成立大会论文集[C];2004年
2 唐南洪;王晓茜;李秀金;陈燕凌;;构建特异高表达人谷氨酰胺合成酶基因(hGS)的肝细胞[A];第三届全国重型肝病及人工肝血液净化学术年会论文集(上册)[C];2007年
3 樊继德;孔庆国;张梅;于喜艳;;子房注射法获得转基因甜瓜植株[A];中国园艺学会第七届青年学术讨论会论文集[C];2006年
4 商庆龙;谷鸿喜;;HPV16 L1蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化及免疫原性研究[A];庆祝黑龙江省免疫学会成立十周年(1993—2003)论文集[C];2003年
5 陈振文;赵太云;孙贺娟;路静;王迎;孟霞;曹争和;王钜;;微卫星DNA与生化标记分析对长爪沙鼠群体遗传分析的比较[A];中国实验动物学会第七届学术年会论文集[C];2006年
6 王革;王妍;何凌冰;乔刚;朱一松;王君艳;;酵母分泌表达重组人神经生长因子[A];山东省药学会2006年生化与生物技术药物学术研讨会论文集[C];2006年
7 任华;顾建华;孙竹筠;沈万赟;吴鹰;周忠良;;RT-PCR法检测斑马鱼(Danio rerio)卵黄蛋白原mRNA表达[A];2005年上海市动物学会学术会议论文集[C];2005年
8 马珺;陈云霜;王爱善;李仲逵;;珍稀鸟类东方鹳的性别鉴定[A];2005年上海市动物学会学术会议论文集[C];2005年
9 马勋;陆承平;;猪戊型肝炎病毒新疆分离株全基因序列的分析[A];中国科协2005年学术年会“新疆现代农业论坛”论文专集[C];2005年
10 吴晓娟;冷梅;赵大鹏;崔颖杰;张岩;汪春义;戚凤春;郭新;付学奇;;带有IL-2基因佐剂的乙肝病毒DNA疫苗构建及其免疫效果的观察[A];2006年全国生化与生物技术药物学术年会论文集[C];2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 常翠芳;大鼠再生肝中星形细胞的基因表达谱分析[D];新疆大学;2011年
2 魏朝明;中国螽(虫斯)总科昆虫的RAPD分析研究[D];陕西师范大学;2000年
3 贾永清;表达禽流感病毒HA基因重组禽痘病毒的构建及其免疫效力的研究[D];东北农业大学;2000年
4 姜永厚;新城疫病毒F基因与鸡IL-2重组DNA疫苗的研究[D];东北农业大学;2000年
5 崔俊;c-fms癌基因异常激活机制及携带AFP增强子反义c-fms与肝癌的研究[D];第一军医大学;2000年
6 陈烨;幽门螺杆菌粘附素HpaA的克隆、表达及其免疫原性和保护性研究[D];第一军医大学;2000年
7 刘明;H5和H7亚型禽流感分子防制技术的研究[D];中国农业科学院;2000年
8 姚乌兰;多粘类芽孢杆菌WY110抗菌蛋白的制备及其基因克隆和表达[D];中国农业科学院;2000年
9 叶纨芝;白菜细胞核雄性不育相关基因mf-CYP450的分子鉴定、克隆和序列分析[D];浙江大学;2001年
10 吴健;肝移植病人乙型肝炎病毒再感染的临床和基础研究[D];浙江大学;2001年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 何燕;S100蛋白在宫颈鳞癌中的表达及其临床意义[D];山西医科大学;2011年
2 郭珊珊;重组人肝再生增强因子对5/6肾切除大鼠肾组织MMP-9、TIMP-1和Ⅳ型胶原表达的影响[D];河北医科大学;2011年
3 徐永红;肝再生增强因子,细胞色素P450与HepG2在体外耐药的关系[D];重庆医科大学;2011年
4 张臣丽;重组人肝再生增强因子单克隆抗体的制备及临床检测的初步探索[D];重庆医科大学;2011年
5 李春成;S100A11和NPM在结肠癌组织中的表达分析[D];南华大学;2011年
6 张进良;硫化氢对大鼠肝星状细胞胶原Ⅰ和胶原Ⅲ表达的影响[D];青海大学;2011年
7 刘波;稻蝗及其近缘属部分种RAPD多态性及中华稻蝗种群遗传多态性研究[D];陕西师范大学;2000年
8 郭巍;苏云金芽孢杆菌cry2Aa基因克隆及表达的研究[D];东北农业大学;2000年
9 刘怀然;鸡传统性法氏囊病抗独特型抗体疫苗的研究[D];东北农业大学;2000年
10 赫英俊;DNA分子标记技术在海带种质鉴定中的应用[D];中国科学院海洋研究所;2000年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 孔祥平;易学瑞;;肝再生增强因子研究进展[J];传染病信息;2008年02期
2 李青,张丽梅,刘殿武,贺宇彤,肖永红,何海艳;肝再生增强因子重组质粒对肝纤维化大鼠的实验治疗作用[J];第三军医大学学报;2005年08期
3 李青;刘殿武;肖永红;刘辉;何海艳;;不同剂量不同载体不同途径的肝再生增强因子重组质粒抗大鼠肝纤维化疗效比较[J];第三军医大学学报;2006年18期
4 ;Cloning and expression of the gene of augmenter of liver regeneration in yeast cells[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2002年01期
5 张丽梅,刘殿武,杨洁;大鼠肝再生增强因子真核表达质粒对急性肝损伤的治疗作用[J];疾病控制杂志;2004年05期
6 杨晓明,谢玲,邱兆华,胡志远,吴祖泽,贺福初;新型人肝再生增强因子的分子克隆及其性能研究[J];中国科学C辑:生命科学;1997年05期
7 杨晓明,王爱民,周平,王清明,吴祖泽,贺福初;人肝再生增强因子促肝增殖及其抗肝损伤作用[J];科学通报;1998年06期
8 杨晓明,胡志远,谢玲,吴祖泽,贺福初;重组人肝再生增强因子在体外能刺激HTC肝癌细胞DNA合成[J];生理学报;1997年05期
9 杨晓明,谢玲,吴祖泽,贺福初;肝部分切除后肝再生增强因子信使核糖核酸(mRNA)表达增强[J];生理学报;1997年05期
10 刘刚,王清明,陈吉中,范国才,陈惠鹏;HPO结构与受体结合功能关系的初步研究[J];生物技术通讯;2003年06期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 岳培彬;肝细胞生成素(HPO205)与肝癌细胞恶性表型关系的研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 付玉龙;HPO205以巯基氧化酶依赖的方式促进SMMC7721肝癌细胞存活[D];中国人民解放军军事医学科学院;2006年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 郭书权,张唯力,张智;不同年龄人睾丸组织及精液中ALR表达研究[J];重庆医学;2004年11期
2 王阁,房殿春,刘为纹,冷恩仁,胡辂,王军,杨晓明,张咏,贺福初;人肝细胞生成素受体的确定及特性[J];第三军医大学学报;2001年09期
3 杨晓明,贺福初,邢桂春,李梦东,吴祖泽;人胎肝cDNA文库构建及肝细胞生长因子cDNA克隆筛选和活性研究[J];第三军医大学学报;1994年01期
4 杨晓明,谢玲,邱兆华,吴祖泽,贺福初;Human augmenter of liver regeneration: molecular cloning, biological activity and roles in liver regeneration[J];Science in China(Series C:Life Sciences);1997年06期
5 杨晓明,谢玲,邱兆华,胡志远,吴祖泽,贺福初;新型人肝再生增强因子的分子克隆及其性能研究[J];中国科学C辑:生命科学;1997年05期
6 王爱民,韩涛,杨晓明,江龙安,王清明,陈惠鹏,贺福初,王宝恩;重组人肝再生增强因子对肝星状细胞基质分解素-1及其抑制因子基因表达的调节[J];解放军医学杂志;2000年04期
7 王爱民,和朝平,韩涛,杨晓明,贺福初,王宝恩;重组人肝再生增强因子可抑制肝星状细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原的基因表达[J];解放军医学杂志;2001年12期
8 洪源,成军,杨倩,刘妍,王建军;乙型肝炎病毒X蛋白上调S100钙结合蛋白A11基因启动子表达活性研究[J];解放军医学杂志;2004年05期
9 王爱民,李培建,杨晓明,郭瑞峰,王清明,贺福初;重组人肝再生增强因子可预防免疫损伤性肝纤维化的形成[J];解放军医学杂志;1999年04期
10 王清明,陈吉中,谭英才,范国才,江海龙,陈惠鹏,贺福初;重组人肝细胞生成素的理化性质研究[J];军事医学科学院院刊;2000年01期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 孙明,赵红玲,王丽春,王炯,和绍清,李琦涵;血管生成抑制素K1~3环结构体酵母表达及活性检测[J];中国生化药物杂志;2001年02期
2 张旭,黄秉仁,蔡良琬;红细胞生成素基因克隆及其在酵母细胞中的表达[J];中国医学科学院学报;1997年05期
3 王剑霓;酵母表达的普马拉汉坦病毒核壳蛋白在欧癭模型中诱导保护作用[J];国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册;2003年06期
4 李再新;左勇;罗惠波;;兔防御素NP2酵母表达液抗菌活性的研究[J];中国药理学通报;2005年12期
5 王艾平;粟永萍;申明强;王崧;程天民;王军平;;人α-防御素5在毕赤酵母中分泌表达的研究[J];第三军医大学学报;2008年04期
6 顾晨;α因子对酵母产生多肽具有重要作用[J];国际生物制品学杂志;1986年03期
7 田昱,李平,朱运松;人纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)在Pichia pastoris中的表达[J];中国生物化学与分子生物学报;1998年03期
8 刘一平,杨晓,徐晓玲,邓继先,程萱,黄翠芬;SMAD4在嗜甲醇酵母中的表达及鉴定[J];生物化学与生物物理学报;2000年03期
9 宋钢,官孝群,莫炜,宋后燕;人微小纤溶酶原活性中心丝氨酸突变体基因在毕赤酵母中的表达[J];药物生物技术;2000年04期
10 余慧峰,刘杞;大鼠肝再生增强因子在酵母菌中的表达及生物活性研究[J];中华肝脏病杂志;2003年07期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 陈定虎;王锡锋;李莉;周广和;;酵母表达美洲商陆抗病毒蛋白的活性检测[A];中国植物病理学会第七届代表大会暨学术研讨会论文摘要集[C];2002年
2 李如冰;;Pichia酵母表达重组人可溶性TRAIL的纯化与生物活性[A];2004年全国生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
3 刘健;陈瑞爱;朱杰仪;唐明森;罗满林;;猪干扰素-α基因经密码子改造在毕赤酵母菌中的高效分泌表达[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集(下册)[C];2009年
4 程相朝;刘一尘;张春杰;李银聚;吴庭才;程安春;;HN-ChMIL18融合基因毕赤酵母表达条件的优化与生物活性的检测[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十四次学术研讨会论文集[C];2008年
5 李小杰;唐玉林;郑易之;;基于酵母表达体系的大豆SALI3-2蛋白耐盐功能鉴定及结构域研究[A];2007中国植物生理学会全国学术会议论文摘要汇编[C];2007年
6 张淑琼;曾思遥;高娟;陈瑞爱;罗满林;;犬IFN-α优化基因的真核表达及抗病毒活性的研究[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
7 王战勇;王志玉;;酵母表达的HSV-I重组gD在ELISA诊断中的初步应用[A];山东预防医学会首届学术年会资料汇编[C];2003年
8 张忠芳;高士争;李士泽;张玉静;;猪瘦蛋白基因在毕赤酵母中的表达[A];科技、工程与经济社会协调发展——中国科协第五届青年学术年会论文集[C];2004年
9 张意;陈国友;王建莉;于益芝;蒋应明;卢琳;曹雪涛;;酵母表达的MIP-2γ/GM-CSF融合蛋白的双重生物学功能及相关机制研究[A];第九届全国肿瘤生物治疗学术会议论文集[C];2006年
10 单彩凤;王建莉;;CXCL14/GM-CSF酵母表达融合蛋白的制备和纯化[A];浙江省免疫学会第六次学术研讨会论文汇编[C];2007年
中国重要报纸全文数据库 前5条
1 智卫真;华药:用“魅力”抢滩乙肝免疫市场[N];医药经济报;2005年
2 东北证券金融与产业研究所 聂昕;天坛生物:财务风险加大[N];中国经营报;2002年
3 李瑶;HPV疫苗前景可期[N];医药经济报;2008年
4 华泰证券投资策略部 任飞;天坛生物:年报业绩乏善可陈[N];医药经济报;2002年
5 建明;医药上市公司谁领风骚[N];中国经营报;2000年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王衡馨;酵母Yca1是一个钙离子依赖的偏赖氨酸—半胱氨酸蛋白酶[D];清华大学;2012年
2 任雪艳;重组酵母GS115/PSD,GS115/CEC的构建及其对水果采后病害抑制效果的研究[D];浙江大学;2012年
3 徐凯;通过体外DNA改组技术获得新的植物强耐盐Na~+/H~+逆向转运蛋白基因[D];华东师范大学;2010年
4 胡巍;丙型肝炎病毒NS3蛋白酶及抑制肽研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年
5 张润祥;重组牛IFN-λ3的制备及其与IFN-α/IFN-β/IFN-γ抗病毒活性比较研究[D];东北农业大学;2013年
6 孙熙麟;毕赤酵母表达重组蛋白生产工艺关键技术及其机制研究[D];吉林大学;2014年
7 张艳宇;人层粘连蛋白α4链LG1-3组件的研究[D];中国人民解放军军需大学;2003年
8 林萍;中间锦鸡儿油酸脱氢酶(FAD2)基因克隆及酵母表达调控的研究[D];中国林业科学研究院;2008年
9 赵海艳;蛋白激酶C对PRRSV感染的影响以及GP5重组乳酸克鲁维酵母免疫效果的初步研究[D];中国农业大学;2014年
10 黄圣兵;大鼠肝线粒体胆碱脱氢酶与电子传递黄素蛋白—泛醌氧化还原酶的研究[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 庄世文;食源酵母分离株风味物质及其三种酯代谢酶基因的分析[D];天津大学;2010年
2 章英;柑橘采后生防菌柠檬形克勒克酵母(34-9)遗传转化体系的建立[D];华中农业大学;2012年
3 张鲁滨;重组猪α干扰素的酵母表达及其对病毒的抑制作用[D];甘肃农业大学;2012年
4 刘伟;转坛紫菜hsp70酵母的生理生化研究[D];宁波大学;2012年
5 杨静;转萝卜过氧化物酶基因RsPrx1酵母表达条件优化及其抗性机理研究[D];河南师范大学;2011年
6 王德;补骨脂抗菌蛋白PscAFP的酵母表达及转基因烟草抗病性分析[D];西南大学;2010年
7 杨涵江;MSTN基因克隆、表达及其主动免疫研究[D];西北农林科技大学;2011年
8 冯伊琳;单环刺螠纤溶酶Ⅱ基因的克隆及其在酵母中的表达[D];中国海洋大学;2011年
9 单喆;星星草PutCAX2在酵母中表达的功能解析[D];东北林业大学;2012年
10 匡野;通过优化Kex2 P1’位点在毕赤酵母中高效表达重组蛋白SCF[D];吉林大学;2014年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026