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《辽宁师范大学》 2001年
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商陆核糖体失活蛋白cDNA的植物表达载体构建及转化烟草的研究

李洪艳  
【摘要】: 以商陆核糖体失活蛋白(PAP)的cDNA序列为依据,设计并合成特异性引物,应用多聚酶 链式反应(PCR)技术扩增出5’端含有BamHI,3’端含有KpnI限制性内切酸酶切位点的目的片段, 且在序列的开始和结尾分别加入起始密码子ATG和终止密码子TAA。将该目的片段定向克隆于载 体pROKII中与CaMV35S启动子和Nos末端构成植物表达载体pRPAP,通过菌落直接PCR法和酶 切分析鉴定出阳性重组子,用直接导入法将其导入农杆菌EHA105,以此作为工程菌进行烟草转化, 转化率达37%。对筛选到的阳性植株随机取样进行PCR及Southern印迹分析,结果表明,PAP基 因已经整合到烟草基因组中,证明载体构建成功。抗立枯病实验表明,转基因植株与对照植株相 比抗性提高。
【学位授予单位】:辽宁师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:Q943.2;S572.035.3

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