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《吉林大学》 2011年
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吉林省布鲁氏菌流行株种属鉴定及其耐药分子机制的研究

孙丽媛  
【摘要】:布鲁氏菌病(Brucellosis)简称布病,是由布鲁氏菌属(Brucella)的细菌(简称布鲁氏菌)引起的一种人畜共患病,为《中华人民共和国传染病防治法》规定报告的乙类传染病之一,在世界各地都有广泛流行,严重威胁人类健康,尤其在发展中国家,是受到普遍关注的世界性公共卫生问题。全世界现有布鲁氏菌病患者约500~600万人,年新发病人数约有50万,全世界每年因布鲁氏菌病造成的经济损失可达30亿美元。由于该病临床症状缺乏特异性,容易慢性化,造成多器官多系统的损伤,严重时可致残,丧失劳动能力,因此早期诊断是控制布鲁氏菌病疫情的重要手段。目前诊断布鲁氏菌病主要依靠传统的病原学和血清学方法,但检测灵敏度低,特异性不高,培养时间长,无法做出快速、准确诊断而延误最佳治疗时机;此外传统的检测方法有潜在实验室暴露感染的危险,而且对检验人员技术要求较高,在一些实验室不作为常规检验项目;依靠分子生物学的布鲁氏菌病诊断方法由于其安全性好、灵敏度高、特异性强一直是实验室的研究热点,但因成本和技术的原因一直未真正应用于临床。因此建立敏感性强、特异性高、技术简单、成本低的诊断技术替代和补充现有的临床诊断方法势在必行。 本研究从疑似布鲁氏菌病患者的血液标本中分离布鲁氏菌,分析吉林省布鲁氏菌主要流行菌株;建立快速检测和鉴别布鲁氏菌的荧光定量PCR方法,该方法通过扩增布鲁氏菌属和羊、牛、猪布鲁氏菌的特异性基因片段,能快速、简便、灵敏的检测布鲁氏菌属并能快速鉴别羊、牛、猪布鲁氏菌。与培养方法和常规PCR方法相比,该方法灵敏度高,特异性强,有望成为一种新的布鲁氏菌快速检测手段;本研究还分析临床分离布鲁氏菌药敏试验结果并设计耐药诱导实验,诱导产生耐喹诺酮类药物的耐药菌株,探讨布鲁氏菌耐喹诺酮类药物的耐药机制。 1.吉林省布鲁氏菌流行株的分离培养与鉴定 由于布鲁氏菌病临床表现多样化,缺乏特异性,常需要实验室检查来确诊,分离培养是目前诊断布鲁氏菌病的“金标准”。本试验采集106份疑似布鲁氏菌病患者血液标本,采用双相血液培养瓶进行增菌培养,用L-B琼脂培养基、布氏培养基和肝浸液培养基进行纯培养,分离鉴定布鲁氏菌14株,培养阳性率为13.21%。布鲁氏菌初次分离培养时间比较长,需要5d~17d。经生化反应试验、染料抑制试验、单因子血清凝集试验、CO_2需求试验、H_2S生成试验鉴定,7株为羊布鲁氏菌3型,3株为羊布鲁氏菌1型,2株为牛布鲁氏菌3型,2株为猪布鲁氏菌1型。临床分离菌株以羊布鲁氏菌3型居多,这与吉林省历史上曾分离的流行株型别相吻合。 2.布鲁氏菌属荧光定量PCR快速鉴定的研究 本研究建立了SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法检测布鲁氏菌属细菌,并对其进行评价。定量方法采用绝对定量,即根据测定的Ct值,用标准曲线对靶基因的起始拷贝数进行定量。以IS711基因设计引物,采用矩阵式对引物和模板的浓度进行优化,最终确定最佳引物量为0.4μl,DNA模板量为2.0μl。制备的标准曲线斜率(k)为-3.615,相关系数(r)为-0.99,扩增效率(E)为90%。该方法对布鲁氏菌属细菌均可阳性扩增,而对其他菌株及所设置的阴性对照扩增结果阴性,目的片段熔解曲线仅有单一尖峰,反应中没有引物二聚体形成和非特异性扩增产物产生。Ct值变异系数均小于5%,表明该检测体系稳定,具有良好的重复性。 本研究利用活菌计数评价荧光定量PCR方法的敏感性。检测靶基因拷贝数为3.826×10~1copies/μl,相当于5CFU/ml~10CFU/ml时Ct值为33.21。在模拟血液标本中检测靶基因拷贝数为3.523×10~1copies /μl时Ct值为35.87。106份临床血液标本有36份呈阳性扩增,阳性率为33.96%,明显高于培养方法。 应用引物IS711所建立的荧光定量PCR方法,能快速地鉴定布鲁氏菌属细菌,整个反应仅需25min。该方法具有高度的特异性和敏感性,重复性好,对模拟标本和临床标本均得到预期的结果,今后应完善血液标本提取细菌DNA的方法,使其能更有效的应用于临床。 3.布鲁氏菌种荧光定量PCR快速鉴定的研究 羊布鲁氏菌、牛布鲁氏菌、猪布鲁氏菌是我国布鲁氏菌病公共卫生最常见的流行菌株。用ARTEMIS软件分析三种吉林省常见布鲁氏菌的差异基因并设计引物,建立3个独立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,能安全、快速、敏感地鉴定常见的羊布鲁氏菌、牛布鲁氏菌和猪布鲁氏菌。采用绝对定量方法,制备的羊、牛、猪布鲁氏菌荧光定量的标准曲线斜率分别为-3.241、-3.447及-4.608。羊、牛荧光定量PCR扩增效率达到102%和94%,猪荧光定量PCR的扩增效率偏低为66%。羊、牛、猪布鲁氏菌荧光定量PCR标准曲线R~2=1,表明模板靶基因起始拷贝数的对数与Ct值呈现很好的线性关系。 该方法特异性强,对相应的布鲁氏菌种扩增结果为阳性,而对其他菌株及所设置的阴性对照扩增结果为阴性,目的片段熔解曲线均仅有单一峰,反应中没有引物二聚体形成和非特异性扩增产物产生。Ct值变异系数均在5%以下,表明检测体系稳定,具有良好的重复性。 该方法敏感性强,建立的羊布鲁氏菌、牛布鲁氏菌荧光定量PCR检测灵敏度均为10CFU/ml~30CFU/ml,最低检测靶基因的拷贝数为10~1copies/μl;猪布鲁氏菌荧光定量PCR检测灵敏度为10~2CFU/ml,最低检测靶基因的拷贝数为10~2copies/μl。在模拟血液标本中羊布鲁氏菌、牛布鲁氏菌荧光定量PCR检测的灵敏度为10~1copies/μl,猪布鲁氏菌鉴定的灵敏度是10~2copies/μl。布鲁氏菌属荧光定量PCR扩增阳性的36份临床血液标本,应用布鲁氏菌种荧光定量PCR方法鉴定,结果28份鉴定为羊布鲁氏菌,6份鉴定为牛布鲁氏菌,2份鉴定为猪布鲁氏菌。说明在布鲁氏菌感染中以羊布鲁氏菌感染居多,与分离培养的结果相符。 综上所述,所建立的布鲁氏菌种荧光定量PCR方法能快速鉴定羊布鲁氏菌、牛布鲁氏菌和猪布鲁氏菌,特异性很高。羊种和牛种的鉴定体系完善,扩增效率高,检测的灵敏度高,猪种的鉴定体系由于扩增效率偏低,造成检测的灵敏度偏低,但不影响实验的特异性,今后应进一步优化猪种鉴定体系,提高其扩增效率,从而提高其检测灵敏度。 4.布鲁氏菌对喹诺酮类药物耐药机制的研究 本实验对临床分离的喹诺酮类药物敏感的布鲁氏菌菌株进行体外诱导耐药,测定其诱导前后MIC,诱导前敏感菌株MIC仅为0.25μg/ml~0.5μg/ml,表明喹诺酮类药物治疗布鲁氏菌感染有很好的潜力。经过左氧氟沙星多次诱导后产生2株稳定的耐药菌株, MIC分别为64μg/ml及128μg/ml,增加了128倍和256倍,而且2株耐药菌株对其它喹诺酮类药物均产生了交叉耐药,揭示了喹诺酮类药物治疗布鲁氏菌感染的局限性。 本实验对gyrA基因进行PCR扩增和序列分析,结果显示耐药菌株均在gyrA基因喹诺酮耐药性决定区(Quinolone resistance-determing region,QRDR)发生了典型的基因突变,对扩增的gyrA基因进行氨基酸序列推导,GyrA的氨基酸改变区域是第87位的丙氨酸(密码子GCU)置换为缬氨酸(密码子GUU),第91位的天冬氨酸(密码子GAU)置换为甘氨酸(密码子GGG)和缬氨酸(密码子GUG)。实验结果表明gyrA基因突变是布鲁氏菌对喹诺酮类药物耐药的主要机制。 综上研究结果表明吉林省布鲁氏菌病主要的病原是羊布鲁氏菌、牛布鲁氏菌和猪布鲁氏菌,以羊布鲁氏菌居多;建立了布鲁氏菌属荧光定量PCR方法,可以对布鲁氏菌属的细菌进行定量检测,具有极高的敏感性、特异性和稳定性;建立了布鲁氏菌种的荧光定量PCR方法,可对羊、牛、猪布鲁氏菌进行快速鉴别和定量,与传统方法比较具有安全、敏感、快速、特异等优点;实验诱导产生的2株耐药菌株,对喹诺酮类药物均产生交叉耐药,主要耐药机制是gyrA基因的QRDR发生突变。
【学位授予单位】:吉林大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R516.7

【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 申峰勇;延边牛布鲁氏菌的分离及bp26基因的克隆和原核表达[D];延边大学;2012年
【参考文献】
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1 王晓英,黄建;细菌DNA G+Cmol%在布氏菌种鉴定中的应用[J];中国地方病防治杂志;1992年02期
2 张士义,朱岱,冮森林;中国布鲁氏菌病防治50年回顾(待续)[J];中国地方病防治杂志;2003年05期
3 尚德秋;布氏菌病研究进展[J];中国地方病防治杂志;2004年04期
4 满腾飞;王大力;崔步云;王赢;丁凡;李铁锋;孙辉;魏荣杰;李群;冯子健;殷文武;;2009年全国布鲁氏菌病监测数据分析[J];疾病监测;2010年12期
5 齐景文;布鲁氏菌病概述[J];中国兽医杂志;2004年09期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 甄清;人布鲁氏菌病标准化PCR诊断方法及BP26基因标记疫苗研究[D];吉林大学;2009年
【共引文献】
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1 刘营;李玉保;;鲁西地区奶牛乳房炎病原菌分离鉴定及药敏试验[J];安徽农学通报;2008年19期
2 曹红梅;冯杰;沙莎;刘力;;大西洋鲑腐皮病研究——鳃部病原菌的分离鉴定[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年11期
3 齐永华;陈桂香;王承民;韩克光;王文魁;;中原地区奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定及药敏试验[J];安徽农业科学;2006年14期
4 吴静;张彦明;杨银萍;;中草药对奶牛乳房炎病原菌的体外抑菌作用[J];安徽农业科学;2007年28期
5 陆杏华;何后军;王萍;邬向东;;猪传染性胸膜肺炎放线杆菌江西株的分离鉴定及PCR诊断[J];安徽农业科学;2008年06期
6 曹思军;刘有旺;朱瑞良;;奶牛酵母菌性乳腺炎的诊治试验[J];安徽农业科学;2008年21期
7 王思芦;杨柳;邓黎军;;苦参与TMP对仔猪黄痢病原菌的联合抑菌试验[J];安徽农业科学;2008年29期
8 敖日格乐;王纯洁;于俊娥;斯木吉德;吴美云;程佳;陈昆;;牛粪堆肥中添加抑菌剂对大肠杆菌杀灭效果的研究[J];安徽农业科学;2009年01期
9 汪仁莉;张珠明;何生虎;;牛心朴子体外抑菌作用的研究[J];安徽农业科学;2009年31期
10 宋瑞佳;侯伟倬;杨杰;冯静;张小娜;范红哲;甄占萱;邓淑华;;白花曼陀罗和白屈菜水浸液杀菌效果研究[J];安徽农业科学;2010年09期
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1 邬纯鸿;黄毅;王文莉;钟代彬;吴广安;方艳军;;现代化奶牛场乳房炎病因调查及其防治[A];中国奶业协会年会论文集2009(上册)[C];2009年
2 刘俊伟;李蕊;;副猪嗜血杆菌病的实验室诊断[A];河南省畜牧兽医学会第七届理事会第二次会议暨2008年学术研讨会论文集[C];2008年
3 赵恒章;刘保国;赵坤;李国旺;杜伟国;;黄连、金银花等对副猪嗜血杆菌的体外抑菌试验[A];河南省畜牧兽医学会第七届理事会第二次会议暨2008年学术研讨会论文集[C];2008年
4 常洪涛;王川庆;陈陆;姚雪静;;河南省致病性猪源链球菌部分微生物学特性及耐药性研究[A];河南省畜牧兽医学会第七届理事会第二次会议暨2008年学术研讨会论文集[C];2008年
5 司振书;牛钟相;;微生态制剂对蛋鸡生产和免疫性能的影响[A];山东农业微生物技术学术研讨会论文集[C];2006年
6 王金良;沈志强;曲光刚;唐娜;刘吉山;李峰;管宇;;布氏杆菌病研究进展[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会论文集[C];2008年
7 郭军庆;杜振昆;张妙仙;项玉燕;柯永恩;周继勇;;奶牛布氏杆菌分离株的分子分型[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会论文集[C];2008年
8 张彩虹;李文立;任慧英;姜建阳;朱风华;;酵母铬对热应激肉鸡免疫功能和胴体品质的影响[A];中国畜牧兽医学会家畜生态学分会第七届全国代表大会暨学术研讨会论文集[C];2008年
9 郝志慧;周颖斌;邱梅;邹明;陈杖榴;;不同区域鸡大肠杆菌对抗菌药的耐药性比较[A];首届中国兽药大会动物药品学暨中国畜牧兽医学会动物药品学分会2008学术年会论文集[C];2008年
10 邬向东;陈如圣;全炳昭;于利兵;雷海芳;戴茶股;徐勤伦;;犬抗坏血酸克吕沃尔氏杆菌分离鉴定及药敏试验分析[A];第十三次全国养犬学术研讨会论文集[C];2009年
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1 刘文兴;布鲁氏菌标记疫苗(M5-90-26)的鉴别诊断及其bp26蛋白的免疫原性分析[D];南京农业大学;2011年
2 Muhammad Yaqoob;禽大肠杆菌病的诊断及大肠杆菌的耐药机制研究[D];南京农业大学;2011年
3 张锦霞;抗菌肽在动物乳腺中的表达及对乳房炎主要病原菌的抑制效应研究[D];吉林大学;2006年
4 孙延鸣;捻转血矛线虫半乳糖结合凝集素生物学功能研究[D];南京农业大学;2006年
5 刘梅;禽类病原体抗原在苏云金芽胞杆菌细胞表面的展示[D];华中农业大学;2006年
6 易勇;EHEC O157:H7紧密粘附素胞外区的晶体结构及功能研究[D];第三军医大学;2007年
7 刘姝;海洋链霉菌GB-2的分离筛选及其抗菌物质的研究[D];南京农业大学;2007年
8 王玉飞;IV型分泌系统调控布鲁氏菌胞内生存的分子机制研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2008年
9 胡钰;吉林省麻疹野毒株病原学及强化免疫对麻疹流行影响的研究[D];吉林大学;2008年
10 乔凤;外膜蛋白Omp25在布鲁氏菌毒力及免疫保护中的作用研究[D];吉林大学;2009年
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1 刘新军;表达布氏杆菌sodc基因的重组沙门氏菌的构建及不同种布氏杆菌鉴别PCR检测方法的建立[D];华中农业大学;2010年
2 都振玉;潍坊地区鸭传染性浆膜炎病原体的分离鉴定与疫苗制备应用研究[D];山东农业大学;2009年
3 王广伟;枣庄地区鸡大肠杆菌病的防治研究[D];山东农业大学;2010年
4 石峰;鸡肠道乳酸菌分离鉴定及其功能研究[D];山东农业大学;2010年
5 段龙;间歇光照对肉仔鸡免疫指标及抗氧化酶活性的影响[D];安徽农业大学;2010年
6 刘莉;HSV-2 gD模拟抗原表位、IL-18重组核酸疫苗的构建及免疫效果观察[D];泰山医学院;2010年
7 张向新;乌鲁木齐地区奶牛隐性乳房炎及金黄色葡萄球菌Fnbp基因原核表达的初步研究[D];新疆农业大学;2010年
8 李博;布鲁氏菌PCR检测方法的应用与分子分型研究[D];新疆农业大学;2010年
9 周晓艳;中国布氏菌的多位点序列分型研究[D];山西医科大学;2011年
10 吴海洋;鼻气管鸟杆菌的分离鉴定及致病性研究[D];山东农业大学;2011年
【同被引文献】
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1 司瑞;徐志凯;;布鲁氏菌病国内研究进展[J];地方病通报;2006年05期
2 李博;易新萍;李金平;刘丽娅;叶锋;吐尔洪;谷文喜;钟旗;;布鲁氏菌病监测和诊断技术的研究进展[J];兽医导刊;2010年03期
3 尚德秋;布鲁氏菌病再度肆虐及其原因[J];中国地方病防治杂志;2001年01期
4 李金岭;;布鲁氏菌病的流行特点、症状及危害[J];兽医导刊;2010年03期
5 张爱君;;布氏菌病荧光偏振试验[J];中国地方病防治杂志;2008年04期
6 杜昕颖;陈泽良;王玉飞;乔凤;赵瑾;苑锡铜;黄留玉;;多重PCR特异检测布鲁氏菌方法的建立[J];解放军预防医学杂志;2008年05期
7 周艳彬;柳晓琳;;布鲁氏菌病的流行、发病原因及防治进展[J];辽宁医学院学报;2010年01期
8 卫广森;动物布鲁氏菌病的研究进展[J];辽宁畜牧兽医;2004年06期
9 张见麟;布鲁氏菌选择性培养基简介[J];疾病监测;1995年09期
10 李艳;苗利光;刘艳环;王志刚;李海涛;杨福合;;检测和鉴别流产布鲁氏菌与猪布鲁氏菌的复合PCR方法的建立[J];特产研究;2008年03期
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1 甄清;人布鲁氏菌病标准化PCR诊断方法及BP26基因标记疫苗研究[D];吉林大学;2009年
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1 李彦伟;OIE标准布鲁氏菌ELISA和PCR检测方法在奶牛奶样中的应用研究[D];东北农业大学;2011年
【二级参考文献】
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1 尚德秋;布鲁氏菌病免疫制剂现况[J];地方病通报;2000年01期
2 鲁齐发,尚德秋;布鲁氏菌病变态、血清学反应与机体保菌关系的研究[J];地方病通报;2000年02期
3 唐浏英;布鲁氏菌以铜/锌为辅基的超氧化物歧化酶的研究进展[J];中国地方病防治杂志;1996年01期
4 尚德秋;布鲁氏菌病流行病学及分子生物学研究进展[J];中国地方病防治杂志;1996年06期
5 尚德秋;布鲁氏菌病流行病学及分子生物学研究进展[J];中国地方病防治杂志;1997年01期
6 尚德秋,唐浏英,邱海燕,李兰玉,李元凯,张伟,王晓英,胡德育,张福利,刘冬立,李巧林,王进,李秋芬,王书义,杜兰芳,王顺杰,王显军,冯开军,孙桐;布氏菌病新诊断技术的研究[J];中国地方病防治杂志;1999年03期
7 李艳红;PCR技术在布鲁氏菌病防治研究中的应用[J];中国地方病防治杂志;1999年04期
8 李铁锋,何玉萍,孙海波,张桂珍,颜世民;分子生物学方法在布氏菌病病原学诊断中的应用[J];中国地方病防治杂志;1999年06期
9 张士义,江森林,聂志文,李铁锋,张新飞;国内外防治布鲁氏菌病主要技术措施的实施及评价[J];中国地方病防治杂志;2000年01期
10 吕景生,张桂珍,何玉萍;我国90年代布鲁氏菌病防治研究概述[J];中国地方病防治杂志;2000年03期
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1 钟志军;于爽;徐杰;王玉飞;彭广能;陈燕芬;白耀霞;付思美;王同坤;汪舟佳;杜昕颖;黄克和;陈泽良;;布鲁氏菌比较基因组学研究进展[J];中国人兽共患病学报;2011年04期
2 曹小安;邱昌庆;秦天达;;布鲁氏菌毒力基因的研究状况[J];中国人兽共患病学报;2009年07期
3 许锐刚,吴从雅,冬青,孙志;硝酸稀土促进布鲁氏菌生长试验[J];地方病通报;1993年03期
4 曹温年,常承忠,李元凯,邱海燕;在羊的血培养中发现一株与布鲁氏菌交叉反应的迟缓爱德华氏菌[J];中国人兽共患病杂志;1994年06期
5 严雷,王伟导,卿燕,邰新萍,木合塔尔,安次巴依;布鲁氏菌和耶尔森氏O∶9血清型菌抗原等电聚焦电泳分析[J];地方病通报;1994年01期
6 王书义,赵仁久,燕建振,赵西英,李书振,张秀芳,尚德秋,李元凯,鲁齐发,高连和,崔汝琰,倪胜奇;对一养兔专业户患布鲁氏菌病的流行病学调查[J];中华流行病学杂志;1995年03期
7 王文敬,李妍,骆利敏,芮勇宇,李明;布鲁氏菌AP-PCR最优反应体系的建立[J];中国人兽共患病杂志;2005年06期
8 王伟导,卿燕,邰新萍,木合塔尔,安次巴依;用布鲁氏菌BSAg抗原免疫酶斑点试验鉴别布鲁氏菌与其它交叉反应细菌感染[J];中国地方病防治杂志;1994年01期
9 白英瑞,道尔吉;锡林郭勒盟布鲁氏菌种型分析[J];内蒙古预防医学;1995年01期
10 ;布鲁氏菌属[J];预防医学文献信息;1995年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 吴斌;王玫;王长文;刘霞;;布鲁氏菌分子生物学快速检测技术的研究[A];动物检疫学分会2010年学术年会论文集[C];2010年
2 曾政;于三科;王希良;;布鲁氏菌17.3kDa蛋白的表达及免疫效果研究(英文)[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
3 谷文喜;钟旗;吴冬玲;何倩倪;热合木江 达吾提;叶峰;吐尔洪;李金平;赵兵;;七株布鲁氏菌VirB8基因的克隆与序列分析[A];第二届全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2008年
4 刘文娟;吴清民;林怀樱;任婕;刘文晓;杨羽;王晓夏;;羊布鲁氏菌转座子突变株文库构建及毒力基因的初步鉴定[A];第二届全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2008年
5 潘文;李珊珊;赵明秋;琚春梅;陈金顶;;新型可视化LAMP检测布鲁氏菌方法的建立及初步应用[A];中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2010年学术年会(第三届中国兽药大会学术论坛)论文集[C];2010年
6 潘文;李珊珊;赵明秋;琚春梅;陈金顶;;新型可视化LAMP检测布鲁氏菌方法的建立及初步应用[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集[C];2010年
7 潘文;李珊珊;赵明秋;琚春梅;陈金顶;;新型可视化LAMP检测布鲁氏菌方法的建立及初步应用[A];2010第二届中国食品安全高峰论坛论文集[C];2010年
8 赵茜;吴清民;任婕;牛建蕊;杨羽;刘文晓;王晓夏;刘文娟;;流产布鲁氏菌转座子突变株文库构建及毒力基因的初步鉴定[A];第二届全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2008年
9 丁家波;杨宏军;康孟佼;程君生;毛开荣;蒋玉文;;布鲁氏菌在豚鼠和奶牛体内诱导的抗体水平和变态反应强度相关性研究[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会论文集[C];2010年
10 邱昌庆;;OIE推荐的牛布鲁氏菌病诊断技术[A];人畜共患传染病防治研究新成果汇编[C];2004年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 本报记者 袁志勇;别让动物把布鲁氏菌传给你[N];科技日报;2010年
2 晓艳;布鲁氏菌疫苗仅能对抗肝脾感染[N];医药经济报;2002年
3 竹青;二次污染尚存何谈奶源卫生[N];中国食品质量报;2003年
4 谭英;当心猫狗影响家人健康[N];医药养生保健报;2009年
5 通讯员 严鞠;阿拉山口检验检疫局两项科研成果获州科技进步奖[N];博尔塔拉报;2008年
6 中国兽药监察所副研究员 毛开荣;“九五”期间我国布鲁氏菌病防治成绩显著[N];中国畜牧水产报;2000年
7 李有祥;奶源二次污染 令人心惊[N];中华工商时报;2003年
8 本报记者 刘宝亮;中国乳业期待浴火重生[N];中国经济导报;2005年
9 张玉谍;群众关注的热点就是办实事的重点[N];辽宁日报;2008年
10 ;青霉素类兽药的使用[N];中国畜牧兽医报;2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 孙丽媛;吉林省布鲁氏菌流行株种属鉴定及其耐药分子机制的研究[D];吉林大学;2011年
2 张辉;羊种布鲁氏菌感染胚胎滋养层细胞的分子机制研究[D];石河子大学;2009年
3 陈燕芬;布鲁氏菌中国分离株遗传多态性研究[D];吉林大学;2012年
4 杨艳玲;羊布鲁氏菌蛋白质组学分析及免疫候选抗原的筛选与鉴定[D];吉林大学;2011年
5 刘文兴;布鲁氏菌标记疫苗(M5-90-26)的鉴别诊断及其bp26蛋白的免疫原性分析[D];南京农业大学;2011年
6 乔凤;外膜蛋白Omp25在布鲁氏菌毒力及免疫保护中的作用研究[D];吉林大学;2009年
7 王玉飞;IV型分泌系统调控布鲁氏菌胞内生存的分子机制研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2008年
8 赵忠鹏;布鲁氏菌毒力、免疫相关分子的筛选研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2008年
9 曲勍;QS系统VjbR在布鲁氏菌胞内生存中作用的研究[D];吉林大学;2009年
10 朱才众;布鲁氏菌噬菌体裂解酶基因表达、生物活性鉴定及裂菌动力学研究[D];第三军医大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 唐婕;布鲁氏菌膜蛋白组学研究及免疫蛋白的筛选鉴定[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年
2 张芳毓;布鲁氏菌毒力相关基因的筛选和鉴定[D];吉林农业大学;2011年
3 杨毅;不同种型布鲁氏菌进化中基因获得与缺失研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2011年
4 李勇;布鲁氏菌小鼠感染模型的建立及在疫苗保护性评价中的初步应用[D];吉林大学;2011年
5 莫莎;家畜布鲁氏菌病流行病学调查及布鲁氏菌单核苷酸多态性分子分型研究[D];南京农业大学;2011年
6 申峰勇;延边牛布鲁氏菌的分离及bp26基因的克隆和原核表达[D];延边大学;2012年
7 孙春辉;羊布鲁氏菌16M感染巨噬细胞膜蛋白质组学研究[D];吉林大学;2011年
8 高洪霞;不同血清学方法检测牛羊布鲁氏菌疫苗免疫抗体消长规律的比较研究[D];东北农业大学;2010年
9 童永亮;牛型布鲁氏菌苹果酸脱氢酶酶学性质及其免疫学特性研究[D];西南大学;2012年
10 吕玉金;羊种布鲁氏菌16M优势蛋白抗原的鉴定[D];河南农业大学;2011年
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