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《吉林大学》 2011年
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表达Apoptin基因重组腺病毒对肝癌细胞BEL-7402及转移模型的抑制作用

黄海燕  
【摘要】:就基因治疗病毒载体而言,根据其复制特征可分为复制型病毒载体和复制缺陷型病毒载体。上述两种病毒载体均具有将目的基因导入癌变细胞的功能,但只有前者体现出溶瘤活性。已有利用携带野生型p53基因的复制缺陷型腺病毒治疗恶性脑胶质瘤的报道。在这项研究中,复制缺陷型腺病毒通过瘤内注射的方式导入肿瘤组织。在所有接受治疗的患者体内,均检测到外源p53基因的表达,这些p53基因大多表达于肿瘤细胞的细胞核内,并且具有诱导靶细胞凋亡的功能。然而,这些复制缺陷型腺病毒仅能够在注射部位5mm范围内检测至其存在。与复制缺陷型腺病毒相反,复制型腺病毒则具有提供持续感染、复制和表达外源基因的能力。 腺病毒已被证实是一种通用的、有效的,且已得到广泛应用的基因治疗载体。这种病毒载体具有滴度高、外源基因载量大等特点。另外,这些载体可以在感染的肿瘤细胞内复制并表达外源基因,从而最终导致肿瘤细胞的裂解。事实上,现有的基因治疗项目中有近四分之一应用腺病毒载体。总之,腺病毒是一种最为常用的人类基因治疗载体。 条件复制型腺病毒(Conditionally-replicative adenovirus, CRAd)是一种能够选择性的在肿瘤细胞内复制并杀伤肿瘤细胞的基因工程重组病毒,对正常细胞无作用。CRAd的最大优势也就在于其特异性的在肿瘤细胞复制的功能。病毒在细胞内复制的最终结果是子代病毒的产生和细胞的溶解,而所产生的子代病毒能够继续感染周围的细胞,这也就能够解释为何复制型腺病毒具有更高的抑瘤活性。通过操作腺病毒的复制过程可以进一步提升CRAd的肿瘤特异性复制能力。提高CRAd肿瘤趋向性的策略很多,主要包括以下几种:一是缺失腺病毒基因组中有关在肿瘤细胞内复制的相关序列;二是利用肿瘤特异性启动子使其能够在肿瘤细胞内特异性复制。 为探讨CAV Apoptin的抗肿瘤特征,本研究利用表达Apoptin的重组腺病毒,针对人肝癌细胞BEL-7402和小鼠肝癌细胞H22进行了体内、体外抑瘤实验研究。我们利用MTT染色、AO/EB染色、DAPI染色和Annexin V等方法探讨了含CAV Apoptin重组腺病毒的体外抑瘤作用;通过对线粒体膜电位和活性氧水平的检测分析了含CAVApoptin重组腺病毒对肝癌细胞BEL-7402施加影响的信号途径。另外,本研究还在小鼠荷肝癌实体瘤模型和小鼠荷肝癌肺转移模型基础上,通过分析模型动物平均生存期、肿瘤生长趋势、抑瘤率、NK活性、CTL活性和细胞因子水平,对含CAV Apoptin重组腺病毒的体内抑瘤作用进行了探讨。体外实验结果表明,含CAV Apoptin重组腺病毒能够通过诱导细胞凋亡有效抑制肿瘤细胞增殖。体内实验结果表明,表达CAVApoptin重组腺病毒虽然不能完全抑制体内肿瘤细胞的生长,但在实体瘤模型动物和转移瘤模型动物体内均发现其具有肿瘤抑制作用。
【学位授予单位】:吉林大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R735.7

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