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《吉林大学》 2011年
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吉林地区PRRS流行病学调查及真核疫苗构建与免疫原性研究

李国江  
【摘要】:本研究利用PRRSV特异性抗体ELISA方法对吉林地区规模化猪场PRRSV感染情况和PRRS免疫猪场的抗体水平进行调查。通过对PRRS免疫猪场268份血清样品和非免疫猪场232份血清样品进行PRRSV特异性抗体检测,结果发现吉林地区一些未免疫PRRS疫苗的规模化猪场猪群PRRSV存在较高的感染率,感染率为50%~75%。免疫过PRRS疫苗的猪场猪群血清抗体阳性率在66.67%~100%之间,不同日龄猪群血清阳性率不同,后备母猪群血清阳性率最高,5~10周龄断奶仔猪血清阳性率最低,生产母猪群血清阳性率高于断奶仔猪,低于后备母猪。 本研究克隆了PRRSV阳性病料GP5基因,并进行了序列分析,结果显示所克隆的GP5蛋白基因全长603bp,编码201个氨基酸。与VR-2332株和LV株核苷酸序列同源性分别为91.6%及48.7%,推导的氨基酸序列同源性分别为87.6%及60.0%。本实验室分离的PRRSV JL/07/SW分离株GP5基因与美洲VR-2332 GP5基因的同源性高,与欧洲型LV GP5基因的同源性较低,说明PRRSV JL/07/SW分离株为美洲型。PRRSV JL/07/SW分离株GP5蛋白基因编码的氨基酸序列与国内首个分离株BJ-4株的同源性很高,提示该株病毒可能来源于BJ-4株,是其变异毒株。 为了进一步研究PRRSV GP5蛋白的免疫功能,本研究以PRRSV JL/07/SW毒株GP5基因为目的基因,以含有绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的pEGFP-N1为真核表达载体,成功构建了单独表达PRRSV GP5基因的重组核酸疫苗质粒pEGFP-GP5。将该重组疫苗免疫21日龄仔猪,检测其诱导机体产生的体液免疫和细胞免疫水平,并与不同类型的商品PRRSV疫苗进行比较。对所有试验用的仔猪免疫两次,在首免(21日龄)后28d加强免疫1次。体液免疫检测结果表明,pEGFP-GP5重组核酸疫苗免疫组仔猪产生了特异性ELISA抗体和中和抗体,中和抗体滴度为1:3.44~1:10.99。细胞免疫检测结果表明,pEGFP-GP5可诱导仔猪产生高水平的IFN-γ反应,能明显增加CD4+和CD8+T淋巴细胞数量和特异性T-淋巴细胞增殖反应,且明显高于pEGFP-N1免疫组(P0.05)。这些结果表明,PRRSVGP5重组DNA疫苗能诱导Thl型细胞免疫反应。 上述结果表明,PRRSV GP5核酸疫苗有很强的免疫原性,可诱导机体产生特异性体液免疫和细胞免疫,为研制PRRSV新型疫苗奠定了基础。
【学位授予单位】:吉林大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:S858.28

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【参考文献】
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