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《吉林大学》 2011年
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猪睾丸组织microRNA的鉴定与差异表达研究

廉传江  
【摘要】:MicroRNA(miRNA)是一类具有调节作用的小分子RNA,其在真核生物基因表达调控方面具有重要作用。猪不仅是重要的农业经济动物,而且也是研究生长、发育、生殖等多种生理过程的一种很好的模式生物。但是目前鉴定的猪miRNA数量很少,而且有关猪miRNA的研究主要集中于肌肉、脂肪等组织,而对繁殖性状相关组织的研究却很少。 因此,本研究以猪睾丸组织为研究对象,在构建猪未成熟与成熟睾丸组织小RNA cDNA文库的基础上利用Solexa高通量测序技术结合生物信息学分析鉴定猪miRNA并进行差异表达谱分析,同时利用生物信息学软件预测差异表达miRNA的靶基因并对其功能进行分析,进一步选择部分差异表达miRNA,分析其在不同发育时期睾丸组织以及其他不同组织中的表达情况,结果表明:(1)利用Solexa高通量测序技术,成功获得猪未成熟与成熟睾丸组织小分子RNA;(2)在总体小RNA组成上未成熟与成熟睾丸组织具有明显差异,并且在成熟睾丸组织中小RNA种类更加丰富;(3)鉴定了398个已知与同源保守的猪miRNAs以及138个新候选猪miRNAs,其中包括18个新的猪特异miRNAs;(4)已知的猪成熟miRNA序列观察发现一些特殊现象,如某些miRNA*序列丰度远远高于其对应的成熟miRNA;大量的miRNA序列5′和3′末端具有序列多样性,同时观察到12个特殊的miRNAs;(5)122个已知与保守的miRNAs在猪未成熟与成熟睾丸组织中差异表达,与未成熟睾丸相比,其中96个显著上调,26个显著下调;(6)19个差异表达最显著的miRNAs共预测到2,252个靶基因对应3,398个靶位点。GO与KEGG Pathway分析表明,112个靶基因与生殖过程相关;(7)实时荧光定量PCR检测结果表明,10个miRNAs在不同发育时期睾丸组织均有表达,而且除个别时期外,7个miRNAs总体表达趋势呈现一定的规律性;10个miRNAs在不同组织中具有一定程度的表达差异。 总之,本实验对猪未成熟与成熟睾丸组织间miRNA组学差异进行了研究,结果表明miRNA在猪睾丸发育或精子发生过程中可能具有重要调控作用,为进一步研究猪miRNA在精子发生过程中的作用及繁殖性状的分子调控机制奠定了基础。
【学位授予单位】:吉林大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:S828

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