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古尼虫草液体发酵和多糖提取及其抗肿瘤活性研究

李电  
【摘要】:本研究首先应用古尼虫草菌丝体产量为评价指标,在筛选出合适的碳氮源及金属阳离子的基础之上,利用Plackett-Burman设计法和响应面法对古尼虫草的发酵培养基进行优化,得到最佳培养基组分及其配比:24.34 g/L的葡萄糖,22.14 g/L的蛋白胨,7.25 g/L的尿素,0.20 g/L的磷酸二氢钾,0.30 g/L的硫酸镁,0.01 mg/L的氯化钙,0.005 mg/L的氯化钠以及100mg/L的维生素B1,以及得到最大的菌丝体产量2.9082 g/L。 然后,在培养基配方进行优化的基础之上,分别对影响显著的几个摇瓶发酵单因素条件进行探索,然后应用中心组合设计实验对古尼虫草的摇瓶发酵条件进行优化,得到最佳的摇瓶发酵条件:pH值5.6、温度26.6℃、发酵时间5.72天、转速156.6 r/min、种龄4天、接种量7%、装液量100 ml,以及最大的菌丝体产量14.12 g/L。随后进行验证实验,采用最佳的培养基配方及摇瓶发酵条件进行三次平行实验,得到真实测定值与理论预测值之间的相对误差,误差为1.13%。 最后,利用单因素和响应面的方法对古尼虫草的胞内多糖超声提取工艺进行了优化,得到最佳提取条件:超声时间214.4 s,超声功率413.7 W,物液比为1:46.9,以及多糖得率的最大预测值2.2263%,然后进行验证实验对实际测定值与理论预测间的误差,得到相对误差为1.8%,并初步研究其抗肿瘤活性,考察了古尼虫草胞内多糖对各种人源肿瘤细胞在体外增殖的影响,胞内多糖对Hela细胞、MCF-7细胞和SMMC7721细胞具有有效地体外增殖抑制作用,其中在一定浓度范围内,hela细胞和MCF-7细胞的体外增殖抑制作用具有显着的浓度依赖性。


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