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《吉林大学》 2012年
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可调控的IL-2和IL-12基因联合对肿瘤微环境的影响

程薇  
【摘要】:背景和目标 随着肝癌研究的不断深入,肝脏局部微环境在肝癌发生、发展中的作用逐渐引起人们的重视。已经证实联合应用IL-2和IL-12有很好的抗肿瘤效果,但是目前为止,两者联合的可调控质粒对肿瘤微环境的研究还未见报导。本实验首先建立小鼠原位移植性肝癌模型,将可调控的IL-2和IL-12基因联合,通过水流动力学注射的方法把质粒注入小鼠体内,这种可调控的质粒通过诱导剂能够控制转基因的表达,观察两者联合后通过改变肝脏肿瘤或脾脏局部微环境,从而抑制或延缓肿瘤的生长。 方法 首先建立小鼠原位移植性肝癌模型,将小鼠分成5组,3个实验组包括IL-2、IL-12和两者联合组,2个对照组包括LacZ和生理盐水组,表达mIL-2和mIL-12的质粒含有RU486调控系统和肝脏特异性启动子,通过水流动力学注射的方法把质粒注入小鼠体内,RU486进行诱导。诱导后取血,应用ELISA方法检测血清中mIL-2和mIL-12的表达水平。于诱导结束后处死部分小鼠,测量肿瘤大小。应用酶消化法和Percoll密度梯度法分离肝脏肿瘤和脾脏的淋巴细胞,借助流式细胞仪检测肝脏肿瘤和脾脏各种免疫细胞的比例。肝脏HE染色后观察组织形态学变化,免疫组织化学染色观察肿瘤组织PCNA和VEGF的表达情况,余下小鼠用于观察生存期。 结果 1.肿瘤大小和小鼠生存期 各组小鼠的肿瘤体积为,生理盐水组(555.96±122.36)mm3、LacZ组(554.63±133.08)mm3、IL-2组(276.68±16.46)mm3、IL-12组(148.32±28.17)mm3、联合组(60.59±27.06)mm3。三个实验组肝脏肿瘤体积均低于对照组,特别是联合组,肿瘤大小明显低于对照组、IL-2组和IL-12组。 各组小鼠的平均生存天数为,生理盐水组(24.75±0.86)d、LacZ组(24.89±0.98)d、IL-2组(25.00±1.74)d、IL-12组(38.00±2.94)d、联合组(40.11±6.09)。其中IL-12组与联合组均高于对照组,但是IL-12组与联合组之间没有差异。 2.肝脏和肿瘤组织形态学变化 肝脏HE染色可见对照组小鼠肝脏肿瘤面积较大,尽管肿瘤组织中央可见坏死组织,但是周边的瘤细胞却生长旺盛,异型性明显,瘤结节边界不清楚,瘤细胞呈浸润性生长,汇管区周围很少有单个核细胞浸润灶。而IL-2、IL-12和联合三个实验组,肿瘤面积较小,而且肿瘤基本局限于肝叶的边缘,呈局灶状分布。瘤组织与正常肝脏组织交界处整齐,肿瘤细胞层变窄,在联合组有的肿瘤细胞消失,而变成单个核细胞浸润灶。三个实验组汇管区均有大量的单个核细胞浸润灶。 PCNA和VEGF免疫组织化学染色显示,对照组均有较高的阳性表达率,且阳性细胞大部分为深棕色,而三个实验组阳性细胞率较低,阳性细胞大部分为浅棕色,与对照组有统计学差异,特别是联合组阳性细胞率低于单独IL-2和IL-12组。 3.血清中细胞因子的表达 从mIL-2的表达来看,只有IL-2和联合组可检测到mIL-2的表达,其中IL-2组表达水平较高,联合组仅为IL-2组的58.65%。从mIL-12的表达来看,只有IL-12组和联合组可检测到mIL-12的表达,其中联合组表达水平较高,IL-12组仅为联合组的76.38%。 4.肝脏肿瘤局部和脾脏免疫微环境的变化 在肝脏肿瘤中,CD4+/CD8+的比值在三个实验组均低于对照组,而联合组较单独IL-2和IL-12组下降更明显。CD8+/Treg的比值在三个实验组较对照组明显增加,特别是联合组超过单独IL-2和IL-12组,增加尤其明显。在脾脏中,CD4+/CD8+的比值和CD8+/Treg的比值各组间没有统计学差异。 结论 1.可调控的IL-2和IL-12基因联合应用,抑制肿瘤细胞的增殖及VEGF的表达,从而 延缓了肿瘤的生长。 2.可调控的IL-2和IL-12基因联合降低肿瘤内CD4+/CD8+的比值,增加CD8+/Treg 的比值,可以改善局部肿瘤微环境。
【学位授予单位】:吉林大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:R735.7

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