收藏本站
《吉林大学》 2013年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

间充质干细胞和内皮祖细胞对造血干/祖细胞体外扩增效力作用的研究

迟玥  
【摘要】:目的:研究脐带组织来源的间充质干细胞(MSCs)和内皮祖细胞(EPCs)对脐血造血干/祖细胞(HSCs/HPCs)体外扩增效力的作用及其简要机制。 方法:正常新生儿脐带中分离MSCs,从免疫表型CD14、CD29、CD31、CD34、CD44、CD45、CD73、HLA-ABC,以及向脂肪细胞、成骨细胞分化的潜能两方面进行鉴定。从免疫表型CD31、CD34、CD133、CD146的分析对EPCs进行鉴定。将MSCs和EPCs分别用丝裂霉素C处理后制备成细胞滋养层。实验共设三组:(1)对照组(无细胞滋养层);(2)MSC组(MSCs滋养层);(3)EPC组(EPCs滋养层)。 正常新生儿脐血中分离单个核细胞(MNCs),流式细胞术检测其中HSCs/HPCs所占比例。分别接种相同数量的MNCs于两种细胞滋养层或仅于培养液中,观察共培养第4d、第7d三组MNCs的扩增情况。分别将三组中扩增前、共培养第4d、共培养第7d的相同数量的MNCs接种于甲基纤维素培养基,7~10d后观察这几个阶段HSCs/HPCs形成集落的数量和体积。流式细胞术检测扩增前后HSCs/HPCs表面抗原CD34的表达,以及共培养第1、3、5、7天各组MNCs的增殖情况。分别收集MSCs和EPCs经丝裂霉素C处理后培养24h的上清液及对照组上清液。ELISA法检测细胞因子IL-3、IL-6、SCF、TPO、Flt3L、VEGF的水平,并进行比较。 结果: 1.共培养第4d及第7d,镜下观察和台盼蓝染色计数的结果显示:三组MNCs数量均增加,但MSC组和EPC组MNCs扩增倍数明显大于对照组,EPC组更为显著。第4d,MSC组MNCs数约为对照组的1.71倍(**,p0.01),EPC组MNCs数约为对照组的2.93倍(*,p0.05)。第7d,MSC组MNCs数约为对照组的1.38倍(*,p0.05),EPC组MNCs数约为对照组的2.10倍(**,p0.01),EPC组MNCs数约为MSC组的1.53倍(**,p0.01)。 2.共培养7d后,流式细胞术分析三组HSCs/HPCs CD34的表达,结果显示:三组CD34+CD45-HSCs/HPCs比例均较扩增前下降,EPC组下降幅度最显著,MSC组最不显著。扩增前CD34~+CD45~-的HSCs/HPCs占MNCs的2.20%。共培养7d后,对照组CD34+CD45-的HSCs/HPCs占MNCs的1.40%;MSC组CD34+CD45-的HSCs/HPCs占MNCs的1.85%;而EPC组CD34~+CD45~-的HSCs/HPCs仅占MNCs的0.41%。 3.集落形成实验结果显示:7~10d后,MSC组HSCs/HPCs形成的集落数量较另两组多,且同类型集落体积较另两组大。共培养第4d的HSCs/HPCs接种于甲基纤维素培养基7~10d后,MSC组HSCs/HPCs集落形成总数为对照组的2.55倍(**,p0.01),为EPC组的2.47倍(**,p0.01);共培养第7d的HSCs/HPCs接种于甲基纤维素培养基7~10d后,MSC组HSCs/HPCs集落形成总数为对照组的3.73倍(**,p0.01),为EPC组的3.45倍(**,p0.01);EPC组与对照组的集落形成总数和体积无显著差异。 4.流式细胞术分析MNCs增殖情况,结果显示:共培养第1、3、5、7d分别检测,可见三组CFSE荧光强度均减弱,即三组细胞均增殖;MSC组和EPC组荧光强度减弱幅度较对照组大,即细胞增殖程度较对照组大,EPC组更为显著。 5. ELISA法检测三组培养上清液中6种细胞因子水平,结果显示:IL-3、Flt3L的水平差异无统计学意义;MSC组上清液IL-6水平较对照组和EPC组显著升高(p0.01),EPC组较对照组升高(p0.01);EPC组上清液SCF水平较对照组和MSC组显著升高(p0.01);EPC组TPO水平较对照组升高(p0.01);MSC组和EPC组VEGF水平较对照组显著升高(p0.01)。 结论: MSCs是较EPCs更适合HSCs/HPCs体外扩增的细胞滋养层,可为其提供适宜的细胞微环境。MSCs有助于维持HSCs/HPCs表达CD34并可抑制其分化,保持其造血重建潜能和归巢能力,这可能与IL-6的作用关系密切;而EPCs有效促进HSCs/HPCs向成熟血细胞的分化,可能与其分泌大量TPO相关。
【学位授予单位】:吉林大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2013
【分类号】:R329.2

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 姜尔烈,周征,黄勇,王荷花,王玫,刘庆国,周世勇,阎嶂松,翟文静,韩明哲;间充质干细胞对脐血CD34~+细胞体外扩增和黏附分子表达的影响[J];中华血液学杂志;2005年07期
2 许力;林金盈;毛平;;体外扩增的脐血单个核细胞植入NOD/SCID小鼠的研究[J];中国实验血液学杂志;2007年06期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 范华骅,马庆,张钦辉,高峰,刘达庄;不同造血生长因子对脐血有核细胞体外扩增作用的实验研究[J];中国输血杂志;1998年04期
2 仇志根,范华骅;细胞因子扩增脐带血CD_(34)~+细胞中LTC-IC的变化[J];白血病;2000年01期
3 孔佩艳,郭朝华,罗成基,周燕虹,邹仲敏,施炎;细胞因子组合对小鼠骨髓单核细胞的体外扩增作用[J];第三军医大学学报;2001年10期
4 李澄宇;孟凡义;;CD34阳性慢性粒细胞白血病细胞生物学特征及其意义[J];国际输血及血液学杂志;2005年05期
5 吴晓雄,汪月增!100853北京,裴雪涛,楼方定!100853北京,张伯龙!100853北京,王立生,徐黎;WT1反义寡核苷酸对白血病细胞的抑制作用[J];解放军医学杂志;2000年06期
6 辜少玲,廖灿,刘斌,魏佳雪;三联袋两次离心法分离脐血有核细胞研究[J];临床血液学杂志;1999年01期
7 辜少玲,廖灿,刘斌,许遵鹏;不同保存温度对脐血造血细胞的影响[J];临床血液学杂志;2000年02期
8 许遵鹏,廖灿,刘斌,辜少玲;二甲基亚砜和右旋糖酐对脐血造血细胞的低温保护作用[J];临床血液学杂志;2000年06期
9 张伶,刘国卿;体外扩增对脐血细胞重建造血功能的影响[J];临床血液学杂志;2001年01期
10 徐学聚;脐血造血干细胞移植研究进展[J];实用儿科临床杂志;1998年02期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 宣尧仙;陈国灿;陈云祥;徐潘生;杨红忠;陈颖;陈浩;卢祺炯;李峰;陈名友;雒蓬轶;刘忠荣;王若卓;钱伯初;;重组人干细胞因子与重组人粒细胞集落刺激因子联合用药的猴毒性研究[A];浙江省医学科学院建院55周年院庆论文专辑[C];2005年
中国博士学位论文全文数据库 前5条
1 王建伟;人参总皂甙对CD34~+造血干/祖细胞体外扩增和分化的作用及机制研究[D];重庆医科大学;2004年
2 冯凯;造血干/祖细胞的体外定向诱导分化的临床前研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2002年
3 冷晓梅;大剂量免疫抑制并自体外周血CD34~+细胞移植治疗重症/难治性自身免疫病的临床研究[D];中国协和医科大学;2003年
4 李澄宇;粒系集落刺激因子、STI571、三氧化二砷以及Velcade对BCR/ABL~+CD34~+细胞生物学行为的影响[D];第一军医大学;2006年
5 张昆仲;姜黄素与伊马替尼体外协同抗慢性粒细胞白血病的分子机制研究[D];福建医科大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前8条
1 常红星;自体骨髓基质细胞体外培养促分化及经皮注射修复兔骨缺损的研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2002年
2 李静远;胚胎造血干/祖细胞体外培养及扩增的实验研究[D];广西医科大学;2002年
3 腾增辉;重组人骨形成蛋白成熟肽-2对辐射小鼠骨髓造血功能的促进作用及其机制研究[D];第四军医大学;2004年
4 贺文凤;脐血间充质干细胞对PHA诱导的淋巴细胞增殖的影响[D];南昌大学;2006年
5 沈亚芳;天麻蛋白对动物细胞生长的影响及分子机理[D];上海师范大学;2007年
6 董毅;人骨髓间充质干细胞对再生障碍性贫血患者T细胞增殖与活化的影响[D];安徽医科大学;2007年
7 胡军;大鼠供者源性骨髓间充质干细胞对异基因骨髓移植后造血重建和急性移植物抗宿主病的影响[D];新疆医科大学;2007年
8 侯海锋;当归对鸡骨髓造血机能及红细胞免疫功能的影响[D];河北农业大学;2008年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前7条
1 潘玥,张鸣,谭顺革;干细胞因子研究概况[J];国外医学.临床生物化学与检验学分册;2005年09期
2 莫文健,毛平,何秋山,应逸,朱志刚,许艳丽,杜庆华;无血清脐血巨核系祖细胞体外扩增的研究[J];中国实验血液学杂志;2004年02期
3 张洁霞,毛平;脐血CD34~+细胞及红系祖细胞扩增的实验研究[J];中国实验血液学杂志;2005年03期
4 陈惠芹;张绪超;黄绍良;吴北燕;吴燕峰;包蓉;;人AGM区基质细胞对脐血LTC-IC的支持作用[J];中国实验血液学杂志;2006年01期
5 毛平;许力;莫文健;应逸;许艳丽;林秀梅;;不同细胞因子组合对人脐血单个核细胞体外扩增及CD49d和CXCR4表达的影响[J];中国实验血液学杂志;2006年02期
6 吴韶清,廖灿,辜少玲,陈劲松,许遵鹏,刘斌;CD_(34)~+CD_(62L)~+细胞输入量对儿童急性白血病无关脐血移植的影响[J];中华儿科杂志;2004年01期
7 陈惠芹;张绪超;黄绍良;吴北燕;吴燕峰;蔡耘;;人胚胎AGM区基质细胞在体外培养中对脐血CD34~+细胞的支持作用[J];中华血液学杂志;2006年06期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 程千鹏;吕肖锋;;内皮祖细胞与PI3K/Akt信号传导通路[J];心血管病学进展;2009年S1期
2 赵瑛;徐志玲;蔡绍皙;;内皮祖细胞在血管组织工程的应用[J];生物医学工程学杂志;2008年02期
3 何朝荣,张群林,黄从新;兔骨髓间充质干细胞体外成内皮细胞能力的研究[J];中华老年多器官疾病杂志;2003年04期
4 余华;张怀勤;;内皮祖细胞的动员及影响因素[J];中国分子心脏病学杂志;2005年06期
5 白春雨;侯玲玲;庞全海;关伟军;马月辉;;内皮祖细胞的分离培养与鉴定[J];生物技术通报;2010年02期
6 蔡巍巍;陈长志;;干细胞技术在血管组织工程中的应用[J];上海交通大学学报(医学版);2007年10期
7 施森;何延政;刘勇;;内皮祖细胞在血管组织工程中的应用[J];中国组织工程研究与临床康复;2007年07期
8 宋显晶;杨萍;刘斌;姜峰;;人脐静脉血内皮祖细胞的分离、培养及鉴定[J];中国实验诊断学;2008年04期
9 方志成;周昌娥;王玮;刘志祥;;单克隆抗体CD_(133)在内皮祖细胞表达的实验研究[J];中国现代医学杂志;2006年16期
10 施森;宋丽;何延政;刘勇;葛红卫;钟武;杨辉;曾宏;;血管内皮生长因子在外周血内皮祖细胞体外三维血管新生中的作用[J];第三军医大学学报;2009年18期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 孔佩艳;罗成基;周燕虹;郭朝华;;基质细胞对体外扩增造血细胞造血重建活性的促进作用[A];第九届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2003年
2 张毅;李长东;江小霞;刘元林;张双喜;吴英;唐佩弦;毛宁;;胎盘间充质干细胞的分离及对脐血CD_(34)~+细胞的体外扩增作用[A];第九届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2003年
3 张晓艳;陆化;刘澎;吴汉新;钱思轩;徐卫;朱雨;段丽敏;李建勇;;人骨髓间充质干细胞体外扩增及联合造血干细胞移植治疗血液病的研究[A];第11次中国实验血液学会议论文汇编[C];2007年
4 王冬梅;杨莉;李梁;冯凯;白慈贤;裴雪涛;;成人骨髓间充质干细胞体外扩增和定向诱导分化为骨和软骨细胞的研究[A];中国生物工程学会第三次全国会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2001年
5 侯玲玲;曹华;裴雪涛;;人骨髓间充质干细胞体外扩增和向神经细胞定向诱导分化的研究[A];中国生物工程学会第三次全国会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2001年
6 倪世良;孙自敏;翟志敏;汪健;任学雷;刘会兰;王祖贻;;体外扩增与新鲜脐血CD_(34)~+细胞混合移植对NOD/SCID小鼠造血重建功能的研究[A];第九届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2003年
7 李明辉;田丁;刘聪艳;孙雪静;苏力;万岁桂;徐娟;;脐血细胞体外扩增与骨髓间充质干细胞[A];第三届全国血液免疫学学术大会论文集[C];2003年
8 戴革;李洁;李剑;吴琼;曹青;戴育成;;无血清培养条件下脐血造血干细胞的体外扩增研究[A];2005年华东六省一市血液病学学术会议暨浙江省血液病学学术年会论文汇编[C];2005年
9 袁红丰;郭子宽;刘晓丹;张双喜;毛宁;;内皮细胞支持体外造血和造血干/祖细胞体外扩增[A];中国生物工程学会第三次全国会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2001年
10 黄艳红;谭孟群;雷军;王绮如;;基质细胞条件培养液中TGF-β对体外扩增巨核系细胞的影响[A];中国生理学会第21届全国代表大会暨学术会议论文摘要汇编[C];2002年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 姚春雨 钱勇;盖鲁粤:要啃心衰“硬骨头”[N];中国医药报;2003年
2 本版编辑 章扬培 檀英霞 张志欣 宫锋;血源紧缺将成历史[N];健康报;2007年
3 广闻;骨髓干细胞治疗多种眼疾[N];医药经济报;2002年
4 通讯员 王其玲 记者 罗坚梅;干细胞,燃起人类绝处逢生新希望[N];杭州日报;2005年
5 记者 王代同 通讯员 黄文靖;我发现干细胞移植可促进角膜修复[N];科技日报;2005年
6 罗刚 黄文婧;干细胞技术有望用于角膜重建[N];健康报;2005年
7 记者崔大涛;人骨髓间充质干细胞移植能促进角膜重建[N];中国医药报;2005年
8 本报记者  应洪舒;举步跨越待有时[N];中国医药报;2005年
9 本报记者  游雪晴 实习生 刘奕诗;宏观看标本,微观看基因[N];科技日报;2006年
10 张中桥;AMCase基因突变体克隆成功[N];中国医药报;2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王玥;骨桥蛋白对内皮祖细胞增殖作用和机制及二者在乳腺癌中相关性的研究[D];第二军医大学;2010年
2 刘哲亮;残粒脂蛋白对循环内皮祖细胞血管新生的影响[D];中南大学;2010年
3 赵炎波;胸腺素β4对循环内皮祖细胞的作用及机制[D];浙江大学;2011年
4 吴建国;自体移植冻存猪骨髓内皮祖细胞防治多器官功能障碍的研究[D];第二军医大学;2011年
5 吴建祥;氧化高密度脂蛋白对内皮祖细胞功能影响及机制研究[D];第二军医大学;2010年
6 吴琼;人胚胎干细胞定向诱导生成内皮祖细胞及内皮细胞促进肿瘤生长的作用研究及机制初探[D];中国人民解放军军医进修学院;2010年
7 卢正茂;移植经慢病毒介导hVEGF_(165)-GFP的双表达基因转染内皮祖细胞防治多器官功能障碍研究[D];第二军医大学;2010年
8 陈图刚;阿司匹林对外周血内皮祖细胞数量与功能及其iNOS的影响[D];浙江大学;2006年
9 徐盛开;尾加压素Ⅱ对大鼠骨髓源内皮祖细胞的作用及其分子机制[D];武汉大学;2010年
10 方兴根;内皮祖细胞在动脉瘤和Tubridge支架治疗后内膜重建中示踪研究[D];第二军医大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 朱人大;自噬抑制对内皮祖细胞影响的实验研究[D];苏州大学;2010年
2 姚丽萍;系统性硬皮病患者外周血内皮祖细胞数量和功能的研究[D];泸州医学院;2011年
3 殷文;雌激素通过α-受体亚型途径促进内皮祖细胞增殖和迁移[D];泸州医学院;2010年
4 李玉青;机械应力诱导血管内皮细胞和平滑肌细胞对内皮祖细胞滚动粘附及分化的影响[D];上海交通大学;2011年
5 李金海;酸性成纤维细胞生长因子对人脐血内皮祖细胞影响的实验研究[D];福建医科大学;2011年
6 汪奕斌;急性心肌梗死患者外周血内皮祖细胞早晚期集落数目和功能的变化[D];江苏大学;2010年
7 高达;心肌梗死后患者循环内皮祖细胞与冠状动脉病变的实验研究[D];宁波大学;2010年
8 徐家行;人脐血内皮祖细胞移植于心肌梗死裸鼠的实验研究[D];南方医科大学;2010年
9 王乐;大鼠内皮祖细胞超微超顺磁性氧化铁颗粒标记及体外MR成像研究[D];安徽医科大学;2010年
10 杜瑞;FoxO4在血管紧张素Ⅱ诱导的内皮祖细胞凋亡中的机制研究[D];山西医科大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026