sirt1激活剂细胞筛选模型建立及初步应用
【摘要】：天然药物在中国有着悠久的历史，天然药物以其来源广泛，作用温和，一直以来被广泛使用。随着近些年来天然药物提取分离纯化技术的发展，获得了很多具有良好效果的单体化合物。据报道sirt1基因在一些能量代谢类疾病中起到重要作用，例如糖尿病，肝脏疾病等。因此以sirt1基因作为靶点进行药物筛选，有希望得到一些能够对这类疾病具有治疗效果的药物。天然药物的水提取物是天然药物最常使用的药用成分，因此本实验采用对所选取的天然药物的水提取物作为药物筛选库。
近些年随着至对荧光素酶的研究深入，发现其不仅仅能够作为细胞或者分子的标记物进行细胞追踪和活体成像，同样也可以应用于药物高通量筛选，通过建立特异性目的靶标的报告基因载体，通过双荧光素酶报告基因系统，能够快速的从小分子化合物库中筛选出所需的分子。由于其灵敏度高，特异性强，操作简单，可高通量性，得到越来越广泛的应用。本实验运用双荧光素酶检测方法，将sirt1启动子克隆入报告基因荧光素酶启动子区域，通过瞬间转染细胞后给药刺激，检测荧光素酶活性的方法。建立一个sirt1激活剂细胞筛选模型，以所选天然药物水提取物作为筛选药物库，进行sirt1激活剂进行筛选，希望获得若干sirt1激活剂，为这类能量代谢疾病寻找新的治疗方法。
【关键词】：天然药物 荧光素酶报告基因 sirt1基因 药物筛选 【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R285
【目录】：
- 摘要4-5
- Abstract5-9
- 第一章 绪论9-21
- 1.1. 天然药物研究进展9-12
- 1.1.1 天然药物发展简介9-10
- 1.1.2 天然药物功能研究进展10-12
- 1.2 sirt1 基因研究进展12-18
- 1.2.1 sirt1 基因简介12-14
- 1.2.2 sirt1 基因功能研究进展14-17
- 1.2.3 天然药物有效成分对 sirt1 基因作用研究进展17-18
- 1.3 天然药物活性成分筛选方法研究进展18-19
- 1.3.1 药物活筛选方法简介18
- 1.3.2 报告基因在天然药物筛选中的应用18-19
- 1.4 研究目的及意义19-21
- 第二章 实验材料与方法21-29
- 2.1 实验材料21-23
- 2.1.1 实验材料21
- 2.1.2 实验试剂及仪器21-23
- 2.2 实验方法23-29
- 2.2.1 天然药物的提取方法23
- 2.2.2 人基因组 DNA 的提取方法23
- 2.2.3 sirt1 启动子基因的克隆23-24
- 2.2.4 sirt1 荧光素酶报告基因质粒的构建24-25
- 2.2.5 质粒提取25
- 2.2.6 去内毒素质粒提取25-26
- 2.2.7 MTT 细胞毒性测定方法26
- 2.2.8 HEK293T 细胞转染方法26-27
- 2.2.9 双荧光素酶活性的测定方法27
- 2.2.10 HEK293T 细胞总 RNA 的提取及 Realtime PCR 测定方法27-28
- 2.2.11 HEK293T 细胞双氧水损伤模型的建立28
- 2.2.12 SIRT1 蛋白 ELISA 测定方法28-29
- 第三章 实验结果与讨论29-46
- 3.1 筛选 sirt1 激活剂细胞模型的构建29-36
- 3.1.1 荧光素酶报告基因载体的构建29-31
- 3.1.2 sirt1 激活剂细胞筛选模型的建立31-33
- 3.1.3 Res 对转染报告基因后的 HEK293T 细胞的 sirt1 转录水平影响33-36
- 3.1.4 小结36
- 3.2 天然药物提取物的初步筛选36-42
- 3.2.1 天然药物的提取36
- 3.2.2 天然药物水提取物细胞毒性测定36-39
- 3.2.3 天然水提物的活性筛选39-41
- 3.2.4 铃兰，泽泻，罗布麻，黄芩，棘果，虎杖水提物对 sirt1 转录水平的影响41
- 3.2.5 小结41-42
- 3.3 天然药物的抗氧化作用研究42-46
- 3.3.1 SIRT1 蛋白表达量的测定42-43
- 3.3.2 双氧水诱导 HEK293T 细胞损伤模型的建立43
- 3.3.3 中药水提物的抗氧化损伤活性测定43-45
- 3.3.4 小结45-46
- 结论46-47
- 参考文献47-50
- 附录50-51
- 致谢51
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|
| 1 |
周军,樊亦军,陈定南,梁灼,杨婉玲;喜树碱(CPT)与10—羟基喜树碱(HCPT)的抗肿瘤活性与毒性比较[J];癌症;1991年03期 |
| 2 |
倪劲松,吴家祥,肖纫秋,石博,王心蕊,刘淑香;刺五加皂甙对糖尿病大鼠血过氧化脂质和超氧化物歧化酶的影响[J];白求恩医科大学学报;1998年01期 |
| 3 |
杨秀伟;天然药物化学发展的历史性变迁[J];北京大学学报(医学版);2004年01期 |
| 4 |
周建新，钟小林，李蓉芬，叶上宇，董燕麟;烫伤大鼠肝葡萄糖激酶、肌己糖激酶活性及红细胞三磷酸腺苷含量的变化[J];第三军医大学学报;1994年03期 |
| 5 |
龚其锦,林邦超,朱少木,王丽艳;喜树黄毒蛾生物学特性及其防治初步研究[J];福建林学院学报;1993年04期 |
| 6 |
郭舜民;喜树碱类似物的研究进展[J];国外医学.药学分册;1994年05期 |
| 7 |
顾关云;蒋昱;;植物降血糖成分的研究概况[J];国外医药(植物药分册);1997年02期 |
| 8 |
涂文升，刘宗河;抗癌药物喜树碱的高效液相色谱测定[J];广西医科大学学报;1995年02期 |
| 9 |
苗明三,孙艳红;中药的降糖成分及作用机理[J];河南中医药学刊;2002年05期 |
| 10 |
徐任生;赵志远;林隆泽;胥传凤;;抗癌植物喜树化学成分的研究 Ⅱ.喜树果中的化学成分[J];化学学报;1977年Z1期 |
|
|
|
|
|
| 1 |
赵守训;;国外天然药物化学进展[A];中国科学技术协会2004年学术年会海南分会场“中国生态药业与药谷建设”论文集[C];2004年 |
| 2 |
赵锐;;谈谈天然药物与中药的新产品开发[A];2001’全国药用植物与中药院士论坛及学术研讨会论文集[C];2001年 |
|
|
|
|
|
| 1 |
郝巧玲,吕斌,周宜开,程光明;生物发光法快速检测细胞内三磷酸腺苷[J];华中科技大学学报(医学版);2005年01期 |
| 2 |
尉继征;熊伟;祝庆余;;生物发光技术在活体成像检测中的应用[J];医学分子生物学杂志;2006年03期 |
| 3 |
樊粉霞;卫玮;柳惠图;张伟;;紫龙金对BGC-823细胞增殖的抑制作用及对p16~(INK4a)启动子活性的影响[J];北京师范大学学报(自然科学版);2010年01期 |
| 4 |
张华,供田洋,大村智;真菌KS-1995产生的增加LDLR基因表达的活性物质的研究[J];中国抗生素杂志;1998年04期 |
| 5 |
李淑德,许国铭,李兆申;鸡螺杆菌诱导胃上皮细胞白细胞介素8转录及病理意义[J];胃肠病学;2002年02期 |
| 6 |
黄瑞燕,许丽艳,许晓玲,方栩佳,陈波,牛永东,李恩民;NGAL基因5’侧翼区启动子区的克隆与鉴定[J];肿瘤防治研究;2005年06期 |
| 7 |
陈涛;Bhatta SK;刘建平;林浩铭;万云乐;陈翔;罗兴喜;区庆嘉;;应用生物荧光法检测三磷酸腺苷评估肝细胞功能储备(英文)[J];中国组织工程研究与临床康复;2008年42期 |
| 8 |
孟希亭;林晨;梅佳;王海娟;马飞;张金龙;张颖;钱海利;;活体成像系统检测携荧光素酶增殖缺陷型腺病毒在小鼠体内的表达和分布[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2011年04期 |
| 9 |
王小红,王升启,李梦东,朱宝珍;HCV 5'NCR片段调控荧光素酶表达质粒的构建及其在HepG2细胞中的表达[J];中华微生物学和免疫学杂志;1999年01期 |
| 10 |
贾战生,周永兴,焦成松;丙型肝炎病毒与荧光素酶融合基因细胞模型的初步建立[J];第四军医大学学报;2000年07期 |
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