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《吉林大学》 2017年
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小反刍兽疫病毒GZL-14的分离鉴定与双抗体夹心ELISA方法的建立及应用

郭昌明  
【摘要】:小反刍兽疫(Peste des petits ruminants,PPR)是由副黏病毒科麻疹病毒属中小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)引起的一种严重危害养羊业健康发展的急性或亚急性接触性传染病,以发生高热、口腔糜烂、大量眼鼻分泌物、腹泻和呼吸道炎症为特征,属于国际动物卫生组织(OIE)规定的通报性疫病和国内规定的法定一类动物疫病。主要感染动物是绵羊和山羊,有报道称野生小反刍动物亦可感染。本研究从吉林省某羊群发生的临床上以发热、流涎、口腔黏膜严重溃疡、呼吸道症状严重、严重腹泻和高死亡率为特征的羊群中分离获得到130~150 nm的病毒粒子,命名为GZL-14毒株。序列分析发现,GZL-14毒株N蛋白基因的核苷酸序列与国外分离株INDIA-1994和PRADESH-95的同源性最高达99.3%。对GZL-14毒株的全基因组序列进行了测定,发现该毒株的完整基因组序列长16058 bp;与国内毒株的同源性最高为99.9%、其次为99.8%和99.7%,而与国外的中东与东非和西非的毒株比对同源性较低,最低为88.8%,其次为90.8%,与中东和非州流行本病的毒株同源性差异大。遗传进化分析均属于PPRV基因IV型。为国内PPRV在不同地区的流行情况提供了新的分子流行病学资料。应用分子生物学技术,扩增、克隆和表达了GZL-14结构蛋白N基因,并以此为抗原制备出针对N蛋白的多克隆抗抗体;建立了PPRV病毒抗原的双抗体夹心ELISA检测方法,方阵法确定兔抗PPRV IgG的包被量为0.2μg,酶标抗体最佳稀释度是1:1000,双抗体夹心ELISA检测PPRV的阳性判定标准为被检粪便样品OD_(490)≥0.221。特异性、敏感性等试验结果表明,建立的检测PPRV抗原方法具有特异、敏感和快速等优特点。与RT-PCR方法相比,该方法省时省力、简单快速。应用该检测PPRV抗原ELISA方法对不同地区的401份羊粪样进行检测,发现各地区无临床症状的羊群均存在程度不同的PPRV隐性感染(PPRV亚临床感染),不同地区羊群感染率可高达44.2%。本研究为该病的早期诊断、病原流行病学调查和检验检疫提供了有效方法。在国内首次揭示出临床健康羊群携带小反刍兽疫病毒并排毒。该发现将为本病的诊断与防控提出了新的问题与挑战,应引起国内同行的高度关注。
【学位授予单位】:吉林大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:S852.65

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