收藏本站
《吉林大学》 2018年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

基于金纳米棒的有机磷农药等离子体ELISA方法的建立

刘运清  
【摘要】:有机磷农药(OPTs)是指一类含有磷原子的有机磷酸酯类化合物,作为一类广谱、高效、易降解且廉价的杀虫剂和除草剂正在被广泛应用于农牧业生产。但其在动物机体内会使乙酰胆碱酯酶(ChE)磷酸化,从而抑制其分解乙酰胆碱(ACh)的活性,使得ACh在机体内大量蓄积,从而引起中枢神经系统中毒症状,对机体产生严重的毒害作用。因此,建立简单、快速和超灵敏的多残留有机磷农药检测技术成为近年来的研究热点。目前,免疫学检测技术由于其简单快速、超灵敏、低成本和适合多样本检测等优势,已经逐步成为一种应用广泛的农残检测手段。甲基对硫磷、杀螟硫磷和倍硫磷都属于O,O-二甲基硫代磷酸酯类化合物。甲基对硫磷属于广谱杀虫剂,倍硫磷是消灭臭虫效果最好的药品,杀螟硫磷对水稻大螟、二化螟等害虫有特效,三种农药在实际生产中应用非常广泛。所以,本研究以甲基对硫磷、杀螟硫磷和倍硫磷三种有机磷农药为研究对象,利用可以能识别三种农药的宽谱特异性单克隆抗体,通过种子生长法制备纵向局域表面等离子体共振吸收峰(LLSPR)在750 nm左右的金纳米棒(AuNRs),运用EDC法活化羧基磁珠并与检测抗原共价结合,制备磁珠检测原探针,利用抗原抗体之间的特异性反应,分别建立三种检测方法分别是:间接竞争ELISA(ic-ELSIA)、基于TMB~(2+)蚀刻AuNRs介导的多色等离子体ELISA(AuNRs-p-ELISA)和基于TMB~(2+)蚀刻AuNRs介导的免疫磁珠ELISA(AuNRs-IMBs-p-ELISA)检测方法,实现了三种有机磷农药在果蔬中的定量检测。对建立的传统ic-ELISA方法进行5个条件的优化,分别得到针对甲基对硫磷、杀螟硫磷和倍硫磷的三条标准曲线。其标准曲线的线性回归方程分别为y_1=36.947x-135.75、y_2=38.275x-145.75和y_3=32.275x-123.04;相关系数为R2_1=0.9935、R2_2=0.9982和R2_3=0.9979;根据标准方程计算出甲基对硫磷、杀螟硫磷和倍硫磷三种有机磷农药的IC_(50)分别是106.53、130.11、229.84 ng/mL;最低检测限分别为8.81、11.73和13.25 ng/mL;三者在白菜、雪梨和大米中的平均回收率分别为103.14%、92.96%、74.70%,105.02%、77.44%、63.50%和79.83%、98.87%、76.13%。本实验所建立的ic-ELISA检测方法可以用于果蔬食品中三种有机磷农药的实际样品检测。利用TMB~(2+)可以蚀刻AuNRs,使AuNRs的纵向表面等离子体共振吸收峰(LLSPR)发生蓝移,从而引起溶液眼观颜色的变化而建立基于TMB~(2+)蚀刻AuNRs介导的裸眼半定量ELISA检测方法。并对该方法的3个主要条件进行优化,得到针对甲基对硫磷、杀螟硫磷和倍硫磷的三条标准曲线。该方法针对三种有机磷农药的线性回归方程和相关系数分别为:y_1=0.0188x+3.0082、R2_1=0.9822,y_2=0.0215x+2.5467、R2_2=0.9526和y_3=0.0189x+3.4365、R2_3=0.9874;相应的IC_(50)值分别为71.61、45.99和208.00 ng/mL;最低检测限分别为2.42、0.95和6.52 ng/mL;甲基对硫磷在白菜、雪梨和大米中的平均回收率分别是90.55%、102.29%和69.11%;杀螟硫磷在白菜、雪梨和大米样品中的平均回收率为108.91%、91.51%和76.57%;倍硫磷在白菜、雪梨和大米样品中的平均回收率为78.66%、90.94%和69.50%。羧基磁珠与检测抗原通过共价结合制备磁珠探针代替传统的直接抗原包被,建立基于TMB~(2+)蚀刻AuNRs介导的免疫磁珠裸眼半定量ELISA检测方法。并对主要条件进行优化,得到针对甲基对硫磷、杀螟硫磷和倍硫磷的线性回归方程和相关系数分别是y_1=-49.464x+316.22、R2_1=0.9684,y_2=-55.412x+355.5、R2_2=0.9769和y_3=-53.762x+350.08、R2_3=0.9895,三者的IC_(50)分别为37.45、61.86和68.80 ng/mL;最低检测限分别为1.31、3.10和3.15 ng/mL;甲基对硫磷在白菜、雪梨和大米中的平均回收率分别是104.02%、113.33%和79.67%;杀螟硫磷在白菜、雪梨和大米样品中的平均回收率为104.19%、91.05%和70.19%;倍硫磷在白菜、雪梨和大米样品中的平均回收率为100.86%、88.65%和70.76%。本研究针对甲基对硫磷、杀螟硫磷和倍硫磷建立的三种检测方法均能满足我国及欧盟国家对水和食品中OPTs最大残留限量(MRL)的检测要求。
【学位授予单位】:吉林大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:TQ450.263

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王志超;康志娇;史雪岩;高希武;;有机磷类杀虫剂代谢机制研究进展[J];农药学学报;2015年01期
2 李云霞;韩根亮;王艳凤;马莉萍;;基于还原态氧化石墨烯/纳米金/壳聚糖复合膜固定化酶的有机磷生物传感器[J];化学通报;2014年10期
3 祁志军;寇立泉;王东方;刘爽;;有机磷杀虫剂多残留免疫分析技术研究进展[J];食品安全质量检测学报;2013年01期
4 王海兵;王海青;;水环境监测中加标回收率计算方法的探讨[J];治淮;2010年12期
5 刘辉荣;徐宏;古宏晨;卢瑛;王玲;侯盛;;简便高效分离细胞新型免疫磁珠制备[J];中国公共卫生;2008年11期
6 孔小丽;乔飞燕;齐晖;李富荣;周汉新;;抗体和寡核苷酸双标记纳米金生物探针的制备及性能分析[J];中国生物化学与分子生物学报;2008年05期
7 张宝文;;新阶段中国农民教育的战略思考[J];北京农业职业学院学报;2005年06期
8 付广云,韩长秀;有机磷农药及其危害[J];化学教育;2005年01期
9 武宝利,张国梅,高春光,双少敏;生物传感器的应用研究进展[J];中国生物工程杂志;2004年07期
10 马瑾,潘根兴,万洪富,祝坚;有机磷农药的残留、毒性及前景展望[J];生态环境;2003年02期
中国博士学位论文全文数据库 前3条
1 任志奇;基于磁珠固相载体的时间分辨荧光免疫分析技术平台的建立及临床应用[D];南方医科大学;2016年
2 朱杰君;金、银纳米结构的制备与光学性质研究[D];南京大学;2011年
3 蒋雪松;用于有机磷农药残留检测的免疫生物传感器的研究[D];浙江大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 高地;猪链球菌2型免疫磁珠夹心ELISA方法的建立[D];南京农业大学;2012年
2 李红臣;金纳米棒的生长和光学性质[D];南京航空航天大学;2011年
3 刘莹;有机磷农药的胶体金免疫层析快速检测试纸条的研制[D];上海师范大学;2009年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 马仲遥;翟奎露;王楠;;无害化使用土地事关国家可持续性发展的思考[J];法制与社会;2015年35期
2 刘烁;李媛;;电感耦合等离子体质谱法测定黄河水质微量元素的研究[J];甘肃科技;2015年23期
3 潘玉娟;尹芳;张无敌;周肸;黄体珺;曾锦;牛行天;柳静;;有机磷降解剂对生菜农残降解效果分析[J];安徽农业科学;2015年32期
4 高杨;郑玉山;巴特尔;;气相色谱-串联质谱法测定牛奶中有机磷残留的不确定度评定[J];食品安全质量检测学报;2015年10期
5 何智勇;魏春雁;宋志峰;蔡红梅;;减少蔬菜农药残留 保障人们舌尖儿上的安全[J];吉林农业;2015年20期
6 洪旭鹭;陈敏东;周军英;单正军;葛峰;;毒死蜱对铜绿微囊藻的毒性效应研究[J];环境科学与技术;2015年10期
7 翁士状;李淼;李华龙;罗伟;;酶抑制分光光度法与表面增强拉曼散射在农药检测中的进展[J];食品安全质量检测学报;2015年09期
8 郭乃妮;席洋智;;昆虫驱逐剂3-甲基-N,N-二乙基苯甲酰胺(EDETB)的合成研究[J];皮革与化工;2015年04期
9 张春花;张昌豹;;气相色谱法测定食品中田乐磷的残留量[J];山东化工;2015年15期
10 姚欣雅;赵敏娴;曹正颖;王灿楠;;结合体质量生长函数的幼年大鼠毒死蜱经口暴露PBTK/TD模型的研究[J];癌变·畸变·突变;2015年04期
中国博士学位论文全文数据库 前6条
1 刘津升;基于金纳米棒结构的合成及其等离激元特性研究[D];南京航空航天大学;2015年
2 郭业民;基于适配体传感器的牛奶中抗生素残留快速检测技术研究[D];东北农业大学;2015年
3 叶尊忠;快速检测毒死蜱和大肠杆菌的便携式阻抗生物传感器仪器研究[D];浙江大学;2015年
4 徐霞;农产品中真菌毒素检测用新型光学纳米生物传感器的研究[D];浙江大学;2013年
5 王明华;分子模拟辅助研究氨苄青霉素残留快速检测免疫传感器的特异性[D];浙江大学;2011年
6 黄君冉;用于农药残留检测的压电免疫生物传感器的研究[D];浙江大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 周后茹;海藻酸钠/金纳米棒复合物的稳定性与光热性能研究[D];太原理工大学;2018年
2 刘运清;基于金纳米棒的有机磷农药等离子体ELISA方法的建立[D];吉林大学;2018年
3 胡薇薇;茶叶中啶虫脒农药的纳米生物传感器检测方法研究[D];江苏大学;2017年
4 夏诗琪;基于不同标记物的免疫层析方法检测猪霍乱沙门氏菌的研究[D];南昌大学;2016年
5 王江录;食品中苯巴比妥快速检测方法的研究[D];南昌大学;2015年
6 刘培辰;烯啶虫胺胶体金免疫层析试纸条的研究[D];天津科技大学;2014年
7 伍鑫茹;同时检测黄曲霉素B_1和桔青霉素的金标试纸制备技术研究[D];五邑大学;2013年
8 赵亚茹;食品中Ⅱ型拟除虫菊酯类农药残留的免疫胶体金快速检测试剂条的研究[D];上海师范大学;2013年
9 李月明;双酚A单克隆抗体制备及胶体金免疫层析试纸条的研制[D];广东工业大学;2012年
10 徐小婧;庆大霉素可视化免疫快速检测方法的研究[D];天津科技大学;2012年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 马莉萍;左显维;王艳凤;李云霞;张彪;韩根亮;;基于Au NPs-CeO_2@PANI纳米复合材料固定化酶的葡萄糖生物传感器[J];传感技术学报;2013年05期
2 周丽君;黄启欣;雷红涛;王欲晓;王强;徐振林;王弘;孙远明;;二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药单链抗体的制备及广谱特异性[J];高等学校化学学报;2012年10期
3 刘喜保;温万东;祁志军;胡兆农;杨润亚;;硫代磷酸酯类农药通用抗原的合成与鉴定[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2012年04期
4 贺江;梁颖;樊明涛;刘贤金;;噬菌体展示技术制备甲氧基有机磷农药抗独特型抗体[J];分析化学;2011年02期
5 李永祥;徐振林;王弘;雷红涛;孙远明;沈丹;杨金易;沈玉栋;;二甲氧基硫代磷酸酯类农药多残留免疫分析方法研究[J];分析化学;2010年11期
6 张丽杰;潘家荣;;乙氧基磷酸酯类有机磷农药单克隆抗体的制备与鉴定[J];生物化学与生物物理进展;2010年09期
7 范增杰;马莉萍;李云霞;刘国汉;李工农;韩根亮;;基于静电沉积壳聚糖铂纳米颗粒复合膜构建葡萄糖生物传感器[J];传感技术学报;2010年06期
8 陈珠丽;郭希山;朱松明;;基于纳米金修饰丝网印刷电极的乙醇生物传感器[J];传感技术学报;2009年12期
9 谢桂勉;孙远明;徐振林;李永祥;雷红涛;王弘;沈玉栋;;硫代磷酸二乙酯类农药半抗原设计及抗体识别特性[J];高等学校化学学报;2009年11期
10 吴芸茹;王利民;娄旸;刘扬;胡白石;刘凤权;;复合免疫制备3种有机磷农药单克隆抗体的技术研究[J];南京农业大学学报;2009年04期
中国博士学位论文全文数据库 前3条
1 桂文君;农药残留ELISA速测试剂盒产业化技术研究[D];浙江大学;2007年
2 韩丽君;有机磷农药的酶免疫化学研究[D];中国农业大学;2003年
3 李劲;植物内源激素等物质的电化学生物传感技术研究[D];湖南大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 刘丽强;19-去甲睾酮胶体金免疫层析试纸条的研制[D];江南大学;2007年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 徐宏喜;陈瑞华;张炯炯;;中药中有机磷农药的残留量研究[J];中草药;1990年03期
2 王威;贺红武;王列平;宁斌科;王海洋;毛明珍;王储备;何琦文;薛超;;有机磷农药及其研发概况[J];农药;2016年02期
3 兰子尧;林野;赵松华;周贻兵;李磊;刘利亚;;气相色谱法测定蔬菜中9种有机磷农药的残留量[J];贵州医药;2016年04期
4 李敏;;有机磷农药≠叶面肥[J];农药市场信息;2015年23期
5 王娟;夏恩琴;;白醋真能去除农残吗[J];家庭医药.快乐养生;2017年02期
6 赵媛;;有机磷农药残留在果蔬中的快速检测技术研究[J];食品界;2017年03期
7 孙正阳;张甜甜;;果蔬产品中有机磷农药残留检测方法[J];食品界;2017年06期
8 杨红梅;;重症有机磷农药中毒的急诊急救效果观察[J];家庭医药.就医选药;2016年07期
9 王东;郭成;;2015年银川市蔬菜中有机磷农药残留状况[J];农村科学实验;2017年07期
10 罗文坚;;早期机械通气治疗有机磷农药皮肤接触中毒的疗效分析[J];中国实用医药;2013年28期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 温伟;崔岩;冷斌;张新超;;有机磷农药复合汽油中毒抢救成功一例[A];中华医学会急诊医学分会第十三次全国急诊医学学术年会大会论文集[C];2010年
2 温伟;;有机磷农药复合中毒12例临床分析[A];中华医学会急诊医学分会第十三次全国急诊医学学术年会大会论文集[C];2010年
3 陈振霞;;口服有机磷农药自杀的抢救及护理[A];危重病人监测、急救技术与基础护理暨21世纪护理理念发展与资源开发学术交流会论文汇编[C];2001年
4 沈莉;田英;戴斐;冯易;;经口暴露有机磷农药致小鼠IL-2免疫因子水平变化初探[A];上海市预防医学会第二届学术年会论文汇编[C];2006年
5 马继平;肖容辉;吕丽莉;;固相萃取-气相色谱-质谱联用测定水中有机磷农药[A];中国有机质谱学第十四届全国学术大会会议论文集[C];2007年
6 张大帅;李晨;吴迪;张小朋;于长江;林强;史载锋;;南渡江水域中有机磷农药的检测[A];2017中国环境科学学会科学与技术年会论文集(第四卷)[C];2017年
7 李英;姜小莹;冯喜兰;荆瑞俊;张裕平;梁新红;田孟魁;;碳纳米管顶空固相微萃取气相色谱测定黄瓜中有机磷农药[A];第二十届全国色谱学术报告会及仪器展览会论文集(第三分册)[C];2015年
8 李采薇;翁祖辉;;有机磷农药达马松对雄鼠之内分泌干扰活性[A];中国毒理学会第三届中青年学者科技论坛暨2011年全国前列腺药理毒理学研讨会论文集[C];2011年
9 何家坤;;有机磷农药急性故意中毒病理变化与临床联系[A];面向二十一世纪的生物医学体视学和军事病理学论文摘要汇编[C];2000年
10 沈莉;田英;戴斐;冯易;;经口暴露有机磷农药致小鼠IL-2水平变化初探[A];上海市预防医学会第二届学术年会论文汇编[C];2006年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 山东科技报 科技网记者 李一凡;山农大新技术实现有机磷农药多残留快速检测[N];山东科技报;2017年
2 中化化肥高级顾问 中国农业大学教授 肖悦岩;有机磷农药不能起到叶面肥的作用[N];农民日报;2011年
3 黄显斌 唐明山;当心!蔬菜水果农药超标[N];中国中医药报;2004年
4 北京解放军302医院叶文华;蔬菜水果农药超标危害大[N];科技日报;2002年
5 中化化肥高级顾问 中国农业大学教授 肖悦岩;有机磷农药无叶面肥作用[N];农资导报;2011年
6 记者  范建;毕赤酵母能“吃掉”多种有机磷农药[N];科技日报;2006年
7 刘晴;有机磷农药降解酶制剂[N];农村医药报(汉);2006年
8 周铮;我国研制成功"有机磷农药降解酶制剂"[N];农民日报;2006年
9 本报记者 胡其峰;有机磷农药降解酶制剂即将产业化[N];光明日报;2006年
10 丛秀明;有机磷农药降解酶制剂制成[N];中国化工报;2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 赵凤春;基于噬菌体展示技术的有机磷农药多残留免疫分析研究[D];山东农业大学;2017年
2 孙运光;乐果毒性效应与M受体的研究[D];复旦大学;2003年
3 徐悦华;纳米二氧化钛光催化降解有机磷农药的研究[D];华南理工大学;2001年
4 龚春雨;有机磷农药—敌敌畏的发育生殖毒性及其机制的实验研究[D];四川大学;2006年
5 匡兴亚;长期接触有机磷农药对健康的影响[D];复旦大学;2006年
6 吴强恩;兴奋性氨基酸递质系统在乐果神经毒性中的作用[D];复旦大学;2007年
7 文一;有机磷农药的联合毒性及其毒理学机理研究[D];中国农业科学院;2008年
8 南京熙;蔬菜中有机磷农药快速检测方法的建立及农药残留风险研究[D];延边大学;2015年
9 于贞;三种海洋滤食动物对有机磷农药的反应及降解[D];大连理工大学;2011年
10 李兵;家蚕和野桑蚕对有机磷农药抗性的研究[D];苏州大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 SIDIKI COULIBALY;有机磷农药对马里农业的神经毒性:“毒死蜱在棉花地区的发言毒性和小鼠行为分析”[D];华中师范大学;2018年
2 阿锡他;光催化和均相沉淀复合技术处理有机磷废水[D];浙江大学;2018年
3 刘运清;基于金纳米棒的有机磷农药等离子体ELISA方法的建立[D];吉林大学;2018年
4 殷昭婷;高效液相色谱法测定水体中的有机磷农药[D];东北大学;2015年
5 刘秋蕊;基于量子点标记仿生免疫分析检测有机磷农药的方法研究[D];山东农业大学;2018年
6 张晓帅;广谱有机磷农药单克隆抗体、单链抗体的制备及免疫检测技术研究[D];兰州大学;2018年
7 郑琦;有机磷在铁氧化物上的吸附/水解及其影响机制[D];内蒙古大学;2018年
8 李德青;基于毛细管电泳技术的有机磷农药新型检测方法研究[D];山东农业大学;2017年
9 王龙琦;一株降解有机磷农药细菌的分离与鉴定[D];青岛大学;2014年
10 康纪婷;有机磷农药草甘膦降解菌的筛选、分离及其鉴定[D];四川农业大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026