收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

生物素葡聚糖胺观测周围神经局部轴突运输的实验研究

王东生  
【摘要】:一、本研究的目的、意义及拟要解决的问题 由于周围神经损伤后不能早期通过运动及感觉检查或电生理检查来判断伤情及术后恢复的程度,为此,一些作者通过周围神经轴突新生中本身代谢的特点探索了一些方法。在目前所进行的研究中,如何在形态学上较为直观地观察周围神经局部轴突运输的,国内外文献尚未见报导尚未见报导。同时不同程度的神经损伤,其轴突运输的恢复程度或时间是否有某种规律性尚不明确。生物素葡聚糖胺(BDA)是近年来所发现的一种非常有效的双向运输的神经示踪剂。本实验应用神经示踪剂BDA研究局部观察周围神经轴突运输的可行性,同时研究几种不同程度神经损伤修复后的示踪剂轴突运输的恢复程度及规律性,为神经损伤后的早期诊断和判断手术后的转归提供了一种确实有效的方法,同时为研究周围神经轴浆流的运输提供了一种方法学。 二、材料和方法 1.健康成年白兔4支随机分为2组,麻醉后显露左侧坐骨神经主干,然后分别于坐骨结节远侧2.0cm处用显微镊子给予急性压迫,另一组于坐骨结节远侧2.0cm处用1-0丝线结扎1分钟。两组动物分别于术后第二天取左侧损伤处神经标本进行坐骨神经损伤模型的大体观察及病理检查。 2.健康成年白兔24只随机分为6组,每组4只,麻醉后显露双侧坐骨神经,1至5组于坐骨结节远侧2cm处用微量注射器注射不同浓度、剂量的BDA及生理盐水,1、4、5组右侧坐骨神经于膝部坐骨神经分出腓总神经处近端切断,2、3组双侧切断,近侧断端用4-0线结扎。第6组右 WP=57 侧坐骨神经也于膝部切断,于近侧断端辗挫0.5cm,于断端进针注射试剂,进针深度为0.5cm。各组动物分别于术后6-48小时再次深麻醉、灌注固定。注毕立即取出标本,标本经漂洗、剪除鞘膜外结缔组织、后固定、移入30%蔗糖沉底后,每支神经相隔1cm跳跃性切取标本,标本冰冻切片。神经组织切片在阿维丁-辣根过氧化物酶溶液中孵育、在PBS液中漂洗,然后分别经 DAB显色及FITC标记,用于光镜及共聚焦显微镜观察。 3.健康成年白兔50只按手术方法的不同随机分组,各组动物10只。动物麻醉后显露左侧坐骨神经、胫神经及腓总神经。然后,①于坐骨结节远侧2.0cm处用显微镊子给予急性压迫(1组);②于坐骨结节远侧2.0cm处用1-0丝线结扎1分钟(2组);③于坐骨结节远侧2.0cm处用显微剪刀剪断形成V度损伤,无创缝合神经外膜(3组)。④于坐骨结节远2.0cm处向远侧用显微剪刀剪取长度分别为0.5cm和1.0cm神经后原位缝合(4、5组)。分别于术后1、2、3、4、6周再次麻醉动物,显露左侧坐骨神经、胫神经及腓总神经,观察损伤神经其外径及色泽。左侧坐骨神经干自损伤处远侧3cm处于腓总神经分出之前切断并用4-0线双结扎,于神经损伤近侧2.0cm处分别注射10%BDA溶液1μl。分别于注射试剂12小时后深麻醉、灌注固定、取标本、后固定、移入蔗糖沉底。取标本冰冻切片,进一步处理后用于光镜下及共聚焦显微镜的观察。 三、结果 1.坐骨神经损伤模型:(1) 急性压迫损伤模型其损伤介于Sunderland I度至II度损伤之间。(2) 坐骨神经用丝线结扎者损伤介于Sunderland III度至IV度损伤之间。 2.BDA用于正常周围神经局部轴突运输的观察:(1)光镜观察:BDA注射点标记阳性的神经纤维呈褐紫色标记,髓鞘染色,轴突亦染色,髓鞘与轴突界限明显。对照组无阳性标记的神经纤维。BDA注射点远侧及近侧1cm、2cm无明显的轴突阳性染色纤维。局部注射10%BDA之坐骨神经远端切断结扎处于注射试剂后6小时即可见阳性标记的神经纤维,其轴 WP=58 突着色明显。至48小时其观察结果类似。(2)共聚焦显微镜观察:在BDA注射点,示踪剂分布的范围位于轴突、髓鞘、神经被膜。对照组观察不到荧光标记的神经纤维。BDA注射点远侧及近侧1cm、2cm看不到轴突的荧光标记。注射10%BDA之坐骨神经,其远端切断结扎处注射BDA后6小时即可发现有荧光物质的积聚,主要位于轴突且标记明显。(3)BDA 注射浓度为0.1%的坐骨神经,无论是通过组织化学方法还是通过共聚焦显微镜的观察,均未发现有阳性标记的神经纤维。 3.坐骨神经不同损伤后的观察:(1)大体观察:坐骨神经急性压迫组术后神经外形正常。丝线结扎组、V度损伤以及自体神经移植的坐骨神经损伤处稍粗大,远侧神经干略细,色泽及弹性正常。神经损伤处之神经干与周围组织有不同程度的组织粘连。(2)光镜观察:急性压迫损伤后一周时,在神经切断结扎近侧可见到标记阳性的神经纤维。说明此种损伤至少在损伤后一周时其轴突运输未受明显影响。其它神经损伤术后一周时,于损伤处可见到标记阳性的神经纤维,远侧切断结扎处未见阳性染色。说明伤后一周时示踪剂的轴突运输于损伤处中断,从而引起损伤处示踪剂的积聚。二周时,急性压迫损伤模型的情况同前,其它各组标本于损伤处近侧仍可看到标记阳性的神经纤维,同时神经移植组中于移植的坐骨神经内亦可观察到阳性标记,说明此处有示踪剂的积聚。坐骨神经远侧未发现阳性标记。第三周及以后,所有坐骨神经于远侧切断结扎处均能发现某一局部较密集阳性标记的神经纤维,一些标本损伤处仍有标记阳性的神经纤维。说明此时轴突运输已明确恢复,同时在原损伤处,部分神经纤维轴突运


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 王占友,何峥,刘琰,沙儒,石玉秀;游离锌离子轴突运输的实验研究[J];中国组织化学与细胞化学杂志;2003年02期
2 许健,徐敢熊,汪泽厚,糜建红;在动物活体和死后神经断端使用HRP对神经细胞标记情况的比较—光镜和电镜观察[J];第三军医大学学报;1987年04期
3 王东生;孙洪辉;王心蕊;路来金;;生物素葡聚糖胺观测周围神经局部轴突运输的实验研究[J];中华实验外科杂志;2006年02期
4 王正敏;;面神经变性和再生神经生物学[耳显微外科2007版(七)][J];中国眼耳鼻喉科杂志;2009年02期
5 ;神经退化性疾病与蛋白转运有关[J];当代医学;2006年07期
6 赵维彦;路来金;梁丽荣;;周围神经再生研究方法的进展[J];中国矫形外科杂志;2008年14期
7 ;组织胚胎学[J];中国医学文摘(基础医学);2004年02期
8 邓秋琼;刘金华;;神经微丝与视神经病变[J];中国实用眼科杂志;2006年07期
9 肖飞;罗焕敏;;淀粉样前体蛋白结构和功能的研究进展[J];中国老年学杂志;2009年23期
10 覃盛麟;;神经生长因子及其他神经营养因子研究的新进展[J];广西医科大学学报;1987年03期
11 姚静;;非酶糖基化终末产物在糖尿病神经病变中的作用[J];中国眼耳鼻喉科杂志;2004年02期
12 刘训言;孙涛;周天华;;细胞质动力蛋白与神经退行性疾病的关系[J];细胞生物学杂志;2009年01期
13 杨青峰;神经微丝的结构、性质及其在肿瘤病理诊断中的应用[J];重庆医科大学学报;1992年01期
14 王占友,石玉秀;神经生长因子与运动神经再生[J];解剖科学进展;1997年02期
15 吴晓慧,冯亮;神经纤维丝与先天性巨结肠症[J];实用临床医学;2003年04期
16 张霞,支爱华,刘儒林,程秀臻;酒精中毒性周围神经病[J];中国临床康复;2005年05期
17 郑景晨;龚小花;;氧化应激与糖尿病神经病变及其对策[J];实用糖尿病杂志;2007年03期
18 韩威威;易继平;江泓;唐北沙;;转基因果蝇模型与多聚谷氨酰胺疾病[J];现代生物医学进展;2009年18期
19 朱卫国;;还精补脑的科学探索[J];中国性科学;2010年01期
20 朱榆红;铅中毒与肌萎缩侧素硬化[J];国外医学.神经病学神经外科学分册;1999年05期
中国重要会议论文全文数据库 前4条
1 陈娟;冯友梅;王建枝;;骨架蛋白异常磷酸化对神经细丝轴突运输的影响及其机制研究[A];湖北省暨武汉生物化学与分子生物学学会第八届会员代表大会和第十五次学术年会论文摘要汇编[C];2004年
2 陈娟;周洁;冯友梅;;实时动态观察谷氨酸诱导的NFM过度磷酸化对神经细丝轴突运输的影响[A];湖北省暨武汉市生物化学与分子生物学学会第八届第十七次学术年会论文汇编[C];2007年
3 王桂荣;石崧;高晨;张宝云;田婵;董辰方;周瑞敏;李晓丽;陈操;韩俊;董小平;;感染羊瘙痒因子263K和139A仓鼠脑组织中tau、磷酸化tau、GSK3β和β-tubulin变化的研究[A];第二届全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2008年
4 于胜波;宫瑾;迟彦艳;张健飞;郑楠;隋鸿锦;;Aβ引起大鼠海马自噬体异常及其轴突运输障碍[A];中国解剖学会2011年年会论文文摘汇编[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王东生;生物素葡聚糖胺观测周围神经局部轴突运输的实验研究[D];吉林大学;2004年
2 杨细飞;辅酶Q10对携带突变的PS-1的老年转基因鼠β-淀粉样肽和tau蛋白磷酸化的影响及机制的探讨[D];华中科技大学;2007年
3 张毅博;庆大霉素鼓室内注射后在脑干前庭与听觉中枢的分布和损伤的研究[D];复旦大学;2011年
4 朱铃强;糖原合酶激酶3在阿尔茨海默病发病中的作用及干预措施探讨[D];华中科技大学;2007年
5 李永平;复合神经动作电位对损伤神经的定量研究[D];复旦大学;2011年
6 崔蕾;HAP1在肌萎缩侧索硬化患者外周血淋巴细胞的表达及意义[D];中南大学;2013年
7 段珊;JIP 3介导TrkB受体顺轴突转运及增强BDNF引发的信号通路激活的功能研究[D];山东大学;2011年
8 汪海滨;成年小鼠坐骨神经雪旺细胞体外培养的实验研究[D];南方医科大学;2013年
9 阙军;FK506通过减少瘢痕形成促进周围神经再生的作用及机制研究[D];南京医科大学;2012年
10 王涛;嗅鞘细胞和支链氨基酸对视神经损伤的修复作用[D];第四军医大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王玥;锌离子在交感干的轴突运输以及锌缺乏对交感干结构影响的研究[D];中国医科大学;2008年
2 尹贻鑫;伪狂犬病毒沿神经元细胞轴突运输的初步研究[D];华中农业大学;2013年
3 李莉;运动训练对慢性酒精中毒大鼠坐骨神经超微结构变化及腓肠肌电生理的影响[D];延边大学;2006年
4 周学武;局部应用细胞膜促融剂聚乙二醇对神经损伤修复后远端变性和再生的影响[D];华中科技大学;2013年
5 袁海君;微管相关蛋白-2在实验性糖尿病大鼠模型脑皮质中的表达[D];河北医科大学;2011年
6 韩克;甲状腺激素和神经生长因子联合应用对大鼠坐骨神经再生和功能恢复的影响[D];郑州大学;2013年
7 王雄昌;脊神经交叉吻合重建大鼠直肠功能的研究[D];南华大学;2013年
8 孙翔;预制神经对脊髓前角运动神经元影响的观察[D];天津医科大学;2013年
9 袁之琳;推拿对大鼠坐骨神经损伤后NTFs的影响[D];北京中医药大学;2011年
10 韦景斌;推拿干预对周围神经损伤大鼠脊髓背角中NTFs表达变化的研究[D];北京中医药大学;2011年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978