收藏本站
《吉林大学》 2004年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

绿脓杆菌外毒素A-黄体生成激素释放激素融合蛋白注射剂治疗宫颈癌的实验研究

向梅  
【摘要】:传统治疗癌症的方法是外科手术、放射疗法和化学疗法单独或结合进行治疗,但是肿瘤复发率和死亡率较高,而且在治疗过程中副作用很大,病人遭受极大痛苦。重组毒素是最近几年发展起来的新型抗癌药物,能定向对某些癌细胞产生特异性的杀灭能力,而且又不损害或极少损害正常体细胞的导向抗癌药物。目前,利用基因工程药物治疗癌症的方法已成为继手术、放疗和化疗之后的第四种癌症治疗方法,也是目前世界上发展比较迅速的一门技术。LHRH-PE40是通过融合蛋白技术生产的由绿脓杆菌外毒素(PE40)和黄体激素释放激素(LHRH)组成的嵌合蛋白。某些肿瘤细胞表面过多表达LHRH受体,通过LHRH将PE40靶向地带到肿瘤细胞表面,从而达到杀伤肿瘤细胞的目的。对正常组织没有或很少损伤。本实验目的是观察LHRH-PE40对宫颈癌Hela细胞系生长的影响及与各种病理型宫颈癌的结合能力,从而验证LHRH-PE40的肿瘤目标性,找出LHRH-PE40的适应病理类型,并进一步观察LHRH-PE40对大鼠的毒副作用,为其临床应用提供理论依据。 1,本研究首先用体外细胞培养技术观察绿脓杆菌外毒素A –黄体生成激素释放激素重组毒素注射剂(LHRH-PE40)对宫颈癌Hela细胞系生长的影响。细胞毒性实验的检测结果表明,LHRH-PE40对Hela细胞活性的抑制作用呈剂量和时间依赖性,通过量效曲线和时效曲线可以看出,LHRH-PE40的最小有效剂量为0.625μg/ml;最佳作用时间为加药后48-72h, 半数致死浓度为0.969μg/ml。因此我们选择1μg/ml的条件,首先观察LHRH-PE40对Hela细胞增殖和细胞凋亡指标及细胞凋亡率的影响,发现用药后癌细胞中的Ki-67阳性细胞(用药前80%,用药后42%)及Bcl-2阳性细胞(用药前66%,用药后43%)比率均下降,凋亡细胞比率增加 WP=84 (由0增加到3.7%),提示LHRH-PE40作用后癌细胞增殖活动受到抑制,而细胞凋亡活动加强。本研究中细胞周期流式细胞仪结果分析也证明,LHRH-PE40浓度为2.2μg/ml时,光镜下虽然有40%外观正常的细胞,但流式细胞仪下均为细胞碎片,不能检测到细胞。在1.0μg/ml浓度下,细胞的G0/G1期细胞比率增加15.21%;S期细胞变化不大,而G2/M期减少38.28%。这说明LHRH-PE40影响癌细胞蛋白的合成的同时可促进肿瘤细胞凋亡,进而抑制癌细胞的增殖。药物对癌细胞生长的阻断发生在G0/G1期,并且由S期向G2/M期转化受阻。 2, 本实验中发现正常的宫颈结缔组织、鳞状上皮、卵巢均未发现LHRH-PE40药物的结合,子宫内膜和输卵管内膜、子宫肌层有LHRH-PE40结合,说明宫颈结缔组织、鳞状上皮、卵巢组织无LHRH受体,子宫内膜及输卵管内膜、子宫肌层有一定浓度的LHRH受体。宫颈癌组织荧光表达率92%,弱阳性及阴性表达病例中,高分化鳞状细胞癌占75%,中低分化鳞状细胞癌占25%, 两者差异显著(p0.05)。 中强阳性表达病例中,高分化鳞状细胞癌仅占14%,中低分化鳞状细胞癌占86%,两者差异显著(p0.05)。3例强阳性表达病例均为高分化腺癌。由此可见,高分化鳞状细胞癌对LHRH-PE40不是很敏感,中低分化的鳞状细胞癌对LHRH-PE40敏感率86%,对LHRH-PE40最敏感的是子宫颈腺癌。 3,(1) 设定LHRH-PE40浓度不变为0.5μg/ml,随着LHRH的竞争浓度与LHRH-PE40摩尔数之比由100/1、250/1、增加到500/1,OD值逐渐增大,细胞毒性的效果逐渐减弱。当LHRH/LHRH-PE40达到500/1时肿瘤细胞表面的LHRH受体饱和,即使加入更多的LHRH,LHRH的竞争浓度,与LHRH-PE40摩尔数之比达750/1,OD值与500/1时的OD值接近,曲线于500/1后持平。(2)用免疫荧光法对荧光强度最强的高分化腺癌进行LHRH的竞争性抑制试验。加入LHRH竞争后,荧光强度较仅加LHRH-PE40明显减弱。通过上诉两个竞争性抑制试验,说明LHRH-PE40确实是通过与细胞膜上的LHRH受体结合而起作用的。 4,。LHRH-PE40对大鼠毒性病理损伤与给药剂量密切相关,25、50μg/kg的剂量未引起明显的毒性损伤,因此50μg/kg为安全剂量。150μg/kg剂量引起动物病理损伤较轻,该剂量为中毒剂量。300μg/kg给药后出现严重的中毒损伤,为致死剂量。LHRH-PE40对大鼠毒性病理试验发现试验中途死亡大鼠的多器官出现病变,按其病变严重程度其毒性靶器官依次为肺、肝、睾丸、肾上腺、胸腺、淋巴结、肾、脾、骨髓。 WP=85 综上所述,LHRH-PE40可与宫颈癌细胞上的LHRH受体特异性结合,并靶向性杀灭癌细胞;未被杀灭的细胞被启动细胞凋亡程序,药物对癌细胞生长的阻断发生在G0/G1期,癌细胞由S期向G2/M期转化受阻。LHRH-PE40对宫颈癌细胞活性的抑制作用呈剂量和时间依赖性。生殖系统组织除子宫、输卵管内膜、子宫肌层外与LHRH-PE40没有结合能力。中低分化型宫颈癌及腺癌对LHRH-PE40敏感,尤其是腺癌与LHRH-PE40结合能力强于鳞状细胞癌。LHRH-PE40填补了宫颈腺癌目前无敏感药物的空白,它能否改善宫颈腺癌患者的预后及提高5年生存率,还有待大量的临床实验。大鼠试验证实,一定量的 LHRH-PE40对脑肝肾及骨髓等脏器无不良影响。LHRH-PE40是一种很有前途的导向抗肿瘤药物。宫颈癌各组织类型的LHRH受体mRNA含量还有待进一步的试验证实,从而找出LHRH-PE40治疗宫颈癌的适应范围。
【学位授予单位】:吉林大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R737.33

手机知网App
【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 张茜;重组免疫毒素LHRH-PE40融合蛋白对卵巢癌细胞增殖与凋亡的影响[D];吉林大学;2010年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前5条
1 赵刚,龚守良,岳瑛,朱平;人类促性腺激素释放激素受体在垂体外正常组织和癌组织的分布[J];吉林大学学报(医学版);2002年04期
2 赵刚,龚守良,朱平;融合蛋白LHRH-PE40与癌细胞表面LHRH受体结合的特性[J];吉林大学学报(医学版);2003年01期
3 顾军,周颖奇,褚云宏;那法瑞林对人乳腺癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用[J];第二军医大学学报;1999年04期
4 张金山,黄威权,张远强,黄高升;肝细胞性肝癌组织中GnRH及其受体的免疫组织化学定位[J];第四军医大学学报;1998年02期
5 张金山,姚兵,黄威权,黄高升,张远强,补永安,刘都户;LHRH类似物对体外培养肝癌细胞增殖阻抑作用的实验研究[J];医学研究生学报;2002年05期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 赵刚,龚守良,岳瑛,朱平;人类促性腺激素释放激素受体在垂体外正常组织和癌组织的分布[J];吉林大学学报(医学版);2002年04期
2 赵刚,龚守良,朱平;融合蛋白LHRH-PE40与癌细胞表面LHRH受体结合的特性[J];吉林大学学报(医学版);2003年01期
3 岳瑛,祖莉莉,于晓伟,冯书章,朱平,李荷莲;Stx2A-LHRH重组质粒的构建及分析[J];吉林大学学报(医学版);2003年02期
4 姜洋;宋燕;张颖超;吴广谋;张国利;朱平;;LHRH-PE40对人结肠癌细胞增殖抑制和凋亡的影响[J];吉林大学学报(医学版);2006年04期
5 李忆东,刘宇健,卢建;地塞米松对人肝癌细胞系酪氨酸转氨酶mRNA表达的影响[J];第二军医大学学报;2002年02期
6 王宏飞;杨晴来;左正龙;申旭霁;赵新锋;郑晓晖;;用α_(1A)-肾上腺素受体色谱研究哌嗪类化合物的生物亲和作用[J];第二军医大学学报;2011年01期
7 李敏;吴小华;徐翠清;闫萍;韩晶;霍密英;;GnRHⅠ,GnRHⅡ及其受体在人卵巢恶性上皮性肿瘤细胞中的表达及意义[J];第四军医大学学报;2008年24期
8 陈曦;韩春光;胡明;刘超;刘永学;;CHO-hGPR91工程细胞株的构建及鉴定[J];国际药学研究杂志;2012年06期
9 刘丽娟;阎锡新;;糖皮质激素治疗急性肺损伤的疗效与其受体表达水平的关系[J];河北医科大学学报;2006年01期
10 李洪利,黄倢,周丽;亲和层析技术在现代蛋白质研究中的应用及新发展[J];海洋湖沼通报;2005年03期
中国重要会议论文全文数据库 前3条
1 田振军;李红艳;张志琪;马新庭;;川芎嗪对心肌细胞钙的影响及其作用机制研究[A];2006第六届中国药学会学术年会论文集[C];2006年
2 鲁海燕;李易非;廖予菲;李倩;赵新锋;王世祥;郑晓晖;;β_2-肾上腺素受体生物色谱模型的建立及初步应用[A];全国生物医药色谱学术交流会(2010景德镇)论文集[C];2010年
3 白月霞;韩春光;胡明;刘永学;;GPR40配基对胰岛β细胞胰岛素分泌功能的影响[A];第十四届中国科协年会第17分会场:环境危害与健康防护研讨会论文集[C];2012年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 邓益锋;雌二醇、来曲唑对青年蛋鸡髓质骨形成的影响及其机理研究[D];南京农业大学;2008年
2 陈秀霞;雌、雄激素对蛋鸡髓质骨形成和成骨细胞作用机理的研究[D];南京农业大学;2009年
3 杜奕奇;幽门螺杆菌VacA毒素的纯化及其作用机理研究[D];第二军医大学;2001年
4 陈蕾;大鼠胃平滑肌细胞、壁细胞GnRH及其受体的研究[D];第四军医大学;2002年
5 姜洋;重组免疫毒素LHRH-PE40治疗胃癌及相关机制的研究[D];吉林大学;2006年
6 张金山;GnRH及其受体在人肝癌组织中的表达及GnRH类似物对肝癌细胞增殖抑制作用的实验研究[D];第四军医大学;1998年
7 张丽;前列腺素E_2调控胆管癌细胞生长的信号转导通路研究[D];南京医科大学;2007年
8 钟巧青;高密度脂蛋白对炎性脂肪细胞功能的影响[D];中南大学;2007年
9 王喜军;雌激素对大鼠咀嚼肌功能状态影响的体外研究[D];四川大学;2007年
10 郝智慧;新型β_2肾上腺素受体激动剂SPFF对映异构体抗哮喘作用及作用机理的比较研究[D];沈阳药科大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 陈小平;主动免疫重组绵羊β_2-肾上腺素受体对大鼠生长及血清生化指标的影响[D];新疆农业大学;2010年
2 苏华;β_2-肾上腺素受体的纯化及其与药物相互作用研究[D];西北大学;2011年
3 韦露莎;β_2-肾上腺素受体色谱用于药物结合常数—结构参数间的关系研究[D];西北大学;2011年
4 王桂珍;亲和层析技术的研究及应用[D];暨南大学;2011年
5 韩冰;阿勒泰绵羊脂肪及肌肉组织中肾上腺素能受体mRNA水平的发育性变化规律研究[D];新疆农业大学;2011年
6 李瑞敏;黑皮素类似物和瑞林类寡肽药物的合成研究[D];天津大学;2010年
7 吕瑞;特异性相互作用毛细管电色谱法筛选中药活性成分[D];重庆大学;2011年
8 钱健;参麦注射液对大鼠离体胸主动脉血管环作用及机制的研究[D];浙江大学;2002年
9 周洁;人甲状腺及乳头状甲状腺癌促性腺激素释放激素及受体的表达研究[D];第四军医大学;2002年
10 郭新珍;大肠癌TGF-β_1、TβRⅡ、CyclinD_1的表达及其与细胞增殖的关系[D];郑州大学;2002年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 赵刚,龚守良,岳瑛,朱平;人类促性腺激素释放激素受体在垂体外正常组织和癌组织的分布[J];吉林大学学报(医学版);2002年04期
2 赵刚,龚守良,朱平;融合蛋白LHRH-PE40与癌细胞表面LHRH受体结合的特性[J];吉林大学学报(医学版);2003年01期
3 姜洋;宋燕;张颖超;吴广谋;张国利;朱平;;LHRH-PE40对人结肠癌细胞增殖抑制和凋亡的影响[J];吉林大学学报(医学版);2006年04期
4 张金山,姚兵,黄威权,黄高升,张远强,补永安,刘都户;LHRH类似物对体外培养肝癌细胞增殖阻抑作用的实验研究[J];医学研究生学报;2002年05期
5 管睿,崔英;LHRH类似物在卵巢癌治疗中的应用[J];国外医学.妇幼保健分册;2003年06期
6 吴广谋,朱平,李俊植,张国利,李树民,何畅;LHRH-PE40注射剂对体外培养人肿瘤细胞系的细胞毒作用[J];中国生物制品学杂志;2001年04期
7 吴广谋;张国利;岳玉环;何畅;孟锐奇;李俊植;朱平;;LHRH-PE40的免疫原性及其抗体对细胞毒作用的影响[J];中国生物制品学杂志;2006年03期
8 郑艳军;郑艳霞;张国利;;促黄体激素释放激素及其靶向毒素[J];中国生物制品学杂志;2007年10期
9 赵刚,龚守良,朱平;LHRH-PE40与正常肝组织和肝癌细胞表面LHRH受体结合特性的比较研究[J];西安交通大学学报(医学版);2003年03期
10 邓欣;冯昱;王姿;朱丽娜;周洪伟;陈航;刘莹;朱平;张国利;李亘松;;重组毒素LHRH-PE40与A549细胞表面LHRH受体结合的特异性及其细胞毒性[J];中国药理学通报;2009年05期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 姜洋;重组免疫毒素LHRH-PE40治疗胃癌及相关机制的研究[D];吉林大学;2006年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前3条
1 赵刚,龚守良,岳瑛,朱平;人类促性腺激素释放激素受体在垂体外正常组织和癌组织的分布[J];吉林大学学报(医学版);2002年04期
2 张金山,黄威权,张远强,黄高升;肝细胞性肝癌组织中GnRH及其受体的免疫组织化学定位[J];第四军医大学学报;1998年02期
3 张金山,黄高升,黄威权,张远强;促性腺激素释放素及其受体在人肝癌组织中的分布及意义[J];中华医学杂志;1998年05期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 赵梅,张丽珠,马魁榕;大剂量黄体生成激素释放激素(LRH)滴鼻抑制排卵的初步临床试验观察[J];北京大学学报(医学版);1985年01期
2 蒋庆岳;;长期采用促黄体释放激素来抑制血清黄体生成激素和睾丸素以治疗前列腺癌无效[J];国际泌尿系统杂志;1985年05期
3 叶碧绿,吕恽怡,王秀娣;黄体生成激素释放激素刺激试验在闭经诊断上的意义[J];温州医学院学报;1994年02期
4 梁洪蒙;促性腺激素释放激素拮抗剂在体外受精中的应用[J];国外医学.计划生育分册;2000年02期
5 陈丽珠,雷晓慧,李彬,缪鹰;系统性红斑狼疮患者血清泌乳素与性激素水平的关系[J];华北煤炭医学院学报;2001年04期
6 陈丽珠,李彬,应国祥,缪鹰;系统性红斑狼疮患者血清泌乳素与性激素水平的关系[J];江西医学检验;2003年05期
7 柴丽萍,孙彦,王本才,张丽萍,李波;子宫切除妇女血清FSH、LH、E_2、T水平变化的研究[J];华北煤炭医学院学报;2003年05期
8 刘伶;;血清FSH及LH检测对诊断男性少精症的临床意义[J];淮海医药;2009年02期
9 阎国来;;合成黄体生成激素释放因子在临床方面的应用[J];国外医学.妇产科学分册;1974年04期
10 谷菲,孙俐俐,李玉霞,张太平,胡自正;催产素对大鼠血清黄体生成激素及排卵功能的影响[J];生殖医学杂志;1998年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 艾启俊;于庆华;张红星;张馨如;瓢金港;;PCR技术检测编码绿脓杆菌外毒素A基因[A];中国食品科学技术学会第五届年会暨第四届东西方食品业高层论坛论文摘要集[C];2007年
2 李远友;林浩然;;虎纹蛙促性腺激素及其释放激素的分泌特性与调节机理研究[A];中国动物科学研究——中国动物学会第十四届会员代表大会及中国动物学会65周年年会论文集[C];1999年
3 林浩然;;促性腺激素释放激素(GnRH)结构与功能及其受体的进化发展[A];中国生理学会第五届比较生理学学术会议论文汇编[C];2004年
4 龚瑾;丁莎;;理气活血法治疗围绝经期综合征的临床研究[A];全国第七届中西医结合妇产科学术会议论文及摘要集[C];2007年
5 何宗宝;胡玲;沈晓明;;电针不同组穴对围绝经期模型大鼠生殖内分泌免疫网络功能调节作用的研究[A];中国针灸学会2009学术年会论文集(上集)[C];2009年
6 卢小玲;程泾;;化瘀消瘤方加GnRH-a治疗子宫肌瘤致不孕30例临床分析[A];全国第六届中西医结合妇产科学术会议论文及摘要集[C];2002年
7 刘平;马彩虹;乔杰;陈贵安;李美芝;;促性腺激素释放激素拮抗剂西曲瑞克在体外受精——胚胎移植中的应用[A];第八次全国妇产科学学术会议论文汇编[C];2004年
8 石和荣;张为民;刘晓春;林浩然;柯浩;;生长抑素抑制剂-半胱胺和促黄体素释放激素类似物对黄鳍鲷(Sparus latus)生长激素分泌的影响:在体研究[A];中国海洋湖沼学会鱼类学分会、中国动物学会鱼类学分会2004年学术研讨会摘要汇编[C];2004年
9 严灿;徐志伟;吴丽丽;高丽;王文竹;敖海清;;加味四逆散对慢性心理应激大鼠下丘脑CRH及环核苷酸系统的影响[A];全国中西医结合基础理论学术研讨会论文集[C];2004年
10 虞培玲;李肇特;;大鼠腺垂体ACTH细胞分泌方式的免疫电镜研究[A];第九次全国电子显微学会议论文摘要集(Ⅰ)[C];1996年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;排卵期肚子痛无需治疗[N];保健时报;2005年
2 本报记者 孙春艳;十年艰辛造一“弹”[N];吉林日报;2005年
3 唐步顺;警惕减食性闭经[N];中国矿业报;2000年
4 张诗雨;亚泰:“领跑” 药业的先锋[N];中国经济时报;2005年
5 马扬 庞为;我国研制出低毒高效抗癌生物导弹[N];医药经济报;2005年
6 河北农业大学动物科技学院 桑润滋;做好奶牛卵巢囊肿的诊治[N];河北科技报;2007年
7 ;治巧克力囊肿哪种药物损伤少?[N];健康时报;2006年
8 ;排卵试纸阳性是排卵正常吗?[N];健康时报;2008年
9 戚炜云;加拿大发布《食品药品法规》修正案[N];中国国门时报;2006年
10 玉华;有碍儿童长高的四个新因素[N];卫生与生活报;2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 向梅;绿脓杆菌外毒素A-黄体生成激素释放激素融合蛋白注射剂治疗宫颈癌的实验研究[D];吉林大学;2004年
2 蒲若蕾;大鼠胰腺促性腺激素释放激素及其受体的研究[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
3 胡晓梅;TAT-PE融合蛋白用于肿瘤导向治疗的实验研究[D];第三军医大学;2005年
4 张云东;创伤应激早期CRH对大鼠下丘脑CRH分泌的超短反馈调节机制研究[D];第三军医大学;2002年
5 赵宏;促皮质激素释放激素及性腺外芳香化在电针调整大鼠下丘脑—垂体—卵巢轴功能中的作用[D];复旦大学;2004年
6 姚晓;脑内催乳素释放肽在电针调整去卵巢大鼠下丘脑—垂体—卵巢轴中的作用[D];复旦大学;2004年
7 许宁一;低氧等应激对大鼠GH-IGF-I轴的作用及其调控机制[D];浙江大学;2004年
8 王炜芳;密度感知信号系统在铜绿假单胞菌致大鼠肺部感染中的作用[D];中国人民解放军军医进修学院;2004年
9 孙锦平;针刺足三里穴对正常及应激性溃疡大鼠神经内分泌影响的研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2004年
10 桑霞;疏肝泻火法治疗多囊卵巢综合征的临床及实验研究[D];广州中医药大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王晓云;绿脓杆菌外毒素A对严重烧伤大鼠损伤效应的实验研究[D];第二军医大学;2001年
2 李雅林;羊绿脓杆菌及其主要致病因子研究[D];山东农业大学;2002年
3 潘芹芹;促黄体素释放激素单克隆抗体的研制及去势疫苗相关动物实验[D];南京农业大学;2003年
4 万忠海;重组PEA受体结合区亚单位基因在大肠杆菌中的表达及实验免疫研究[D];中国人民解放军军需大学;2001年
5 罗立廷;两种鲶形目鱼类性成熟前后体内GnRH及其相关激素的免疫细胞化学和原位杂交研究[D];华中农业大学;2003年
6 宁洪艳;胎盘促肾上腺皮质激素释放激素在人类分娩中的作用及机制研究[D];第二军医大学;2001年
7 刘庆元;人肝癌细胞GnRH及其受体的研究[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
8 朱杰青;促黄体素释放激素在大肠杆菌中的融合表达及抗原性鉴定[D];南京农业大学;2000年
9 龚光明;基因工程去势疫苗的抗原性、抗体动态及安全性[D];南京农业大学;2001年
10 金丹;妊娠期疾病与血浆促肾上腺皮质激素释放激素关系的临床研究[D];第二军医大学;2002年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026