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《吉林大学》 2004年
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局灶性缺血性脑卒中星形胶质细胞缝隙连接功能的变化及其意义:体外体内研究

邓方  
【摘要】:脑血管病是威胁人类健康的三大疾病之一,在很多国家,它都是致死的主要原因和成人致残的首要原因。其中,缺血性脑卒中又是脑血管病的最常见者,约占70%。由于其生存者致残率高,给患者个人及家庭和社会带来沉重负担。但迄今为止,卒中的药物治疗并没有多大进展。为了开发有临床价值的神经保护因子,加深对梗死灶进展机理的理解已引起了学者们的高度重视。有证据表明星形胶质细胞与神经元之间存在密切的关系。星形胶质细胞间通过缝隙连接构成功能性合胞体。缝隙连接对于分子量小于1.2kDa的物质具有相对自由的通透性,支持星形胶质细胞间扩散代谢产物及空间缓冲钾离子等重要功能离子。这个功能性细胞间网络的存在引起学术界的关注,也为解释半影区神经元的迟发性死亡和梗死灶的扩展提供了多种假说。在此背景上,本实验着手研究星形胶质细胞的缝隙连接功能在局灶性脑梗死中的变化规律、调控机理及其功能变化对梗死体积扩展的影响意义,希望能对探寻新的治疗手段或方案有所裨益。 第一部分  文献综述 通过总结国内外的研究资料,本论文就星形胶质细胞缝隙连接的研究现状、星形胶质细胞的体外培养方法和星形胶质细胞缝隙连接与缺血脑卒中的关系三个方面进行了综述。 第二部分  体外实验 WP=105 为了能够更方便地研究星形胶质细胞缝隙连接的功能及变化,进行了大鼠成层星形胶质细胞的纯化培养,并抽取缺血性卒中的构成要素——缺氧,建立了缺氧/再复氧模型。以24h内Wistar大乳鼠大脑皮质为原料,采用Manthorp连续传代法,体外纯化培养星形胶质细胞。培养基成份为含20%小牛血清的DMEM。培养环境为95%空气5%CO2,饱和湿度,37℃。细胞经连续传代3~4代后,通过对培养细胞进行形态学观察和GFAP免疫细胞化学鉴定,证明本实验取得的培养物为大鼠皮层星形胶质细胞,细胞纯度约为95%。随后采用缺氧孵箱法,将培养达80%融合的细胞置于N289%/CO25%/O27%环境中缺氧24h/再复氧6h,建立星形胶质细胞缺氧/再复氧模型。细胞形态学观察显示:缺氧期细胞改变不明显,但再复氧后细胞出现损伤表现,并随时间延长愈益突出。这一结果证明体外纯化培养星形胶质细胞的缺氧/再复氧模型建立成功。 为了研究星形胶质细胞缝隙连接功能的变化,本实验进行了培养细胞的染料偶联研究。配制5%荧光黄染料,采取直接显微注射的方法,在每个培养皿内随机注射至少10个细胞,在最后一个细胞注射结束后20min于荧光显微镜下观察计数偶联发生率和偶联系数。结果表明:体外培养星形胶质细胞的缝隙连接在缺氧/再复氧条件下仍保持开放;缺氧对缝隙连接功能没有明显影响;但再复氧后星形胶质细胞GJ功能显著降低,至再复氧3h达最低值,仅为正常对照组水平的1/4,在再复氧6h,染料偶联系数出现回升,提示缝隙连接功能的这一变化可能为一过性的改变。 为了初步探讨其变化的机理,本实验采用Western blot法,观察体外培养星形胶质细胞缺氧/再复氧模型中星形胶质细胞缝隙连接的结构基础主体——Cx43的变化。结果表明各组在蛋白水平上均没有明显变化。由此缺氧/再复氧早期GJ功能下降并不是缝隙连接蛋白表达水平的变化,而很可能是其功能水平的改变。其可能的机理包括缝隙连接蛋白构象变化(特别是磷酸化水平的改变)及蛋白的内化等。 第三部分  体内实验 本实验采用线栓法制备大鼠MCAO/R模型。在实验过程中,对Longa的方法进行了改进。通过观察成模后大鼠的症状体征,同时应用神经病学评分、TTC染色计算梗死灶体积等方法对模型进行了评价。结果表明:改进后的方法简便 WP=106 易行,模型成功率高,稳定性较好。本实验制作的动物模型与缺血性脑卒中的临床表现和病理改变相似,认为其确为研究局灶性缺血性脑卒中较为理想的模型。 随后进行了缝隙连接阻断剂辛醇的在体干预对照实验。本节实验设6组,其中假手术组和对照组(缺血24h组和缺血6h/再灌注6h组)于术前30min腹腔内注射生理盐水,辛醇组术前30min腹腔内注射辛醇溶液,DMSO组为缺血6h/再灌注6h组+术前30腹腔内注射等体积DMSO溶剂。除假手术组外,各组动物在术后均出现明显的神经功能缺损表现,但辛醇组与手术对照组在缺血和缺血/再灌注条件下神经功能缺损程度没有区别。各组动物在时间点取脑,进行梗死灶TTC染色,结果经图像分析软件处理。辛醇干预组与对照组比较,梗死体积明显减小。DMSO组对与缺血6h/再灌注6h组比较,梗死体积无差异,表明DMSO溶剂对实验指标没有干扰。本项研究表明,缝隙连接阻断剂辛醇有效地减小了大鼠大脑中动脉缺血/再灌注损伤的梗死体积,减小程度接近30%。这一结果提示缝隙连接的功能影响了缺血性卒中梗死体积的扩展过程。在体外实验中观察到的星形胶质细胞缝隙连接功能的降低可能是机体的一个保护性反应。抑制缝隙连接的功能可以减少缺血中心区的有害物质向半影区传播,对挽救半影区细胞可能具有一定的积极意义,或可在缺血性脑卒中的病理进程中起到神经保护作用。加深对缝隙连接调控机理的研究,尝试抑制缝隙连接的有效方法,也许能为缺血性脑卒中的治疗开启新的思路。
【学位授予单位】:吉林大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R743.3

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【引证文献】
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1 朱丽萍;Cx43及Cx43-hemichannel在大鼠全脑缺血再灌注损伤中的作用[D];山东大学;2012年
【参考文献】
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1 伍亚民,马海涵,廖维宏;大鼠星形胶质细胞和少突胶质细胞的纯化培养与鉴定[J];创伤外科杂志;2000年04期
2 黄其林,蔡文琴,张可成;反义GFAP逆转录病毒表达载体的构建及其对反应性星形胶质细胞的作用[J];解剖学报;2000年02期
3 许汉鹏,梁哲,鞠躬;脊髓混合性胶质细胞机械损伤后的形态变化[J];解剖学报;1999年01期
4 孙双历,严振国;大鼠脊髓星形胶质细胞培养方法[J];解剖学杂志;2001年05期
5 赵兰娟,龚蕴贞,林维芬,胡涛,张咏南;柯萨奇B_3病毒感染体外培养神经元和星形胶质细胞的研究[J];中国临床神经科学;2001年02期
6 杨忠,蔡文琴,何家全;大胶质细胞混合培养与分离培养的方法评价[J];免疫学杂志;2001年05期
7 徐俊卿,朱敏,陈良为;星形胶质细胞和神经生长因子对新生大鼠脑内P物质受体阳性神经元存活与突起生长的影响──体外培养研究[J];神经解剖学杂志;1998年04期
8 薛庆善,郭畹华;大鼠大脑皮质星形胶质细胞的体外培养及其促神经突起生长作用研究[J];神经解剖学杂志;1996年02期
9 郭碗华;大白鼠胼胝体神经胶质细胞的体外培养[J];中山医学院学报;1980年01期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘洋,沈守荣,张熙纯,邹益友,彭重恩;细胞连接蛋白基因在胃癌中的表达研究[J];癌症;1999年05期
2 付东平;;通心络胶囊的临床应用[J];白求恩军医学院学报;2006年04期
3 陈华,杨守峰,杨雪琴;癌平口服液含药血清对人胃癌细胞分化的影响[J];中国医药学报;2002年10期
4 王秀文;张立霞;杨成;潘晶晶;王红;;电针对体外培养星形胶质细胞机械性损伤后反应性胶质化的影响[J];滨州医学院学报;2010年04期
5 黄其林,张云福,张可成;GFAP与星形胶质细胞瘤恶性程度的关系[J];第三军医大学学报;2005年11期
6 张惠琴,辛晓燕,陈必良,赵三纯,马向东;足月妊娠子宫肌间隙连接cx43 mRNA及其蛋白的表达意义[J];第四军医大学学报;1999年09期
7 黄卫东,费舟,章翔,王西玲;体外培养大鼠脑皮层神经元机械性损伤模型的建立[J];第四军医大学学报;2004年04期
8 黄扬,陈丽英,高美钦;间隙连接蛋白Cx32在胃癌和胃癌前病变的表达及意义[J];福建医科大学学报;2002年03期
9 何军,张益鹄;脑外伤后的星形胶质细胞反应[J];法律与医学杂志;2001年01期
10 郭畹华;;组织培养技术的发展及应用[J];广东解剖学通报;1984年Z1期
中国重要会议论文全文数据库 前2条
1 何军;张益鹄;;脑外伤后的星形胶质细胞反应[A];中国法医学最新科研与实践(一)——全国第六次法医学术交流会论文精选[C];2000年
2 姚庆华;郭勇;;细胞间隙连接通讯、连接蛋白与肿瘤的抑制[A];浙江省中西医结合学会肿瘤专业委员会第六次学术年会暨省级继续教育学习班资料汇编[C];2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 易陈菊;胶质细胞缝隙连接通讯与局灶性脑缺血后海马损伤关系的研究[D];华中科技大学;2011年
2 吴文斌;实验性脑内血肿吸收机制及其干预研究[D];重庆医科大学;2002年
3 许斌;细胞连接蛋白基因Connexin26、Connexin32和Connexin43mRNA在肝癌细胞中的表达及全反式维甲酸对其表达和功能的影响[D];浙江大学;2004年
4 曹利群;CD81在正常、脱离及再复位大鼠视网膜中的表达[D];中国人民解放军军医进修学院;2004年
5 蔡正旭;由CX32和CX43组成的缝隙连接在癫痫发病中的作用及调控机制的实验研究[D];吉林大学;2004年
6 宋岳涛;培养大鼠星形胶质细胞对拟脑缺血再灌注损伤神经元的作用和抗呆Ⅰ号的影响[D];北京中医药大学;2004年
7 宁章勇;朊蛋白基因表达与传染性海绵状脑病发生发展关系的研究[D];中国农业大学;2005年
8 兰莉;戊甲氮点燃癫癎大鼠海马胶质细胞的反应及其与神经元相互关系的研究[D];第四军医大学;2005年
9 康治臣;局灶性脑缺血耐受与星形胶质细胞反应分子机制研究[D];吉林大学;2005年
10 张永兴;Connexin43和E-cadherin在肺癌中表达及相关性的研究[D];中国医科大学;2005年
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1 万云云;SV40T基因转染大鼠脑皮质星形胶质细胞[D];泰山医学院;2007年
2 张建祥;氧糖剥夺诱导的胶质疤痕离体模型的构建[D];浙江大学;2011年
3 张文;奎宁对青霉素致痫大鼠海马Cx36与Pxl表达变化的影响研究[D];中南大学;2011年
4 贾济;大麻素CB2受体激动剂预处理在调节小胶质细胞活化和损伤中的作用[D];第四军医大学;2011年
5 王杏芬;大鼠心室肌缝隙连接蛋白增龄性变化对室性心律失常的影响[D];华中科技大学;2011年
6 林国华;白细胞介素-2对心肌电学和机械特性的影响[D];浙江大学;2001年
7 李秀珍;工频磁场对星形胶质细胞GJIC的影响[D];浙江大学;2001年
8 张欣文;间隙连接蛋白CX43在滋养细胞疾病中的表达及其临床价值[D];第四军医大学;2001年
9 王哲;Nm23-H1基因对人肺癌细胞骨架和生物学行为的影响[D];四川大学;2003年
10 姚庆华;复方藤梨根制剂调节PG细胞间隙连接通讯功能及Cx43基因表达的研究[D];浙江中医学院;2003年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前6条
1 孙丽;李云;朱美蓉;亓蕾;;Cystamine对大鼠脑缺血再灌注后tTG表达的影响[J];山东大学学报(医学版);2010年07期
2 宋东莉;刘晓宇;刘雯;左伋;;Connexin 43在细胞死亡中的作用[J];生命科学;2010年03期
3 覃琳;熊英;卓平辉;阳倩;;新生大鼠脑白质损害时神经胶质细胞凋亡与Fas、caspase-3蛋白的表达变化[J];西安交通大学学报(医学版);2007年03期
4 林洁英;林霓阳;黄广;;Cx43在缺氧缺血新生大鼠脑组织中的表达及意义[J];中国现代医生;2007年08期
5 吴旭,王保捷,张国华,汪德文,杨丽,刘长胜;大鼠脑损伤后caspase-3表达的时间规律性研究[J];中国医科大学学报;2004年04期
6 王琪;;缝隙连接蛋白43研究进展[J];中西医结合研究;2010年06期
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 高殿帅;在成年具有神经生发功能的大鼠脑室下区形态学研究[D];首都医科大学;2003年
2 韩冬;RNAi抑制Cx43基因表达对星形胶质细胞缺氧/再复氧后凋亡的影响[D];吉林大学;2009年
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1 王颖;半通道开放对缺血再灌注海马神经元活性的影响[D];浙江大学;2007年
2 许洛伊;抗凝和抗血小板聚集对大鼠全脑缺血/复灌损伤后脑血流紊乱的调节作用研究[D];浙江大学;2010年
3 齐新燕;星形胶质细胞缝隙连接对大鼠脑缺血再灌注后Caspase-3表达的影响[D];吉林大学;2005年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 王福庄,丁爱石,魏文,张双喜;NGF对新生大鼠隔神经元的神经营养作用[J];神经解剖学杂志;1994年04期
2 郭畹华;大脑皮质神经组织体外培养的初步观察[J];新医学;1973年01期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 段丽;申晶;袁华;张萍;曹荣;饶志仁;;高渗刺激后大鼠视上核星形胶质细胞和神经元的反应及其相互关系的光、电镜研究[J];神经科学通报;2005年01期
2 刘煜;李柱一;林宏;苗建亭;李宏增;雷革胜;宿长军;;实验性自身免疫性脑脊髓炎神经元、胶质细胞及其细胞缝隙连接的超微结构改变[J];中国神经免疫学和神经病学杂志;2009年01期
3 刘煜;宿长军;李宏增;李柱一;林宏;;侧脑室注射甘珀酸后豚鼠EAE模型脑白质内胶质细胞形态学改变[J];中国神经免疫学和神经病学杂志;2009年05期
4 廖磊;刘广益;;缝隙连接与癫痫[J];中国老年保健医学;2011年02期
5 姚伯昕;蔡若蔚;;缝隙连接与癫痫[J];海南医学;2009年06期
6 黄建敏,郑金瓯;缝隙连接与癫痫的关系[J];国外医学.神经病学神经外科学分册;2004年03期
7 闫秀梅;李光乾;;缝隙连接与癫痫[J];医学综述;2007年06期
8 梁智勇,史景泉;缝隙连接细胞间通讯与肿瘤的关系[J];临床与实验病理学杂志;2001年05期
9 李铮,王益鑫;细胞间缝隙连接的信息交流与勃起功能障碍[J];中国男科学杂志;2003年05期
10 韩冬;薛晶;邓方;张颖;杨艺敏;冯加纯;;应用激光共聚焦显微镜研究脑缺血再灌注后缝隙连接重分布[J];中风与神经疾病杂志;2009年02期
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1 黄建敏;黄瑞雅;李雪斌;唐雄林;吴小飞;;辛醇对红藻氨酸致痫大鼠的癫痫敏感性及GFAP免疫活性的影响[A];第十一届全国神经病学学术会议论文汇编[C];2008年
2 饶志仁;段丽;江山;熊鹰飞;曹荣;杨乐;孙晓龙;;高(低)渗刺激下大鼠视上核内星形胶质细胞对神经元活动的调节机制[A];中国生理学会消化内分泌生殖代谢生理专业委员会2011年消化内分泌生殖学术会议论文摘要汇编[C];2011年
3 徐剑文;王玮;康仲涵;张更;周琳瑛;;低氧对小鼠星形胶质细胞超微结构的影响[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年
4 魏为;;星形胶质细胞与视网膜盘状瘢痕[A];中国眼底病论坛·全国眼底病专题学术研讨会论文汇编[C];2008年
5 邓方;冯加纯;饶明俐;;缺氧/再复氧下Wistar大鼠星形胶质细胞缝隙连接胞间通讯的变化规律[A];第十一届全国神经病学学术会议论文汇编[C];2008年
6 周晓燕;邬力祥;刘发益;曹莉;;大鼠脑星形胶质细胞的培养方法[A];湖南省生理科学会新世纪学术年会论文摘要汇编[C];2002年
7 白龙梅;李学忠;杨亚萍;曹碧茵;刘春风;;脂多糖可调节星形胶质细胞Toll样受体表达,对细胞增殖具有双重性[A];第十一届全国神经病学学术会议论文汇编[C];2008年
8 武明明;孙晓川;;APOE多态性与星形胶质细胞创伤后兴奋性氨基酸的相关性研究[A];中华医学会神经外科学分会第九次学术会议论文汇编[C];2010年
9 韩钊;田继沙;张红霞;;2-(2-苯并呋喃基)-2-咪唑啉对星形胶质细胞糖氧剥夺损伤的保护及脂质过氧化作用[A];中华医学会第十三次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2010年
10 邓平;;星形胶质细胞及其标志蛋白GFAP在脑损伤时间推断中的研究进展[A];第五次全国法医学术交流会论文集[C];1996年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 刘霞;脑内星形胶质细胞在实验室培育成功[N];科技日报;2011年
2 胡德荣;胶质细胞溶酶体具有分泌ATP的功能[N];中国医药报;2007年
3 记者 刘海英;星形胶质细胞可调节呼吸强度[N];科技日报;2010年
4 吴一福;黄芪可调节星形胶质细胞“时间模式”[N];中国医药报;2005年
5 潇潇;胶质细胞有望成“候补”[N];大众科技报;2007年
6 实习记者 王远白;八年真爱救活绝症妻子[N];贵阳日报;2010年
7 刘霞;德科学家找到使脑细胞再生的方法[N];科技日报;2007年
8 梦鹿;使用特殊调节蛋白脑细胞可再生[N];医药经济报;2007年
9 记者 郑焕斌;霍金所患疾病病因找到[N];科技日报;2007年
10 汪敏华;大脑星形胶质细胞有两种新功能[N];解放日报;2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 邓方;局灶性缺血性脑卒中星形胶质细胞缝隙连接功能的变化及其意义:体外体内研究[D];吉林大学;2004年
2 孙建栋;额前皮质区缝隙连接功能障碍与动物抑郁样行为的关系研究[D];北京协和医学院;2012年
3 董淑英;缝隙连接在脑缺血后处理中的作用及可能机制[D];安徽医科大学;2013年
4 倪明科;缝隙连接的改变在药物诱导的室性心律失常发生中的作用[D];华中科技大学;2010年
5 冉建华;AQP9在脑水肿形成中的作用及其表达调控[D];重庆医科大学;2005年
6 王昭金;大脑不同部位对同种异体甲状旁腺移植的影响[D];中国协和医科大学;1996年
7 孙涛;脊髓星形胶质细胞参与神经病理性疼痛调制的实验研究[D];华中科技大学;2007年
8 李建华;TRPC3在脂多糖诱导星形胶质细胞活化中作用[D];南方医科大学;2010年
9 张巍;小胶质细胞和星形胶质细胞在多巴胺能神经元变性和保护中的可塑性变化[D];大连医科大学;2004年
10 李爱群;阿朴吗啡促进多巴胺能神经元存活的机理研究[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2006年
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1 叶新运;缝隙连接通道改变参与脑血管痉挛的实验研究[D];南昌大学;2010年
2 王少彧;缝隙连接通讯在氧化胁迫导致PC12细胞损伤中的作用及机制[D];兰州大学;2010年
3 孙燕;O-2A祖细胞分化和两型星形胶质细胞抗原表达差异的研究[D];苏州大学;2003年
4 张允;锂-匹罗卡品癫痫大鼠小脑中胶质细胞反应性观察及银杏叶提取物干预研究[D];大连医科大学;2005年
5 颜晓慧;缺氧对大鼠星形胶质细胞AQP4表达的影响[D];第一军医大学;2005年
6 胡泽岚;成年大鼠脊髓白质中NgR蛋白的分布研究[D];第四军医大学;2004年
7 欧阳柳;缝隙连接在人骨髓间充质干细胞向软骨分化过程中的作用[D];华中科技大学;2010年
8 万明辉;星形胶质细胞基因表达谱差异及其对损伤反应的研究[D];苏州大学;2004年
9 杨晓文;模拟高原环境大脑皮质及血脑屏障的病理变化与AQP4的相关性实验研究[D];第三军医大学;2005年
10 颜因;大鼠局灶脑缺血/再灌注后星形胶质细胞的反应及星形胶质细胞炎症介质的表达[D];重庆医科大学;2007年
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