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《吉林大学》 2004年
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MUC1肿瘤抗原和口蹄疫病毒抗体检测方法的建立

孙琳  
【摘要】:免疫学鉴定、诊断和防治之所以能广泛应用和行之有效就是基于免疫应答和免疫反应具有特异性。抗原抗体的特异性(specificity)是指物质之间的相互吻合的针对性。抗原抗体反应的特异性可通过不同实验得以证明。基于对传统检测方法的安全性考虑,采用了现代分子生物学手段来研制基因工程重组蛋白质抗原,一方面,可直接表达具有抗原决定作用的蛋白,安全性和可操作性强;另一方面,基因工程重组技术使大量获得目的蛋白成为可能,因此可以较容易的得到大量相关蛋白来满足实验和科研的需要。 近20年来,随着生活环境的恶化,如空气中有毒气体含量的增多、食物中的农药、添加剂的超标应用等,使得人们更易患各种恶性肿瘤。 为了更好的预防和治疗乳腺肿瘤,需要有一个更加合理的途径。肿瘤的早期诊断和肿瘤免疫治疗很大程度上依赖于特异性肿瘤抗原的发现。近年来发现musins粘蛋白是与多种肿瘤相关的抗原。目前,人们将注意力投向制备各种抗MUC1的单克隆抗体上,希望能预防和治疗MUC1高表达的肿瘤,如乳腺癌,胃癌,卵巢癌,子宫内腺癌,肝癌等。 MUC1 /Y是MUC1的一种同种型(ISOFORM),虽然属于MUC1家族跨膜段、胞浆段相同但缺失胞外段的重复序列。于MUC1/REP相比,在乳腺癌中的表达具有肿瘤特异性。它具有膜受体的特征,可通过ras信号传导通路,使细胞发生恶性转化,据相关报道, MUC1 /Y可使乳腺动物模型的致瘤性增加。因此, MUC1/Y可能作为一种膜表面的重要分子参与细胞的恶性转化过程,是一种潜在的肿瘤诊断和生物学治疗的靶分子。由于目前尚无商品化的MUC1/Y特异性抗体,使其生物学功能的研究受到了很大的限制。 在已有工作基础上,克隆表达了MUC1 /Y的胞外段,并进一步制备了多抗。所选用的融合表达载体为pET32a ,即pET系列表达载体中的一种,另外还选用Cpn10作为融合蛋白伴侣在pET系列表达载体中表达,表达 WP=67 融合蛋白可实现蛋白的高效可溶性表达且便于纯化和鉴定。融合蛋白免疫家兔制备的多抗具有较高的效价,组化试验鉴定表明,制备的 MUC1 /Y多克隆抗体能检测乳癌组织上的MUC1及其同种型抗原,因此,可用于进一步的相关实验研究。 口蹄疫(foot and mouth disease, FMD)是由口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus, FMDV)引起的偶蹄动物感染的一种急性高度传染性疫病,被国际兽疫局列为A类动物传染病之首。如何早期预防口蹄疫的传播流行一直是摆在人们面前的重要任务。口蹄疫的诊断就是证实组织或液体样品中是否存在口蹄疫病毒抗原或核酸,检测其特异性抗体也可作诊断依据。 根据口蹄疫病毒的特点, 口蹄疫病毒外壳蛋白VP1是主要免疫原性抗原,VP1的140-160氨基酸所构成的“环”暴露在病毒表面,这一“环”结构与羧基末端共同组成主要的抗原位点。用分离的该“环”合成肽能诱导产生高水平中和抗体,并发现该“环”内的R-G-D序列具有高度保守性,可与病毒和细胞表面受体结合,与进入并感染细胞有关。利用Cpn10-VP1融合蛋白作为抗原,建立了检测口蹄疫病毒感染的血清抗体的间接ELISA方法,所建立的间接ELISA法可以检测口蹄疫病毒感染的动物,对预防口蹄疫流行和疫苗是否发挥免疫作用提供参考依据,我们将进一步对大批猪的血清进行检测,确定合适的阳性和阴性参考值,将该方法以试剂盒的方式进行推广,以代替目前所采用的病毒抗原包被的检测方法。
【学位授予单位】:吉林大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R446.6

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