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食物中毒菌五联融合毒素基因的表达及免疫特性研究

孟宪梅  
【摘要】:以常见食物中毒菌O157∶H7 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和肉毒梭菌所产毒素为研究对象,克隆了三种细菌的五个毒素基因片段;将五个毒素基因片段采用一定的linker 序列(G-P-G-P-G)进行串联(Hc-VT1B-SEA-VT2B-SEB),通过PCR 逐步扩增出了融合毒素RHDS-5 基因全长序列2937bp,并定向克隆到表达载体pET-22b(+)的NcoI 和XhoI 位点之间,构建了重组质粒RHDS-5-22b,且在表达宿主菌E.coli BL21 中得到有效表达(9.90%),融合蛋白分子量112.369kDa;37℃诱导表达蛋白以可溶性(5.295%)和包涵体(4.694%)两种形式存在;25℃过夜诱导全部是可溶性表达;将两种形式的表达蛋白经过初步纯化,分别免疫吉戎獭兔制备血清抗体, ELISA 和琼脂扩散试验表明,融合毒素免疫吉戎獭兔后产生抗五种毒素的抗体,且具有良好的特异性,对毒素的检测具有较高的敏感性。证明融合毒素保留了五种天然毒素的抗原性,同样条件下进行多基因串联至少可达3000bp 能在原核载体表达,至少包含4 个linker 而不影响串联基因的抗原特性,表达产物可诱导机体产生抗多种毒素抗体。为融合毒素的进一步应用及建立食物中毒菌毒素广谱、快速的检测方法奠定了基础。


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