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《吉林大学》 2006年
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肿瘤转移相关基因Tiam1 mRNA TaqMan实时荧光定量PCR标准曲线的构建

刘作侠  
【摘要】:转移是恶性肿瘤生物学特征之一,是恶性肿瘤患者死亡的主要原因。其基因表达调控与肿瘤的分子生物学行为及复发、预后的相关性并不是很清楚,因此肿瘤转移的研究成为当前的一个重点。肿瘤转移是涉及多基因变化的一系列复杂过程,T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tiam1)与多种肿瘤转移相关,被称为肿瘤转移相关基因,对于这个基因的研究以往都在定性或半定量的水平上,在阐述某些问题的本质和极微量的拷贝检测时受到局限,所以用一种更准确、更敏感的检测方法成为这个基因研究的一个热点课题。本实验旨在构建TaqMan荧光定量PCR检测Tiam1 mRNA重组质粒标准品和标准曲线,建立TaqMan荧光定量PCR检测Tiam1 mRNA的方法学,为准确定量检测各种组织中Tiam1 mRNA的量值水平奠定基础。实验过程中首先对Tiam1基因进行序列分析,设计出一对引物和一条TaqMan荧光探针。采用RT-PCR的方法从胃癌组织中提取总RNA制备Tiam1基因的目的片断,产物回收纯化后与pGEM-T Easy Vector连接成重组质粒,转化到大肠杆菌DH5α中,联合应用蓝白筛选、酶切、PCR、基因序列分析法鉴定重组质粒。根据重组质粒的OD值换算出重组质粒的拷贝数,梯度稀释后作为Tiam1 mRNA实时荧光定量PCR的标准品。通过本课题研究成功构建了肿瘤转移相关基因Tiam1 mRNA实时荧光定量PCR的质粒标准品;以100-107/μl不同稀释水平的标准品用荧光定量PCR进行扩增,出现了荧光值的增长,实时荧光定量PCR仪绘制出标准曲线,统计学分析显示Ct值与标准品浓度的对数存在良好线性关系;荧光定量PCR产物电泳结果显示实时荧光定量PCR技术与普通PCR技术相比,不仅可以定量,更可以检测出普通PCR不能检测出来的基因拷贝,可以用于更加微小病变
【学位授予单位】:吉林大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:R730.4

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【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
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【参考文献】
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【共引文献】
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8 关宝杰;Tiam1 mRNA量值水平及与胃癌生物学行为关系的研究[D];吉林大学;2007年
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【同被引文献】
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【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前2条
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1 姜颖;变形链球菌粘附相关基因表达调控与粘附关系的研究[D];四川大学;2007年
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