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《吉林大学》 2006年
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抗CD3人鼠嵌合抗体的克隆及其在毕赤酵母中的表达

罗琳  
【摘要】: 自1986年美国FDA正式批准抗CD3单抗作为临床上治疗肾移植排斥反应的新药上市以来,抗CD3单抗以其具有激活和抑制人T细胞双向功能的特点,在各种器官移植排斥反应、肿瘤及自身免疫性疾病治疗中显示出其广阔的应用前景。但目前临床上应用的CD3单抗主要是鼠源性的,鼠源单抗在人体内应用时产生排斥反应、半衰期短、活性下降、异性蛋白反应等问题,严重限制其在临床治疗中的广泛应用。因此,近年来对于人源性的抗CD3抗体的研究成为热点。大多数抗CD3抗体基因构建后主要选用大肠杆菌和哺乳动物细胞为表达体系,这些表达体系都存在许多缺点。 酵母表达体系具备易于操作,遗传背景清楚,生产成本低等原核生物的特点,又具有真核生物的折叠、分泌机制,可以完成真核生物特异的蛋白酶解、折叠、糖基化等翻译后修饰过程,且生长速度快,培养成分简单,能适应工业化生产的需要。本研究选择酵母偏爱密码子同义替换鼠源性抗CD3重链可变区基因(Vh),与人源性重链恒定区(Ch)基因连接,构建完整的人鼠嵌合抗体。将构建的完整的人鼠嵌合表达载体转化X-33毕赤酵母,建立兼具原核系统良好操作性和真核系统后加工性的重组抗CD3毕赤酵母真核表达体系。通过ELISA和MTT的鉴定,筛选出高表达重组抗CD3的酵母菌株。结果表明,本研究正确构建了重组抗CD3抗体毕赤酵母真核表达体系,经甲醇诱导能够分泌具有活性的重组抗CD3抗体蛋白,相对分子量为55kD;重组抗CD3抗体的表达具有累积效应,产量在一段时间内随表达时间延长而增加。本研究为进一步用毕赤酵母作为生物反应器大规模生产抗CD3抗体提供了实验依据。
【学位授予单位】:吉林大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:Q786;R392

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 杨凡,施伟民,陆震宇,孙向华,于德华;抗CD3单抗促进肿瘤细胞凋亡的研究[J];上海医学;2003年S1期
2 熊冬生,许元富,杨纯正,彭晖,邵晓枫,刘汉芝,韩俊岭,赖增祖,朱祯平;抗CD3/抗CD20双特异双链抗体的生物学活性研究[J];中华微生物学和免疫学杂志;2001年06期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王尚资,黄捷,战文斌,雷质文,俞开康;噬菌体显示技术及其在水生动物病毒学上的应用[J];海洋湖沼通报;2000年02期
2 方瑾,宋今丹;抗人大肠癌单链抗体基因的克隆与表达[J];癌症;2002年07期
3 赵宝华,张莉;基因工程抗体的种类与应用[J];保定师专学报;2001年02期
4 路小龙,张凤英,郭振泉,黄仪秀,朱圣庚;从噬菌体抗体库中淘选人绒毛膜促性腺激素的单链抗体[J];北京大学学报(自然科学版);2002年02期
5 花蓓,施巧芳;硒的免疫功能[J];化学教育;2002年02期
6 沈艺,赵存英;破伤风抗毒素2次脱敏注射法注射220例效果观察[J];护理学杂志;2000年05期
7 葛红,毛宗源;一种新的数据分析方法:人工免疫网络[J];计算机工程与应用;2002年13期
8 余建军,郑锋,孙树栋;一种新的免疫算法[J];计算机工程与应用;2004年23期
9 罗雯,张九东,吴兴安,白文涛;抗汉坦病毒单链抗体双元载体的构建[J];科学技术与工程;2004年11期
10 何启强,杨进波,肖成峰,邬堂春;双抗夹心ELISA法检测血浆HSP70的建立及初步应用[J];环境与职业医学;2004年01期
中国重要会议论文全文数据库 前2条
1 张欣;张春明;;双特异性抗体研究进展及肿瘤治疗中的应用[A];第四届中国核学会省市区“三核”论坛论文集[C];2007年
2 黄宇烽;朱国华;陈德宇;;抗人L-PGDS人-鼠嵌合轻链的真核表达[A];第十届全军检验医学学术会议论文汇编[C];2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 程颖;噬菌体肽库展示技术在肿瘤逃逸相关CD59基因活性位点的筛选及构建中的应用研究[D];青岛大学;2007年
2 董红霖;抗人肝癌基因工程抗体单双价嵌合Fab的构建和在大肠杆菌及毕赤酵母中的表达[D];第四军医大学;2005年
3 赵伟春;应用单克隆抗体评价稻田天敌的捕食作用——稻飞虱和弹尾虫单克隆抗体的制备及其应用[D];浙江大学;2001年
4 覃仁安;鹅不食草挥发油抗炎作用及机理研究[D];成都中医药大学;2001年
5 陈炫;溃给宁合剂治疗溃疡性结肠炎的临床研究[D];成都中医药大学;2001年
6 吴保平;人源性大肠癌自然致敏噬菌体Fab抗体库的构建与筛选[D];第一军医大学;2001年
7 孙建宏;NDV La Sota与V4株对鸡T细胞亚群影响及其F蛋白抗原优势表位的比较研究[D];东北农业大学;2003年
8 邢金良;抗人肝癌基因工程抗体嵌合IgG和嵌合Fab的构建和表达[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
9 傅德才;吡咯吡嗪酮和吡咯噁嗪酮衍生物的合成及抗炎镇痛作用研究[D];沈阳药科大学;2002年
10 方瑾;Ⅰ抗人大肠癌单链抗体基因的构建与表达 Ⅱ抗人大肠癌单链抗体——胞嘧啶脱氨酶融合基因的构建及表达[D];中国医科大学;2001年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李靖;第二抗体对免疫组化染色的影响[D];河北医科大学;2004年
2 严兴;重组人源性抗HBsAg单链抗体在大肠杆菌中的表达、纯化与活性鉴定[D];华南理工大学;2002年
3 乔媛媛;大容量噬菌体抗体库的构建及鉴定[D];中国人民解放军军医进修学院;2005年
4 管海宏;天然抗角蛋白单克隆抗体3B4的多反应性鉴定及其分子机制的初步探讨[D];第四军医大学;2005年
5 陆巍巍;~(188)Re直接标记抗人肝癌单克隆抗体片断HAB18FAB'的研究[D];中国原子能科学研究院;2000年
6 刘怀然;鸡传统性法氏囊病抗独特型抗体疫苗的研究[D];东北农业大学;2000年
7 杜丽;乙酰胆碱酯酶抗体酶的制备及应用研究[D];内蒙古农业大学;2001年
8 牛栋;“火郁发之”法对胃粘膜急性损伤中攻击因子与保护因子调节作用的研究[D];北京中医药大学;2002年
9 钟艳平;抗人erbB2人/鼠嵌合抗体的构建、真核高效表达及治疗卵巢癌的实验研究[D];广西医科大学;2002年
10 张英春;益生菌功能特性及共生性研究[D];东北农业大学;2003年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前3条
1 杨希峰,沈德诚,金宇光,白金芬,汤美华,张金香,卞钟元,陈璋;HI_(47),一种抗人成熟B细胞单克隆抗体制备、鉴定及其生物学特性研究[J];现代免疫学;1990年02期
2 熊冬生,许元富,杨纯正,彭晖,邵晓枫,刘汉芝,韩俊岭,赖增祖,朱祯平;抗CD3/抗CD20双特异双链抗体的生物学活性研究[J];中华微生物学和免疫学杂志;2001年06期
3 沈德诚,杨希峰,杨春瑛,汤美华,张金香,白金芬,孙同哲,段世利,刘汉芝,余鸣,陈辉树,陈璋;抗CD_3单克隆抗体HIT3aⅠ.制备和特异性鉴定[J];中国医学科学院学报;1993年03期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 冉宇靓,孔健,赵泽国,孙立新,遇珑,刘军,杨治华;抗CEA嵌合抗体在CHO细胞中的高效表达[J];免疫学杂志;2000年06期
2 朱志刚,沈关心,朱慧芬,张悦,邵静芳,杨敬;抗CD4人-鼠嵌合抗体的表达和抗增殖效应[J];中华微生物学和免疫学杂志;2002年02期
3 纪渤,王建,杨志,路逵阳;小鼠尾静脉注射~(125)I标记的抗CEA人鼠嵌合抗体rch24的药代动力学研究[J];徐州医学院学报;2005年01期
4 李彪,朱承谟,吴祥甫;抗癌胚抗原嵌合抗体在秋粘虫细胞中的重组与表达[J];上海免疫学杂志;1999年03期
5 王骊丽,韩骅;人-鼠嵌合抗体表达载体的构建和抗人HER2抗体的表达[J];细胞与分子免疫学杂志;2004年03期
6 赵泽国,冉宇靓,刘军,孙立新,陈凤,杨治华,孔健;抗CEA人鼠嵌合F(ah’)_2在昆虫细胞中的表达[J];中国肿瘤生物治疗杂志;1999年03期
7 冉宇靓,孔健,杨治华,孙立新,刘军,陈凤,遇珑;抗CEA抗体可变区基因的克隆及其嵌合抗体的表达[J];实用肿瘤杂志;2001年02期
8 龚奕,刘康达,周铬,薛琼,陈绍亮,汤钊猷;~(131)I-抗HBxAg人/鼠嵌合抗体在裸鼠人肝癌模型定位的初步研究[J];中华核医学杂志;1997年02期
9 赵泽国,冉宇靓,郑蓉,孔健,陈盛祖,遇珑,杨治华;~(188)Re标记CEA嵌合人源化抗体在荷人结肠癌裸鼠的放射免疫显像研究[J];癌症;2002年05期
10 许四宏;;鸡-人嵌合抗体表达载体的构建[J];国际生物制品学杂志;2006年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张雪;张爱华;闭兰;赵亚杰;孙可芳;方志正;;抗人T淋巴细胞CD4人-鼠嵌合抗体真核表达的研究[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年
2 刘兢;李平;程联胜;;抗肿瘤表面抗原P185~(erbB-2)单克隆抗体的工程化嵌合抗体的制备和性质鉴定[A];中国细胞生物学学会医学细胞生物学、免疫细胞生物学和发育生物学专业委员会学术研讨会论文摘要汇编[C];2002年
3 王准;胡洪波;崔莲仙;何维;;γδTCR CDR3嵌合抗体抗肿瘤的初步研究[A];第九届全国肿瘤生物治疗学术会议论文集[C];2006年
4 刘奕;董艳秋;刘兢;;稳定高表达anti-p185嵌合抗体的细胞株的筛选和鉴定[A];中国细胞生物学学会第八届会员代表大会暨学术大会论文摘要集[C];2003年
5 吴炜霖;;人源化抗体的演进发展及应用现状[A];中华医学会第七次全国检验医学学术会议资料汇编[C];2008年
6 樊晓晖;Kopitar-Jerala Natasa;Premzl Ales;Kos Janko;;抗人组织蛋白酶B嵌合抗体的研制及体外抑制组织蛋白酶B活性的试验[A];科技、工程与经济社会协调发展——中国科协第五届青年学术年会论文集[C];2004年
7 程钢;陈永井;孙中文;马震宇;徐耀瑜;胡玲玲;张学光;邱玉华;;抗人CD28鼠-人嵌合抗体的构建及表达[A];中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议论文摘要[C];2006年
8 陈同辛;何振娟;吴圣楣;应大明;朱亚忠;王耀平;;抗CD3抗体诱导的新生儿脐带血淋巴细胞信号传导的研究[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年
9 瞿秋霞;陈成;王勤;陈永井;葛彦;邱玉华;张学光;;抗人CD40人-鼠嵌合抗体在CHO细胞中的表达及其对Daudi细胞增殖抑制的作用[A];中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议论文摘要[C];2006年
10 岳挺;程联胜;刘海波;刘兢;;抗p185c-erbB-2嵌合抗体chA21对荷瘤裸鼠模型的抗癌药效研究[A];第九届全国肿瘤生物治疗学术会议论文集[C];2006年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 北京华经纵横经济信息中心生物医药部;国际抗体治疗药物热点聚焦[N];医药经济报;2005年
2 本报特约撰稿人 李朝;单抗:生物医药发展的主旋律[N];医药经济报;2006年
3 刘扬;国内抗体药物市场——销售金额增长迅速 三资品牌掌控全局[N];中国医药报;2006年
4 熊少宇;生物医药:好戏还在后头[N];中国高新技术产业导报;2001年
5 岳闻业;变化之余 端倪已现[N];中国医药报;2007年
6 闻业;机会:专利多到期 靶标无保护[N];中国医药报;2007年
7 本报记者  赖强;“中国籍”单抗新药集体上阵[N];医药经济报;2007年
8 湖北武汉大学绿洲生物技术有限公司经理 熊少宇;生物医药:新机遇来临[N];科技日报;2001年
9 文来;2010年单克隆抗体市场有望扩三倍[N];中国医药报;2005年
10 驻沪记者 康义瑶;开发生物仿制抗体能解成本之困[N];医药经济报;2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 朱志刚;抗CD45人—鼠嵌合抗体的构建、表达与鉴定[D];南方医科大学;2010年
2 李建民;抗基孔肯亚病毒单克隆抗体人源化及真核细胞高效表达研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年
3 林周;人TNF-α嵌合抗体体外亲和力成熟作用研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年
4 胡洪波;γδT细胞抗原识别机制研究—含γδTCR CDR3δ序列嵌合抗体的构建及其抗原结合特异性和SARS相关冠状病毒B细胞抗原表位的筛选[D];中国协和医科大学;2005年
5 王玉刚;基于计算机辅助分子设计的抗CD20单克隆抗体的改造[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年
6 寇庚;SM5-1单克隆抗体的人源化及其体内外抗肿瘤作用研究[D];第二军医大学;2004年
7 冉宇靓;抗人VEGF165人/鼠嵌合抗体的构建及其真核高效表达[D];中国协和医科大学;1999年
8 赵泽国;结肠癌转移、复发免疫防治的实验研究[D];中国协和医科大学;2001年
9 陈凤;抗人DR5单抗AD5-10诱导肺癌细胞凋亡敏感性的作用及其分子机制的研究[D];中国协和医科大学;2008年
10 李妍妍;鼠源性抗人心肌肌钙蛋白I单克隆抗体人源化改造的初步研究[D];南京医科大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 罗琳;抗CD3人鼠嵌合抗体的克隆及其在毕赤酵母中的表达[D];吉林大学;2006年
2 张晓晓;抗汉坦病毒鼠/人嵌合抗体真核表达载体的构建及表达[D];第四军医大学;2012年
3 张全爱;组织因子人—鼠嵌合抗体制备的研究[D];山西大学;2010年
4 化晓莉;抗人CD40人—鼠嵌合抗体的构建表达及功能的初步研究[D];苏州大学;2010年
5 李洪庆;抗rh-bFGF人/鼠嵌合抗体真核表达载体的构建与表达[D];暨南大学;2004年
6 钟艳平;抗人erbB2人/鼠嵌合抗体的构建、真核高效表达及治疗卵巢癌的实验研究[D];广西医科大学;2002年
7 冯蕾;抗人黑色素瘤嵌合抗体的构建及表达[D];第四军医大学;2005年
8 师明磊;抗CD20嵌合抗体的研制[D];军事医学科学院;2005年
9 李冰;炭疽芽胞杆菌治疗性抗体的初步研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2007年
10 王娟;分泌型IgA嵌合抗体在中国仓鼠细胞中的表达研究[D];陕西师范大学;2011年
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