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激活素受体相互作用蛋白2a全长基因克隆及其与ActRIP1-3的比较研究

崔雪玲  
【摘要】:激活素作为TGF-β超家族的细胞增殖、分化因子,其作用的多面性和组织学特异性,与激活素作用的细胞内信号传导差异有关。在激活素信号传导中,激活素受体相互作用蛋白(Activin receptor-interacting protein,ActRIP)是一组新发现的信号传导蛋白。本研究在克隆新的ActRIP家族蛋白——ActRIP2a基因基础上,进一步比较研究ActRIP2a与ActRIP1-3组织分布、细胞内表达格局以及生物学活性的差异。 本研究克隆了新的激活素受体相互作用蛋白2a(ActRIP2a)全编码基因,cDNA全长1008bp,编码153个氨基酸残基,与ActRIP2仅在编码区第15和99位氨基酸不同,ActRIP2a的PDZ功能区与ActRIP1的蛋白结合功能区PDZ5存在33%同源性,与ActRIP3的ActR Ⅱ结合功能区具有96%同源性,但与ActRIP3的C末端无同源性。哺乳细胞双杂交系统证实ActRIP2a可与ActR ⅡA相互作用,免疫沉淀实验进一步证实ActRIP2a可与ActR ⅡA稳定结合,Pull-down实验结果表明ActRIP2a通过其N末端PDZ样功能区与天然ActR ⅡA相互作用,免疫沉淀实验表明ActRIP2a可以形成同源双聚体蛋白,但与ActRIP2不能构成异源双聚体。 Northern杂交显示ActRIP1、2、3 mRNA表达存在组织学分布上的差异,RT-PCR检测结果显示,ActRIP2a mRNA在大脑组织、垂体、睾丸中表达较高,胰腺、卵巢组织中表达较弱,而在其它组织中未见明显表达;ActRIP1 mRNA在脑干、大脑、小脑、垂体、下丘脑、睾丸、肾上腺组织中有表达,其他组织内未见表达;而sActRIP1(short ActRIP1)在心肌及脾脏组织内未见表达,其他组织均有不同程度表达。ActRIP2及ActRIP3则在多种组织内均有表达。免疫组织化学染色结果也显示,ActRIP2在小鼠各组织几乎均有着色;ActRIP1在肺、胰腺及睾丸的曲精细管内几乎没有染色反应,而在其他组织有不同程度着色;小鼠脑


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