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小鼠釉基质丝氨酸蛋白酶基因敲除载体的构建

余平  
【摘要】: 基因打靶技术是一种定向改变生物活体遗传信息的实验手段。通过对生物活体遗传信息的定向修饰,并使修饰后的遗传信息在生物活体内表达突变的性状,从而来研究基因功能等问题。基因打靶技术的发展是建立在胚胎干细胞技术和同源重组技术成就的基础上,其关键技术是外源基因的导入及整合,其发展经历了四个阶段:实现外源基因的导入、导入的外源基因与内源基因的同源重组定点整合、实现导入的外源基因能组织特异性表达及导入的外源基因在动物发育阶段上的可控表达。应用此项技术已经建立起了数百种基因敲除小鼠模型。基因打靶技术在研究基因功能、人类疾病动物模型的建立及改良动物品系等方面有较大的应用价值。 釉基质丝氨酸蛋白酶(EMSP1)是通过成釉细胞合成并分泌到釉基质中,它的主要作用是将成釉细胞分泌的釉原蛋白分解成可被牙组织吸收和利用的小片段肽或氨基酸,使釉基质蛋白不断被吸收,促进矿物质晶体的生长,使釉质矿化成熟。对EMSP1的研究有助于探明釉质矿化成熟的机制,了解EMSP1基因缺陷与釉质发育不全(amelogenesis imperfecta, AI)的关系,在口腔医学上有较大的理论价值和实际意义。同时,EMSP1也是目前第一个从蛋白质和DNA水平上分离和定性的釉基质蛋白酶。 本课题采用基因克隆技术和基因打靶技术相结合,构建小鼠釉基质丝氨酸蛋白酶1(EMSP1)基因敲除载体,为构建EMSP1基因敲除干细胞及EMSP1基因敲除小鼠疾病模型奠定基础,从而进一步了解EMSP1的生理活性、表达调控及病理意义,为了解EMSP1在牙齿萌发和维护牙周方面的作用提供有力证据。


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