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基于甲病毒复制子的核酸疫苗的构建及实验免疫研究

郑洪玲  
【摘要】: 本研究旨在探讨表达新城疫病毒HN基因和鸡贫血病病毒Apoptin基因的“自杀性”DNA疫苗的抑瘤效应。以新城疫病毒HN基因及鸡贫血病毒Apoptin基因为效应基因,利用真核表达载体pIRESneo和西门利克(Semliki)森林脑炎病毒cDNA复制子为基础构建了pSFV载体,插入目的基因HN和Apoptin,分别构建了两种“自杀性”DNA疫苗,pSFV-HN和pSFV-Apoptin。采用限制性酶切、吖啶橙/溴化乙锭染色结合荧光显微镜观察、Western blot、RT-PCR等方法检测了外源基因的重组和在肿瘤细胞内的表达。结果显示,外源基因已经插入pSFV载体中,且可以在HCT-116细胞中有效表达。采用MTT法和DAPI染色等方法观察了重组质粒转染HCT-116细胞后的抑癌效应和死亡方式。结果显示,重组质粒能够有效抑制肿瘤细胞,并使肿瘤细胞呈现典型的凋亡特征。 本研究复制了C57BL/6小鼠荷H22肿瘤模型,探讨了“自杀性”DNA疫苗的体内抑瘤作用及其诱导的体液和细胞的免疫水平。结果显示,两种“自杀性”DNA疫苗均能有效抑制实体肿瘤的生长,并且能够有效刺激机体产生抗肿瘤免疫反应,为基因工程抗肿瘤治疗性疫苗的研发策略提供了新思路。


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