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《吉林大学》 2007年
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抗奶牛孕酮单克隆抗体的制备及酶联免疫检测方法的建立

冯晓琼  
【摘要】: 奶牛、黄牛发情周期中由卵巢的黄体产生孕酮,分泌入血液、乳汁、唾液、尿液中,浓度在发情期最低,到发情中期因黄体成熟而达最高水平。 本研究以甾体激素孕酮为研究对象,采用琥珀酸酐法活化11ɑ-羟孕酮,碳二亚胺法使其与载体蛋白发生偶联。经两次试验,成功地实现了孕酮此种小分子物质与大分子载体蛋白的偶联,完成了完全抗原(包括免疫抗原和检测抗原)的制备,并进行了免疫学方面的鉴定。按不同的免疫程序,将试验小鼠分组,用免疫抗原免疫小鼠,经效价测定后选择效价较高的一组融合用。 运用经典的PEG融合法,经两次融合,共得到3株单抗,分别是1F6、2A11、2G6。其中1F6为IgG型,其余为IgM型。腹水经ELISA法测定效价达到1︰1×106;1︰1×105;1︰8×104。三株单抗的相对亲和力为:1F62G62A11,分别识别两个以上的抗原位点。 针对单抗特异性强,亲和力高的特点,经酶标记的抗原、未经标记的抗原与单抗发生竞争性酶联免疫反应,用单抗检测抗原,并优化各项检测条件,绘制标准曲线,曲线的工作浓度范围为:0.5~100ng/ml。初步建立了孕酮含量的ELISA检测方法。
【学位授予单位】:吉林大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:S854.43

【引证文献】
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【参考文献】
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【共引文献】
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5 王武军;金颜辉;蔡开珍;;免疫胶体金快速诊断技术在兽医临床诊断中的应用和研究进展[A];福建省科协第五届学术年会卫星会议养猪与畜禽传染病制治学术研讨会论文集[C];2005年
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【同被引文献】
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【二级引证文献】
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【二级参考文献】
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