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金黄色葡萄球菌三联融合毒素的表达及免疫特性研究

王海波  
【摘要】: 以金黄色葡萄球菌肠毒素为研究对象,利用PCR方法分别扩增出金黄色葡萄球菌肠毒素SEA、SEB、SEE全基因片段。将克隆得到的三个毒素基因片段采用柔性的Linker序列(Gly4Ser)进行基因串联(SEA-SEB-SEE),通过PCR延伸法,扩增出了融合毒素基因T,目的基因全长序列2190bp,包括2个Linker序列,并定向克隆到表达质粒pET-28a(+)的EcoR I和XhoI位点之间,构建了重组表达质粒pET-28a(+)-T,且在表达宿主菌E. coli BL21 (DE3)中得到有效表达。表达蛋白主要以包涵体形式存在(表达量为26.4%)。将表达的包涵体蛋白经过纯化,免疫吉戎獭兔制备血清抗体,经ELISA和琼脂扩散试验检测表明,表达的融合毒素T具有较好的抗原性,其抗体能够与三种天然毒素发生免疫反应,与多种非目标菌和毒素不反应,具有较好的特异性。表明多个基因串联可达2190bp仍能在原核载体表达,表达产物可诱导机体产生具有广谱反应特性的抗体。本研究利用融合毒素广谱抗体建立食物中毒菌快速检测方法奠定基础。


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