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《吉林大学》 2007年
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PSI诱导的PC12细胞PD模型的氧化修饰亚蛋白质组学研究

张颖  
【摘要】: 本实验首次采用2D凝胶电泳、质谱鉴定与Westerm blot技术相结合的方法在蛋白酶体抑制剂(PSI)诱导的PC12细胞PD模型中筛选氧化修饰的蛋白质,从氧化蛋白质水平探讨氧化应激在PD发病机制中的作用,为PD的早期诊断和药物治疗提供新线索。 本实验成功地建立了PD细胞模型。在10μM PSI处理PC12细胞24h的实验组中,MTT法检测显示PSI可使PC12细胞的存活率下降至85.46%±1.75,差异有统计学意义(P0.05);吖啶橙和溴化乙啶染色显示凋亡细胞,可见核染色质着明亮绿色并呈斑块状或圆珠状,凋亡百分率为12.41%±3.61,差异有统计学意义(P0.05);HE染色可见细胞浆内嗜酸性包含体的形成。 经ImageMaster 2D Evolution软件对Westerm blot图像及考染的制备胶图像进行分析和统计学处理,与对照组比较实验组有统计学意义的氧化水平显著升高的蛋白点有40个,其中13个蛋白点被MALDI-TOF质谱鉴定出来,它们是eEF-2、TH、CCT、GRP58、ALDH2 precursor、Eno 1蛋白、HSC70及β-actin;有统计学意义的氧化水平显著降低的蛋白点有8个,其中1个蛋白点被质谱鉴定出来,为annexin A7。对照组不存在而实验组存在的氧化蛋白点有2个被质谱鉴定出来,分别是p60蛋白和tubulinβ-15。对照组存在而实验组不存在的氧化蛋白点无一被鉴定出来。本实验首次发现CCT、p60蛋白、eEF-2、ALDH2 precursor及annexin A7发生氧化修饰;首次在PSI处理的PC12细胞PD模型中发现GRP58、tubulinβ-15、β-actin、Eno 1蛋白、HSC70及TH发生了氧化修饰。这些差异表达的氧化蛋白质可能在PSI处理的PC12细胞PD模型中发挥作用;可能为探讨PD中氧化应激的机制及治疗药物的研发提供有价值的线索。
【学位授予单位】:吉林大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R742.5

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