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《吉林大学》 2007年
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重组人岩藻糖基转移酶Ⅶ过表达对胚胎植入影响的实验研究

张媛媛  
【摘要】: 着床过程中,胚胎滋养层细胞与母体子宫内膜上皮细胞间最初的分子识别和黏附是胚胎成功植入的关键。研究表明:子宫内膜上皮细胞表达选择素的寡糖配体唾液酸化Lewis x(sLex),可与胚胎表面的选择素特异性结合,并在介导胚胎着床的初始分子黏附过程中发挥重要作用。α1,3-岩藻糖基转移酶Ⅶ(FUT7)是细胞表面sLex合成的关键酶。FUT7基因的表达是影响sLex合成及调控合成水平的关键。本实验选用了人子宫内膜癌细胞(RL95-2)和人绒毛膜癌细胞(JAR)的体外胚胎着床模型,具有更能模拟在体着床的特性。通过观察重组人FUT7在RL95-2及JAR细胞内过表达对体外着床模型黏附以及FUT7在小鼠子宫内膜内过表达对在体胚胎着床的影响,探讨FUT7在胚胎植入中表达调控的机理。本实验采用RT-PCR方法从正常人白细胞中获得FUT7全长基因,构建以绿色荧光蛋白为报告基因的真核表达质粒pIRES2-EGFP-FUT7;对RL95-2及JAR细胞体外模型的双向识别特性进行了检测;以脂质体转染方式将表达质粒转染入RL95-2及JAR细胞,采用半定量RT-PCR、流式细胞和间接免疫荧光方法,检测FUT7及sLex表达的变化;分析FUT7/sLex表达变化对体外着床模型中胚胎黏附的影响;以及受孕小鼠宫角注射pIRES2-EGFP-FUT7后观察胚胎着床数的变化。通过以上的工作得出以下结果:本实验成功构建并鉴定了真核表达质粒pIRES2-EGFP-FUT7;检测到RL95-2与JAR细胞中均有L-选择素(L-selectin)及其配体sLex的表达,并且与黏附特性相关;FUT7过表达组与对照组相比,FUT7及sLex的表达均明显上调,且二者表达为正相关;体外黏附实验结果表明未经转染组JAR与RL95-2细胞的黏附率为69.7%,RL95-2细胞中转染FUT7后黏附率是84.3%,JAR细胞转染FUT7后黏附率上升为86.6 %,RL95-2与JAR细胞均转染FUT7后其黏附率明显增加为89.4%,sLex抗体(5μg/ml)封闭RL95-2细胞后,黏附率下降为35.3%。sLex抗体(5μg/ml)封闭JAR细胞后黏附率为33.9%。受孕小鼠在体实验宫角注射FUT7过表达组着床数也显著增高;根据以上结果得出结论:JAR及RL95-2细胞体外着床模型系统具有双向识别的特性;L-选择素及其配体sLex参与了JAR与RL95-2细胞间的双向识别;FUT7基因过表达能通过上调RL95-2及JAR细胞表面sLex的表达而提高体外着床模型中胚胎黏附率;FUT7基因过表达能促进在体胚胎的着床。对岩藻糖基转移酶表达及调控的研究不仅有助于寡糖在着床过程中作用机制的探讨,并将为利用糖生物学手段进行着床过程的干预提供新的思路和手段。
【学位授予单位】:吉林大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R363

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