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《吉林大学》 2007年
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猪源肺炎克雷伯菌菌毛致病的分子基础及其免疫相关抗原表位的筛选

贾艳  
【摘要】: 分离并鉴定了三株猪肺炎克雷伯菌,建立了PCR法检测肺炎克雷伯菌及其菌毛类型的分子诊断方法,为该菌的分子流行病学调查提供有效的研究手段。 优化了肺炎克雷伯菌菌毛在体外的高效表达条件:接种菌株到半固体培养基,挑取单克隆于少量改良Minca液体培养基中,37℃连续静置培养48h,经过三次连续传代培养可使菌毛充分在体外表达。 通过对肺炎克雷伯菌Ⅲ型菌毛结构基因、粘附基因的扩增,利用生物信息学技术分析,推测肺炎克雷伯菌Ⅲ型菌毛抗原多样性赖以产生的分子基础,可能是较多位点的突变,甚至是核苷酸、氨基酸的插入造成,也可能是个别关键位点上氨基酸突变所造成。 提取并纯化了肺炎克雷伯菌Ⅲ型菌毛,免疫家兔获得多克隆抗体,获得了效价达到1:64 000的多克隆抗体。利用纯化的多克隆抗体与健康兔血清免疫球蛋白对随机噬菌体12肽库进行了差减法筛选,对其菌毛上的抗原表位结合位点进行模拟,筛选到4个阳性噬菌体克隆,它们的氨基酸序列分别为:MPSLNNTESKLG,QKERTKSTPMTA ,MSQPTTNKMLLS,SKKRFPNTSFRQ。为设计和开发出高效的菌毛基因工程疫苗提供了重要依据,为深入研究菌毛在致病过程中所起作用奠定了理论基础。
【学位授予单位】:吉林大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:S858.28;S852.61

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