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乙型肝炎病毒(adr亚型)全基因组转基因小鼠的建立

王岚  
【摘要】: 本研究首先利用已有的adr亚型HBV全基因组与逆转录病毒载体连接构建正连重组质粒pLNCB及反连的重组质粒pLNCBR,鉴定正确后分别转染PA317细胞,包装出毒,进行正向及反向的鉴定后,扩大培养,浓缩病毒,分别选取正向及反向病毒滴度高的病毒,进行受精卵透明带注射构建HBV(adr)全基因组转基因小鼠。对HBV(adr)全基因组转基因小鼠进行PCR、Southern-blotting检测,结果显示:本实验获得了HBV(adr)全基因组转基因小鼠,阳性率为8.7%。同时对HBV(adr)全基因组转基因小鼠进行乙型肝炎病毒标志物ELISA及肝脏、肾脏组织进行了病理、免疫组化(HBsAg、HBcAg)等检测。实验结果表明,构建的转基因小鼠可以传代,血液检测出现HBsAg阳性,病理检测肝脏出现点状坏死或灶状坏死;免疫组化结果表明,在肝脏及肾脏中均出现HBsAg及HBcAg的表达。


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