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《吉林大学》 2007年
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DIM增强顺铂抑制PC-3细胞增殖及诱导凋亡的效应

马波  
【摘要】: 目的:本实验研究3,3-二吲哚基甲烷(3,3-diindolylmethane ,DIM)和顺铂(Diaminodichloride Platinol,DDP)联合作用于人前列腺癌PC-3细胞,观察其抑癌疗效,以期DIM能提高DDP疗效,降低DDP用药剂量而减轻其毒副作用,形成安全、有效和稳定的联合用药方式,用于前列腺癌的临床治疗。 方法:实验分组:溶剂对照组,高剂量组(DDP、DIM单独用药各为:4mg.L~(-1),120μmol.L~(-1);联合用药:0.4 mg.L~(-1)DDP + 120μmol.L~(-1) DIM)、中剂量组(DDP、DIM单独用药分别为:2mg.L~(-1),60μmol.L~(-1);联合用组:0.4mg.L~(-1) DDP +60μmol.L~(-1)DIM)、低剂量组(DDP、DIM单独用药分别为:0.4 mg.L~(-1),30μmol.L~(-1);联合用药0.4 mg.L~(-1)DDP +30μmol.L~(-1) DIM)。利用MTT法检测用药后各组PC-3细胞增殖抑制情况;吖啶橙染色法观察用药后各组PC-3细胞凋亡状况;流式细胞术检测用药后各组PC-3细胞周期及凋亡峰变化;RT-PCR检测用药后各组P21、caspase-3及caspase-9 mRNA水平的表达;细胞免疫组化观察用药后各组PC-3细胞中caspase-3及caspase-9蛋白水平的表达。 结果:MTT法检测结果显示:与对照组相比,各剂量的DDP、DIM对PC-3细胞的生长均有抑制作用,并呈明显的剂量、时间依赖性;且0.4 mg.L~(-1) DDP +60μmol.L~(-1)DIM联合给药组细胞生长抑制率70.9%几乎达到单用4 mg.L~(-1)DDP处理组的细胞生长抑制率71.6%。说明DIM与DDP联合应用,产生了相当于10倍剂量DDP对PC-3细胞的增殖抑制效果;吖啶橙染色结果显示:各给药组均有多少不一的凋亡细胞,DDP与DIM联合用药组凋亡细胞数量明显增多。流式细胞术检测结果显示:DIM和DDP作用PC-3细胞72h后,在G1期前出现明显的凋亡峰,0.4 mg.L~(-1) DDP+60μmol.L~(-1) DIM联合给药组细胞凋亡率45.9%,几乎达到4mg.L~(-1) DDP单独用药组细胞凋亡率47%。说明DIM与低剂量的DDP联用,具有明显协同诱导前列腺癌细胞凋亡作用。RT- PCR检测结果显示:与对照组相比各用药组P21、Caspase-3、Caspase-9表达均表现不同程度地增强,且DIM与DDP联合用药组的表达明显高于DDP单独用药组。免疫组织化学染色结果显示:各给药组PC-3细胞中caspase-3及caspase-9蛋白表达阳性,且DIM与DDP联合给药组Caspase-3、Caspase-9的表达明显高于单独用药组。 结论:DIM、DDP无论单独使用还是联合应用均可程度不同地抑制PC-3细胞增殖,并诱导其凋亡。且DIM与低剂量DDP联合应用可以达到10倍剂量DDP单独抗癌效果,说明二者合用可以减少DDP剂量而减轻其毒性,实现协同抗癌疗效。DIM、DDP抑制PC-3细胞增殖的机制可能与上调PC-3细胞中P21基因表达有关。DIM、DDP诱导PC-3细胞凋亡与其促进线粒体释放凋亡启动因子,激活Caspase-9、Caspase-3相关。 DIM联合DDP抗癌可以减轻顺铂的毒副作用和肿瘤的耐药性,使DDP的应用更具安全性和广泛性。
【学位授予单位】:吉林大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R737.25

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【参考文献】
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