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《吉林大学》 2008年
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蛋白质酪氨酸磷酸酶MEG2的纯化表征及其多克隆抗体的制备

付义亮  
【摘要】: 为了研究PTP-MEG2的催化结构域在细胞信号转导中的功能,我们以含有PTP-MEG2全长基因的质粒为模板,克隆了PTP-MEG2催化结构域基因△MEG2,构建了pT7-△MEG2质粒,测序后结果正确。通过转化克隆宿主大肠杆菌DH5α进行扩增后,再转化表达宿主大肠杆菌Rosetta DE3,进行PTP-MEG2的高效表达,并利用正离子交换柱和负离子交换柱纯化该蛋白质,得到了纯化后的PTP-MEG2蛋白,并具有较高的比活。再对纯化后的PTP-MEG2蛋白进行表征,得到其酶促反应的最适温度,最适离子强度,最适PH值。对PTP-MEG2蛋白的稳定性进行研究,测得其Km值。利用纯化后的蛋白对家兔进行免疫,来制备PTP-MEG2的多克隆抗体,并利用“PVDF固定抗原亲和层析法”对其多克隆抗体进行纯化,以期得到纯度、效价及灵敏度较高的PTP-MEG2抗体,为以后对其在细胞中的生理功能和组织分布的研究打下良好的基础
【学位授予单位】:吉林大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:Q55

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