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《吉林大学》 2008年
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男性人乳头瘤病毒基因芯片检测方法的建立及临床应用

金玉姬  
【摘要】: 本课题的目的是建立一种适合临床男性人乳头瘤病毒(HPV)基因亚型检测的新方法,同时选择一种易于采集、提高男性HPV阳性检出率、适合基因膜芯片法的标本类型,并对深圳计划生育门诊中男性HPV感染的流行型别和分布状况进行检测分析。 通过计算机辅助,参考经典通用引物(MY09/11)和加以改进的PGMY09/11设计23种HPV基因亚型的PCR扩增引物,根据Genbank中的HPV的型特异性序列设计及合成探针,制备可同时对18种高危型:HPV-16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 73, 83, MM4和5种低危型:6, 11, 42, 43, 44进行分型检测的特定纸质膜芯片。 通过PCR反应,经过PCR产物与HPV膜条(探针条)杂交、显色后,HPV膜条的PC点显示蓝点才是有效膜条,根据其他蓝点显示位置判读HPV基因亚型(单一感染和多重感染)。对膜杂交结果显示单一亚型感染的阳性PCR产物纯化后进行测序。 各型HPV检测段DNA的克隆质粒进行pGEM-T载体构建。重组质粒通过T7启动子引物测序,并与该亚型HPV基因组序列进行比对,以确定构建质粒中所含的各型HPV片段与检测序列完全相同。 将经过工程菌扩增的重组质粒提纯后,应用紫外分光光度计测定核酸浓度,用Tris-HCl配制成106拷贝/ml的原始标准品,再将原始标准品稀释成不同浓度的HPV标准品,通过PCR方法、经杂交、显色后,以确定HPV分型的灵敏度。同时,检测对比男性尿道分泌物、精液及尿液三种类型标本。 得出以下结论:①本课题建立的男性人乳头瘤病毒(HPV)基因亚型检测方法具有灵敏度高、特异性好、实验程序简便、采样方便、易于设定正常对照等优点,适用于临床进行男性HPV感染的诊断,为开展相应的流行病、病因学调查提供切实可行的检测手段。②检测出的男性HPV基因亚型有:HPV-6,11,16,18,33,35,43,56和73型九种。灵敏度可达10个拷贝HPV DNA分子。③临床应用中发现深圳男性HPV检测阳性率是22.3%,男性HPV感染最常见的基因亚型是6、16和73型。就诊的男性中以31岁~40岁的年龄组最多,其次是21岁~30岁年龄组,但发现深圳男性HPV的感染与年龄无相关性。④多重HPV感染中,以双重感染33/73型感染最多,高危型和低危型混合感染最常见。⑤确定临床常规检测男性HPV感染采用尿道分泌物做为采集部位和标本具有较高的敏感性,并且采样相对简便、易行。 本研究主要创新: 同时可以检测23种HPV基因亚型是本研究的创新点,HPV基因芯片法使得临床对HPV亚型检测达到微型化、集约化和标准化,从而保证了诊断的高效、廉价、快速和简便。
【学位授予单位】:吉林大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:R450

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前4条
1 卢五迅;程通;李少伟;潘晖榕;沈文通;陈毅歆;张涛;郑舟;张军;夏宁邵;;人乳头瘤病毒16型假病毒中和实验的建立和初步应用[J];生物工程学报;2006年06期
2 危敏;马文丽;李凌;张宝;郑文岭;;人乳头瘤病毒芯片寡核苷酸探针的研究[J];微生物学通报;2006年02期
3 颜丹;陈正君;颜海婴;熊伟;李燎;;荧光定量聚合酶链反应检测人乳头瘤病毒的实验研究[J];现代预防医学;2006年11期
4 齐淑贞;王千秋;谈玉;沈艳;李波;陈淑丽;程刚;秦红友;尤志学;周兵斌;;测序法及液相芯片杂交法对生殖道人乳头瘤病毒感染分型的比较[J];中国医学科学院学报;2007年02期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 曾跃斌,钱元恕;人乳头状瘤病毒感染与恶性肿瘤的关系[J];癌变.畸变.突变;2005年05期
2 赵月萍,马明英,王建军,谢东,任军;一起爆发型柯萨奇病毒性脑炎的病原分离与鉴定[J];安徽预防医学杂志;2001年06期
3 赵月萍,周淑洁,唐继海,罗光焘,潘福龙,夏志才,覃德芹;腮腺炎病毒抗体检测在腮腺炎并发脑膜脑炎诊断中的应用[J];安徽预防医学杂志;2003年06期
4 李国兰;郭玲;李治悦;卜戈;于昌军;张威;杨帆;李建国;王伟;;RT-PCR法在快速检测肠道病毒71型(EV71)核酸中应用[J];安徽医学;2008年04期
5 刘辉;潘家华;;EV71感染临床特点及治疗进展[J];安徽医学;2008年04期
6 江杨帆;刁慧敏;周秀红;何素冰;吴纳新;盛晓蓉;;射岑含片体外抗腺病毒3型作用的实验研究[J];安徽医学;2010年09期
7 顾建华;;百贝宁治疗婴幼儿轮状病毒肠炎[J];安徽医药;2007年01期
8 张宝华;;重组人干扰素a2b治疗流行性腮腺炎临床观察[J];安徽医药;2008年12期
9 夏仁飞;周迎春;黄海军;;番石榴叶水煎液及其总黄酮抗轮状病毒作用研究[J];安徽中医学院学报;2009年03期
10 陈晓琦,曹涛,王继麟,徐葛林;单克隆抗体在呼吸道合胞病毒感染诊断和防治中的应用[J];氨基酸和生物资源;2004年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 韩金乐;贾继宗;李川;杨亮;何德磊;李娟;叶祥忠;李益民;;肠道病毒71抗原ELISA定量检测方法构建及其应用[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年
2 方美玉;任瑞文;刘建伟;;我国甲病毒的研究进展及其预防[A];新发和再发传染病防治热点研讨会论文集[C];2009年
3 戚鹏;韩金祥;鲁艳芹;王传玺;栾中华;卜范峰;;病毒编码的miRNAs:基因表达新的调控因子[A];山东省药学会2006年生化与生物技术药物学术研讨会论文集[C];2006年
4 刘悦越;刘艳;谷金莲;于洋;国泰;;血清抗轮状病毒IgA诊断试剂的研制[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年
5 周伯平;刘威龙;谢靖婧;陈心春;徐六妹;谭艳;刘映霞;杨桂林;;肠道病毒71型重组VP1蛋白的表达和EV71型手足口病血清学诊断方法的建立[A];全国第2届中西医结合传染病学术会议暨国家中医药管理局第1届传染病协作组会议论文汇编[C];2008年
6 刘兆梅;温瑞兴;马洪涛;;中药青龙爪抗HIV-1病毒的实验研究[A];中华中医药学会防治艾滋病学术研讨会暨2006年年会论文集[C];2006年
7 袁斌;任现志;孙轶秋;邹建东;赵长江;刘光陵;陈吉庆;赵德育;徐玲;;清肺口服液治疗小儿呼吸道合胞病毒肺炎166例临床研究[A];第25届全国中医儿科学术研讨会暨中医药高等教育儿科教学研究会会议学术论文集[C];2008年
8 傅燕;高红;刘健毅;;宁波地区婴幼儿轮状病毒VP7序列分析[A];2007年浙江省医学病毒学、医学微生物与免疫学学术年会论文汇编[C];2007年
9 张丽荣;;珠海市多起连续发生的乙型流感疫情的病毒HA1基因分析[A];新发传染病研究热点研讨会论文集[C];2012年
10 赵连红;;手足口病流行病学及防治研究进展[A];第十四届全国感染药学学术会议论文汇编[C];2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 郑毅;利用酵母双杂交技术研究流感病毒NS2蛋白与宿主蛋白的相互作用[D];华中农业大学;2010年
2 卢士强;甲型H1N1流感病毒NS1蛋白在大肠杆菌中的表达、抗体制备及在血清学检测中的应用[D];南京医科大学;2009年
3 张绍丽;河南省2008年手足口病病原体(EV71)分离株全基因组序列[D];郑州大学;2010年
4 于贺娟;肠道病毒71型荧光RT-PCR检测方法的建立及评价[D];郑州大学;2010年
5 殷坚;秦香颗粒对人轮状病毒致感染乳鼠血清IFN-γ、IL-2的影响研究[D];湖南中医药大学;2010年
6 雷红娟;肠道病毒71型H6株在Vero细胞上的传代适应[D];河南师范大学;2010年
7 费永亮;新疆地区人群乙型肝炎病毒基因型的初步研究[D];新疆农业大学;2010年
8 岳锋;猪瘟病毒感染靶细胞的配体表位研究[D];河南科技学院;2010年
9 郭延锋;CSISV人工感染SPF雏鸡和商品肉仔鸡后免疫器官的细胞凋亡[D];河南科技学院;2010年
10 韩绪军;HCV核酸检测方法建立及药物靶点变异分析[D];昆明理工大学;2009年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前3条
1 程通,许辰煜,王颖彬,陈敏,吴婷,谢小燕,张军,夏宁邵;杆状病毒用于哺乳动物细胞快速高效表达外源基因的研究[J];生物工程学报;2003年05期
2 郭书萍,王永昌;FQ-PCR检测尖锐湿疣皮损中HPV-DNA[J];山西医科大学学报;2001年01期
3 陈焕英,陈享,聂金汉,汤军宏,邓微,林德儒,米宁;荧光定量聚合酶链反应检测人类乳头瘤病毒在尖锐湿疣中的应用[J];实用医学杂志;2005年03期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 田永强;朱中元;王海波;;人乳头瘤病毒线性杂交分型技术的建立及评价[J];中国实验诊断学;2010年03期
2 林敏;黄樾;林春萍;林芬;李文玉;彭幼鹏;杨立业;;沙眼衣原体与人类乳头瘤病毒感染的相关性研究[J];分子诊断与治疗杂志;2011年04期
3 孟晓峰;李晓雯;;洛阳地区女性人乳头瘤病毒感染及基因分型情况调查[J];郑州大学学报(医学版);2011年01期
4 谢含芸;;宫颈瘤变程度与其相对应的HPV基因型分布规律的研究[J];中国优生与遗传杂志;2011年05期
5 宋克娟;戴淑真;罗兵;孔守芳;;宫颈上皮内瘤变组织中高危型HPV DNA的检测及意义[J];山东医药;2006年24期
6 党倩丽;陈超;杜篷;杜艳华;冯捷;;人乳头瘤病毒基因分型液态芯片构建中的影响因素[J];第三军医大学学报;2009年01期
7 刘红杏;庞伟鸿;宁学玲;梁金明;;生殖道尖锐湿疣患者HPV的基因分型检测及评价[J];检验医学与临床;2009年13期
8 王红旗;郭远瑜;汪敏;张国祥;;6868例妇科门诊病人HPV感染状况及基因型分析[J];中国卫生检验杂志;2010年05期
9 蓝柳燕,陈林兴,陈曼丹,林漫燕;450例妇女人乳头瘤病毒基因分型的检测及其临床意义[J];汕头大学医学院学报;2005年03期
10 汤福想;刘玉玲;王会娟;;妇女宫颈HPV感染及基因亚型分布[J];实用预防医学;2010年09期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 齐凤菊;徐钤;黄扬中;;用反向点杂交法诊断生殖道肿瘤中HPV的基因型[A];中国抗癌协会妇科肿瘤专业委员会第六次全国学术会议论文汇编[C];2001年
2 汤晓飞;欧阳喈;高木实;;成釉细胞瘤中人乳头瘤病毒HPV16和HPV18感染的检测[A];中华口腔医学会第七届全国口腔病理学术会议论文摘要汇编[C];2006年
3 邹媛;郭兴中;方国伟;;1184例男性人乳头瘤病毒分型检测结果分析[A];中华医学会第八次全国检验医学学术会议暨中华医学会检验分会成立30周年庆典大会资料汇编[C];2009年
4 高英堂;张爱华;边鹊桥;刘彤;王鹏;景丽;沈浩;;应用基因芯片技术对人乳头瘤病毒(HPV)进行基因分型检测[A];天津市生物医学工程学会2004年年会论文集[C];2005年
5 夏明玉;朱文元;陆锦玉;范卫新;卢勤;陈雷;;外耳道乳头瘤超微结构和乳头瘤病毒DNA检测[A];第八次全国电子显微学会议论文摘要集(Ⅰ)[C];1994年
6 汪桂范;尹文;;包皮炎与宫颈炎患者人乳头瘤病毒的检测[A];中国性学会成立十周年首届中国性科学高级论坛论文汇编[C];2004年
7 张碧源;;宫颈癌防治与人乳头瘤病毒(HPV)检测新技术[A];首届沪浙妇产科学术论坛暨2006年浙江省妇产科学学术年会论文汇编[C];2006年
8 陆晓东;朱以军;袁青;郑雅萍;徐瑞龙;;金华市HPV感染患者调查及其亚型分布分析[A];2009年浙江省检验医学学术年会论文汇编[C];2009年
9 胡越;凌志强;刘洋;朱雪琼;;人乳头瘤病毒感染状态原发性宫颈癌细胞染色体DNA拷贝数变化特征[A];第四届长三角妇产科学术论坛暨浙江省2009年妇产科学术年会论文汇编[C];2009年
10 张慧敏;章晓鹰;潘祥龙;徐平;;SYBR Green实时荧光PCR方法在检测广谱人乳头瘤病毒中的应用[A];2011全国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 曾毅 刘晶华 沈季;吉林大学:用创新成就明天[N];光明日报;2004年
2 本报通讯员 卜立平 沈季 本报记者 朱振国;以人为本 润物无声[N];光明日报;2005年
3 新华社记者 马扬;吉林大学:教授不是“铁饭碗”[N];人民日报;2005年
4 卜立平;吉林大学医学部:学生可以转专业[N];健康报;2006年
5 秦抒 田园 本报记者 金姝;叶对根的深情[N];吉林日报;2006年
6 记者 刘怀 金姝 姜楠;吉大庆祝合校六周年建校六十周年[N];吉林日报;2006年
7 于洪涛;情系学子谱新篇[N];人民邮电;2006年
8 新讯;美研究人员称男性也应注射宫颈癌疫苗[N];医药经济报;2006年
9 卜立平;建精品基地 重人才培养[N];中国教育报;2005年
10 本报记者  曾毅;构建大学的道德磁场[N];光明日报;2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 金玉姬;男性人乳头瘤病毒基因芯片检测方法的建立及临床应用[D];吉林大学;2008年
2 赵可佳;CRT-HPV重组DNA疫苗和RNA干扰技术对HPV的抑制作用研究[D];浙江大学;2006年
3 梁思;人乳头瘤病毒相关皮肤病发病机制研究[D];中国协和医科大学;2010年
4 李建红;沙眼衣原体高分辨率溶解曲线基因分型方法的建立及其在男男性行为者流行病学调查中的应用[D];北京协和医学院;2010年
5 姜晓颖;北京地区结核分枝杆菌基因分型及与耐药性关系的研究[D];北京市结核病胸部肿瘤研究所;2012年
6 魏昕;老年口腔念珠菌的分布及生物学研究[D];四川大学;2005年
7 米霞;尖锐湿疣患者宫颈高危型人乳头瘤病毒感染情况的调查及人乳头瘤病毒临床和亚临床感染治疗的研究[D];北京协和医学院;2012年
8 陈山;喇嘛洞墓地三燕文化居民人骨研究[D];吉林大学;2009年
9 邓艳琴;结核分枝杆菌基因分型及异烟肼新耐药突变位点的确认研究[D];福建医科大学;2009年
10 刘文杰;特应性皮炎中医辨证分型与HLA-DR基因的相关性探讨[D];广州中医药大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 沈柱;外阴白斑组织中人乳头瘤病毒的快速检测与基因分型[D];第四军医大学;2002年
2 张东红;人乳头瘤病毒在食管癌中的感染及整合状况研究[D];汕头大学;2008年
3 邵为荣;重组人干扰素α2b阴道泡腾片对宫颈糜烂治疗的相关病毒学实验研究[D];吉林大学;2006年
4 徐光;吉林地区丙型肝炎病毒基因分型的临床研究[D];吉林大学;2008年
5 郑琳琳;探针编码实时PCR的基因分型研究[D];厦门大学;2006年
6 杨国溜;人乳头瘤病毒基因分型在子宫颈病变筛查中的应用[D];重庆医科大学;2010年
7 彭春梅;液相芯片技术在人乳头瘤病毒基因分型检测中的应用研究[D];南方医科大学;2011年
8 卢五迅;人乳头瘤病毒假病毒中和模型的建立和应用[D];厦门大学;2006年
9 王丽纳;应用RAPD对申克孢子丝菌线粒体类别进行4型内及种群分析[D];中国医科大学;2007年
10 谭磊;基于PCR的牛源金黄色葡萄球菌基因分型研究[D];黑龙江八一农垦大学;2008年
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