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《吉林大学》 2009年
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高质量基因重组蛋白在屠宰动物旋毛虫病诊断中的应用

于申业  
【摘要】: 由于旋毛虫天然蛋白的非特异性以及来自不同发育时期单一抗原在诊断范围上的局限性,长期以来快速、特异、敏感的免疫学检验(诊断)方法无法在屠宰动物旋毛虫病的检验与诊断中得以应用。为了解决这一难题,本研究首先选取不同文库中高丰度且具有较强抗原性的四个代表性基因Ts-clp、Ts-serpin、Ts-sp-T668和Ts-sp-ZH68,利用SYBR Green染料法实时荧光定量RT-PCR对四个不同发育时期抗原基因在旋毛虫生活史中的转录水平进行鉴定,利用免疫荧光与组织化学技术对Ts-clp、Ts-serpin和Ts-sp-ZH68抗原基因在旋毛虫生活史中的表达特性进行鉴定,探讨四个不同发育时期抗原基因作为诊断抗原基因的可能性,为深入研究旋毛虫的自身发育、宿主侵入、免疫逃避及包囊形成机制奠定了基础。结果表明,四种基因的转录均具有期特异性:Ts-clp与Ts-serpin抗原基因在旋毛虫不同发育阶段均有转录,但转录水平有明显差异,Ts-sp-T668在ML中未检测到转录信号,而Ts-sp-ZH68在NBL时期未检测到转录信号;四种基因的表达均具有时空特异性:Ts-clp主要表达于成虫与肌幼虫时期虫体的β-杆状体细胞,Ts-sp-ZH68在尾静脉注射感染后的早期(16d)即特异性的作用于宿主肿大的肌细胞核仁,Ts-serpin主要表达于成囊后期的虫体,但在包囊形成之时特异性的作用于宿主肿大的肌细胞核质。继而,对Ts-sp-T668的主要抗原表位区进行优化表达,得到Ts-sp-T668H重组蛋白,确证了该抗原基因的反应原性主要来自于此段C-末端亲水区。最后,以Ts-sp-T668H、Ts-clp和Ts-serpin的纯化重组蛋白为抗原,建立了检测猪旋毛虫病无盲区的抗体捕获间接ELISA方法,很好的覆盖了感染后14-19d的免疫学诊断盲区,解决了先前所用的抗原存在诊断盲区的难题。
【学位授予单位】:吉林大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:S855.9

【参考文献】
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