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双特异性抗肿瘤重组腺病毒的构建、鉴定及实验免疫

李霄  
【摘要】: 本研究利用分子生物学、病毒学和免疫学等技术和手段,旨在探索抗肿瘤过程中存在的安全性和有效性问题。首先,通过同源重组方法构建了分别含有肿瘤特异性启动子hTERTp、PEG3p和特异性抑癌基因HN、Apoptin的双特异性重组腺病毒:Ad-VT、Ad-VP、Ad-HT、Ad-HP;同时构建了表达EGFP基因的对照重组腺病毒病毒:Ad-GT、Ad-GP。通过一系列实验研究证明,所获得重组腺病毒性状稳定,形态完整、增殖性能未受影响。 本研究采用MTT染色、AO/EB染色、流式细胞术等方法检测了重组腺病毒感染对A549肺癌细胞的抑制作用。结果表明,Ad-VT、Ad-VP、Ad-HT、Ad-HP均可不同程度地抑制体外培养的A549肿瘤细胞。利用Annexin V染色、DAPI染色、Caspase活性检测等方法探讨了所构建重组腺病毒致A549细胞死亡的方式。结果表明,Ad-VT、Ad-VP、Ad-HT、Ad-HP主要以诱导凋亡的方式抑制体外培养的A549肿瘤细胞。 本研究复制了C57BL/6小鼠荷小鼠肺癌(LLC)肿瘤模型,探讨了所构建双特异性抗肿瘤重组腺病毒对体内实体肿瘤的抑制作用。实验结果显示,Ad-VT、Ad-VP、Ad-HT、Ad-HP均可不同程度地抑制实体肿瘤的生长,提高荷瘤动物模型生存率,延长荷瘤动物模型生存期。另外,Ad-HT、Ad-HP还可以刺激产生抗肿瘤免疫反应。 上述研究为研制安全、高效的抗肿瘤制剂奠定了基础,并为揭示HN、Apoptin的抑瘤和免疫调控机理提供了参考数据。


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