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基于表面增强拉曼散射的蛋白质检测方法研究

韩晓霞  
【摘要】: 本论文将表面增强拉曼散射(SERS)技术与传统的生物学方法结合,建立了几种基于SERS的蛋白质检测方法,包括非标记多蛋白质检测、SERS标记的免疫吸附试验、蛋白质及其配体相互作用检测等。 主要创新性研究成果如下: (1)首次利用蛋白质和金属纳米粒子自组装SERS活性基底。在固相基质上先组装好蛋白质或蛋白质和其配体的复合物,然后再依靠蛋白质和金属纳米粒子间的相互作用形成SERS基底。该方法最大的特点是依靠待检测蛋白质组装SERS基底,组装好的基底反过来用于这些蛋白质的测定。 (2)通过SERS与蛋白质印迹技术的结合,建立了一种非标记多蛋白检测方法。电泳和印迹技术的利用使一张固定化膜上多蛋白检测成为可能,而SERS的应用大大提高了检测灵敏度。此外,利用酸化的硫酸盐作银聚集剂,首次在溶液中实现了大浓度范围内、高灵敏度非标记蛋白质检测。 (3)将SERS技术与酶联免疫吸附技术结合,利用SERS探针代替酶促反应底物,以表面增强共振拉曼散射(SERRS)检测取代吸光度检测,首次建立了基于SERRS的免疫吸附试验,该方法操作步骤简单,灵敏度高。另外,将银染和SERS技术应用到蛋白质芯片检测体系中,在蛋白质介导形成的SERS活性基底上获得了SERRS和表面增强荧光,很大程度上提高了检测灵敏度和光稳定性。 (4)建立了以金-蛋白质-银三明治结构作为SERS基底的非标记蛋白质鉴定和药物筛选、标记免疫检测技术。利用这种三明治结构得到的SERS兼顾金银两种基底在光谱重现性和灵敏度方面各自的优越性。


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