VSV糖蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建和初步鉴定

【摘要】： 水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)属弹状病毒科水泡病毒属,为单股负链RNA病毒,具有囊膜,是引起人和多种哺乳动物水泡性口炎(Vesicular stomatitis,VS)的重要病原。VSV感染人或动物后主要以口腔粘膜、舌、唇、乳头和蹄冠部上皮等部位出现水泡为特征,其临床症状与口蹄疫(FMD)、猪水泡病(SVD)等极为相似,因此在兽医临床上容易引起误诊。VSV可感染多种细胞系,并引起明显的细胞病变。目前认为VSV感染宿主细胞首先是病毒吸附蛋白(VAP)与敏感细胞表面的特异性受体相结合,二者相互作用介导病毒内化并促进病毒感染。因此,深入探讨VSV感染发病的分子机制,明确其细胞表面受体性质,对水泡性口炎的预防和治疗有着十分重要的意义。研究资料提示,VSV的病毒吸附蛋白主要存在于病毒囊膜糖蛋白中,可介导病毒与宿主细胞膜受体产生特异性结合反应。本研究通过扩增VSV-G蛋白基因,构建酵母双杂交诱饵质粒pSos-VSV-G1243,测序结果表明插入的诱饵序列正确;将诱饵质粒单独转化cdc25H酵母感受态,酵母生长良好,表明该诱饵对酵母菌株无毒性作用;挑取转化有诱饵质粒的酵母菌落摇菌提取全蛋白,进行SDS-PAGE、Western blot印迹分析,结果证明该诱饵质粒能够在酵母细胞中表达融合蛋白;通过将诱饵质粒和对照质粒做酵母共转化实验,同时设对照组,结果表明该诱饵质粒无自激活作用;上述实验结果表明该诱饵质粒可以应用于SOS恢复系统(SRS),为下一步筛选能够与水泡性口炎病毒糖蛋白发生特异性结合的可能受体奠定基础。