鼠肝中金属硫蛋白（MT）纯化工艺的研究

【摘要】： 金属硫蛋白(metallothionein, MT)是一种富含金属(Zn、Cu、Cd、Hg等)和半胱氨酸的低分子质量的蛋白质,广泛地存在于各种生物体中,如各种微生物,高等动、植物和人类的各种组织、器官。MT的理化特点为MT的提取纯化提供了理论依据。MT的提取方法包括经典提纯方法和加热法。经典方法主要是根据样品中杂蛋白分子大小及脂肪成分实现逐步分离。而加热方法依据MT构象坚固、耐热、耐酶解的理化特性,主要依靠加热过程来去除大分子杂蛋白。提取到粗品后进行纯化最常用的方法是凝胶过滤和离子交换技术相结合的层析法。本研究通过方法改进,获得正常大白鼠肝脏中的MT,通过对洗脱条件进行反复摸索,确定了最佳的洗脱液离子浓度、洗脱速度、洗脱体积,对粗品进行分离纯化的同时实现了MT1、MT2两亚型的分离;本研究同时证明改进的提纯技术在其他组织、种属的适用性;通过原子吸收测定,粗品中含有锌、铜、镉三种金属元素,以锌元素含量为主:Zn(0.176+0.035μg/g)、Cu(0.093+0.026μg/g)、Cd(0.012+0.001μg/g)。另外,大鼠肝脏中所含Zn、Cu含量与MT中该两种金属的含量有统计学差异,而Cd含量无统计学意义,差异不显著。 目前大部分研究已充分肯定了MT重要的生理功能,本研究主要基于经典的蛋白提取理论及技术,根据MT具有的理化特点对其分离纯化技术进行探讨,MT的提取和纯化将对工业化生产、疾病预防及临床诊疗具有重要意义。