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《吉林大学》 2010年
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肿瘤—睾丸抗原TSP50和Pax6的表达研究

黄宇  
【摘要】: 本研究通过免疫组织化学染色方法,进一步证明TSP50的肿瘤-睾丸抗原特性;应用CpG岛甲基化位点的直接测序法,探讨启动子甲基化水平对TSP50表达的作用机制;甲基化敏感代表性差异分析法与CpG岛基因芯片技术相结合,分离、鉴定新的肿瘤-睾丸抗原。 本研究通过免疫组织化学染色发现肺癌TSP50蛋白表达的阳性率89%;胃癌TSP50蛋白表达的阳性率88%;肝癌TSP50蛋白表达的阳性率87 %;结肠腺癌TSP50蛋白表达的阳性率94 %;前列腺癌TSP50蛋白表达的阳性率71%。同时还发现少部分肿瘤组织边缘或远隔的正常组织中也有少许的TSP50蛋白表达。通过CpG岛甲基化位点的直接测序法,检测了人正常睾丸组织、正常乳腺组织、乳腺癌组织、激光显微切割的乳腺癌组织和不表达TSP50蛋白的人精原细胞瘤细胞系细胞以及分离的鼠精原细胞、精母细胞和精子细胞的TSP50启动子区域CpG岛甲基化位点的甲基化水平。结果表明TSP50蛋白阳性的组织,其启动子区域CpG岛甲基化位点的甲基化状态处于较低的水平。激光显微切割的乳腺癌肿瘤细胞较单纯的乳腺癌组织其甲基化水平要更低一些。 本研究将甲基敏感差异分析技术与CpG岛基因芯片技术结合起来,将正常乳腺组织、乳腺癌组织和睾丸组织的基因组DNA用甲基敏感的限制性内切酶HapⅡ酶切,正常乳腺组织和乳腺癌组织为一组,正常乳腺组织和睾丸组织为一组,分别进行CpG岛基因芯片杂交。在结果中选择了具有显著差异的103-E-5(CpG岛),发现103-E-5的附近存在有Pax6。通过RT-PCR检测了pax6的mRNA在正常组织中的表达情况,结果发现Pax6的mRNA仅表达在正常的睾丸组织、脑组织和神经组织中。进一步检测发现Pax6的mRNA在乳腺癌细胞系有表达。通过免疫组织化学染色发现在正常乳腺组织中不表达Pax6蛋白,正常睾丸组织中表达Pax6蛋白,乳腺癌组织中也表达Pax6蛋白。荧光素酶报告载体检测103-E-5(CpG岛)处的基因序列具有启动子活性。 综上所述,本研究从蛋白质水平进一步证明了TSP50是多种肿瘤组织都表达的一类肿瘤-睾丸抗原;TSP50启动子区域CpG岛甲基化位点的甲基化水平对TSP50的表达具有重要的作用;Pax6是一种新的肿瘤-睾丸抗原,深入研究其功能将会为肿瘤的免疫治疗或靶向治疗提供新的思路。
【学位授予单位】:吉林大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R730.2

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